牛乳检验方法20030305

内蒙古伊利集团股份有限公司液态奶事业部生鲜牛乳检验方法文件汇编（试行）编号：YLYT-ZG/1-JY-78[1・0]伊利液态奶事业部质管处感官指标1） 车体感官2） 牛乳感官2・理化指标1） 脂肪含量的测定2） 蛋白质含量的测定3） 全乳固体含量的测定4） 非脂乳固体含量的测定5） 酸度的测定6） PH值的测定7） 杂质度的测定8） 收奶温度的测定9） 酒精实验10）煮沸实验3・掺假检测1） 盐2） 蔗糖3） 尿素4） 食碱5） 硝酸盐、亚硝酸盐6） 硫酸盐7） 饴糖（糖稀）及葡萄糖8）米汤、淀粉类9）豆浆、豆饼水

4・卫生指标的测定1） 细菌总数2） 耐热芽孢的测定3） 芽孢总数的测定4） 嗜冷菌总数的测定5） 乳房炎乳检测6） 体细胞的检测7） 抗生素的测定8） 硝酸盐、亚硝酸盐（定量法）起草：李志君 审核审批：李印所 日期：孙秀芝2003.3.3感官指标检验一、 车体感官奶罐口密封严密，且使用食品级橡胶圈，胶圈干净，禁止用泡沫类、编织袋等物品密封罐口。用肉眼观察及用手触摸其罐口、罐内壁及罐出口，是否有奶垢、奶油及其它赃物。二、 牛乳感官1.色泽观察奶车中的牛乳，正常色泽为乳白色或微带黄色，如带有红色、绿色或明显的黄色，则不合格（如果奶车中观察不清楚，则采样后进行观察）。取生鲜牛乳样品放于白色平盘中，在自然光下观察牛乳色泽是否为乳白色或稍带黄色。滋气味打开奶罐口盖时，闻是否有酸味、牛粪味、牛舍味和强烈的腥、膻味等异常气味，如有则不合格。取牛乳50ml于250ml三角瓶中置电炉上煮沸，将瓶口与鼻子之间的距离10cm左右，用手扇动瓶口上方的气体，使空气吸向自己闻是否有乳香味或其他异味、臭味。冷却至15°C时品尝，是否稍带甜味，有无其他异味。组织状态观察奶车中牛乳，是否有凝块、煤屑、豆渣、牛粪和昆虫等肉眼可见杂质，如有则不合格。理化指标检验一、脂肪含量的测定方法一(基准法)罗兹一哥特里法(GB6914—86)原理用氨水处理牛乳，使酪蛋白钙盐成为可溶性的盐类，促进脂肪球-乙醚的作用；加入乙醇，使一系列的能被酒精浸出的物质留在水相中。利用乙醚将脂肪从牛乳中抽出，加入石油醚使乙醚不被水饱和。将醚层倾入脂肪收集瓶中，挥发溶剂，则得出脂肪收集瓶中的样品中脂肪的含量。仪器设备分析天平：感量0.1mg鼓风式烘箱：箱内温度控制在102±2°C毛氏抽脂瓶及瓶塞毛氏抽脂瓶架脂肪收集瓶：250ml(150ml)锥形瓶刻度吸管：2ml、5ml、10ml、25ml量筒：25ml水浴锅试剂所用试剂都是分析纯，所用水为蒸馏水。氨水：NH的含量为25%3乙醇：体积分数为95%刚果红溶液：将1g刚果红溶于水稀释至100ml乙醚：分析纯石油醚：分析纯、沸程30—60oC混合醚：等体积乙醚和石油醚混合步骤脂肪收集瓶的准备：将干净的脂肪收集瓶在烘箱102±2°C中烘lh,取出后置于天平室内冷却至室温，要防止灰尘，称取脂肪收集瓶的质量，准确至O.lmg,称量时要带手套或使用夹子。样品的称取和抽提准备：用10ml吸管将样品移入一个干燥、洁净的小烧杯中,用减量法称取10-llg样品于毛氏抽脂瓶中，准确至0.1mg。加2m125%的氨水，在小球内混合均匀。加完氨水后，应将实验一直做完,不得停顿和延误。3.3空白试验：在测定的同时进行空白试验，用10ml水替代样品，其他同样品的测定。3.4加10ml乙醇混好，允许液体在小球和大柱间流动，只是要避免液体过于接近瓶口，加两滴刚果红溶液混合均匀。加25ml乙醚，塞紧塞后，两手分握抽脂瓶的两端，以相同位置和振幅摇混1min，小心地拔掉塞子，用少量混合醚淋洗塞子和瓶口，使淋洗液都流入瓶内。加25ml石油醚，塞紧塞子，再用两手分握抽脂瓶两端，以相同位置和振幅摇混0.5min，小心拔掉塞子，用少量的混合醚淋洗塞子和瓶口，使淋洗液都注入瓶内。将毛氏抽脂瓶置于支架上放置30min以上，至醚层和水层完全分开(或将加塞的抽脂瓶放入离心机中，在500-600r/min下离心1-5min)。拿住抽脂瓶的小球，小心并尽可能完全地将醚层倾入已称好重的脂肪收集瓶中，要避免将水层的液体倾入收集瓶中，用混合醚淋洗抽脂瓶口的外部，让淋洗液流入收集瓶中。3.9重复3.4-3.8的操作，进行第二次抽提，（加入量分别为5ml乙醇，15ml乙醚、15ml石油醚）3.10重复3.9中的操作，只是不再加乙醇，进行第三次抽提。3.11用混合醚淋洗脂肪收集瓶的瓶口和内壁后，将脂肪收集瓶中的乙醇和醚尽可能地挥发掉。3.12将脂肪收集瓶置于102±2°C烘箱中烘1h,在天平室冷却（防尘）1h后称量，然后再将脂肪收集瓶置于烘箱中烘0.5h，再冷却0.5h后称量，重复操作，直至两次称量的差值小于0.5mg。结果计算：计算公式：（脂肪含量以质量数表示）（m-m）（m-m）W= 1 2 3 4X100m式中：w—样品脂肪的质量分数，%m—称取的样品量，g0m—脂肪收集瓶和抽提出的物质的量，g1m—空脂肪收集瓶的重量，g2m—空白试验中收集瓶和抽提出的物质的量，g3m—空白试验中收集瓶的重量，g4方法二：仪器法（IDF141C：2000）仪器120型（或50型）全组分分析仪（需进行校准）、50ml烧杯方法取约40ml、20-40C过滤、混匀的牛乳样品于烧杯中，将烧杯放在全组分分析仪的吸样管下，选择相应的检测程序，按检测键，待显示屏出现检测结果时，即可读数。方法三：盖勃法（GB5409-85）原理用硫酸把乳制品中以酪蛋白的钙盐形态存在的酪蛋白转变为可溶性的重硫酸酪蛋白化合物与生成不溶性的硫酸钙，溶解脂肪球膜，把脂肪释放出来，加入异戊醇促进脂肪的分离；分离出的脂肪量可直接从乳脂计的刻度管中读取，或据脂肪柱读数计算出。仪器设备盖勃牛乳乳脂计：0-6刻度乳脂计架恒温水浴锅盖勃离心机10ml硫酸自动吸管1ml异戊醇自动吸管11ml牛乳吸管3试剂硫酸：比重为1.820T.825异戊醇：沸点128-132°C，比重0.8090-0.8115用硫酸自动吸管向牛乳乳脂计中加入硫酸10ml,颈口勿沾湿硫酸，用11ml吸管吸取牛乳样品至刻度，缓慢加入同一乳脂计内（注意不能与硫酸液面混合），再加入异戊醇1ml,加入蒸馏水调节液面（使脂肪柱适合乳脂计刻度部分），塞紧橡皮塞，充分摇动，使牛乳凝块溶解、无黑色颗粒。将乳脂计放入65-70C的水浴中保温5min，然后置离心机中以1200转/分的转速旋转5min，再放入65-70C的水浴中保温5min，取出立即读数，读数时要将乳脂肪柱下弯月面放在与眼睛视线同一水平面上，以弯月面下限为准。所得数值即为脂肪的百分数。注：（1）.如所用离心机有保温功能，可省去水浴保温的步骤。（2）.摇动时用布包住，乳脂计向外、向下，不要对着自己或他人，以免乳脂计破裂或塞子冲开，受到伤害。二、蛋白质含量的测定方法一（基准法）：半微量凯氏定氮法（具体见B/T5413.1-1997）原理：消化：样品中的含氮有机物经浓硫酸加热消化，硫酸使有机物脱水，然后，有机物炭化生成C；C将硫酸还原为SO,本身生成CO；SO使N还原为NH,2223本身则氧化为SO，而消化过程中生成的H,又加速了NH的形成。在反应过33程中，生成物水和SO逸出，而NH则与硫酸结合成硫酸铵，留在溶液中。33蒸馏：硫酸铵在碱性条件下，释放出氨。吸收和滴定：蒸馏过程中放出的氨用硼酸溶液吸收后，用硫酸标准溶液滴定，根据硫酸标准溶液消耗量计算出总氮量，进而算出蛋白质的含量。仪器：凯氏烧瓶：250ml（细长颈）蒸馏装置电子天平：精度为0.1mg试剂硫酸钾（分析纯）硫酸铜（分析纯）浓硫酸（分析纯）硫酸标液（c（H+）浓度为0.1mol/l）：取3ml浓硫酸加到15ml水中，冷却后洗入1000ml容量瓶中，定容、标定。400g/L氢氧化钠溶液30g/L硼酸溶液样品的称取液体乳：用减量法准确称取样品12-15g于凯氏烧瓶中，倾倒样品时要顺着连烧杯一起称重的小玻璃棒小心操作，尽量使样品不挂在凯氏烧瓶的颈口部。方法：4.1消化：在凯氏烧瓶中加入10g硫酸钾和1g硫酸铜，量取20ml浓硫酸，徐徐加入到凯氏烧瓶中，混合。置于有石棉网的电炉上加热（通风橱内进行）。一开始火要小，小心烧瓶内泡沫冲出而影响测定结果。当瓶内发泡停止，再加大火力。同时，分数次加入10ml过氧化氢溶液（加前须将烧瓶冷却），冲下瓶颈和瓶壁上的炭化颗粒。当烧瓶内容物的颜色逐渐变成透明的淡绿色时，继续消化0.5Th。转移：使消化好的样品冷却，沿瓶壁吹入少许水，混合，再逐渐沿瓶壁吹入少许水（防止剧烈沸腾，水迸出烧瓶），至烧瓶内液体的体积约60ml，沿玻璃棒将烧瓶壁内的液体倒入放有小漏斗的100ml容量瓶中，以水洗凯氏烧瓶多次，洗涤液沿玻璃棒倒入容量瓶中。冷却，定容。蒸馏：接好定氮装置，在水蒸汽发生瓶中装入2/3以下的水，加入数粒玻璃珠防止暴沸，加热煮沸水蒸汽发生瓶内的水，接通冷凝水。在接收瓶中加入50ml30g/L硼酸溶液和3滴混合指示剂，使冷凝器的出液端口位于接收瓶液面以下。将25ml消化液小心移入定氮器的蒸馏瓶中，再缓慢加入25ml400g/L氢氧化钠溶液，迅速塞好塞，并用水封好，通入蒸汽进行蒸馏。蒸至液面达150ml时，稍移动接收瓶，使出液口位于液面之上，流出的蒸馏液沿瓶壁流下，至接收瓶内液体达200ml时，用少量蒸馏水冲洗冷凝管的出液口，将冲洗液收集入接收瓶，拿开接收瓶，停止蒸馏。滴定：用硫酸标准溶液滴定接收瓶中溶液至酒红色。空白实验：在测定样品的同时，进行空白试验，即除不加样品外，其他过程和样品的测定一样。分析结果（V—V）Xc（H+）X0.014X6.380W= X100mX25/100式中：w—样品中蛋白质的质量分数，%V—滴定时消耗硫酸标准溶液的体积，mlV—空白试验消耗硫酸标准溶液的体积，ml0c（H+）—硫酸标准溶液中H+的浓度，mol/Lm—样品质量，g0.014—氮原子的摩尔质量,kg/mol6.38—氮换算为乳蛋白质的系数方法二（基准法）：凯氏定氮仪法仪器：凯氏定氮仪电子天平：精度为0.1mg试剂：10%氢氧化钠溶液（其它同半微量凯氏定氮法）测定步骤：3.1样品的称取：在消化管中分别加入0.5gCuSO、5gKSO（或厂家提供消化4 2 4药片），用减量法准确称取样品（原奶、纯牛奶4-5g，其它产品根据蛋白质的含量称取。）于消化管中，倾倒样品时尽量使样品不挂在消化管的颈口部。3.2消化：1） 在加好样品的消化管中加入15ml浓硫酸混合，放入消化器，盖紧。2） 打开消化器上的总开关，将加热旋钮调到6档。如果只用一组消化管，则将另一组加热旋钮关闭（拧到“OFF”并将排气口密封）。3） 当消化管中产生黑烟后，打开抽洗机开关（先把10%的氢氧化钠溶液加入吸收瓶中）。4） 当消化管中没有黑烟或黑烟很少时，将加热旋钮打到9-10档，继续消化。5） 当消化管中溶液变绿时，继续消化60-90分钟，停止加热（加热旋钮调到“OFF”，并关掉消化器上的总开关）。6） 不要关闭清洗器，直到消化管中不再冒烟时，将清洗器关闭。3.3蒸馏：1） 首先打开冷却水龙头，再打开蒸馏仪的开关，预热。2） 利用“UP”或“DOWN”键，将光标移至“PREHEATING（预热）”，再按“START”键，预热时间为2分钟。3） 预热完毕后，将光标移至“CIEANING”，按“START”键进行清洗。4） 清洗完毕后，将光标移至“DISTILLATION（蒸馏）”，按“ENTER”键。5） 设定板面上显示的项目，先将光标移至要设定的项目上，按“EDIT”键，然后按“UP”和“DOWN”键，以增减体积数，设定结束按“ENTER”键。6） 所有项目设定完毕后，放好接收瓶，并固定消化管，按“ENTER”键开始蒸馏。7） 蒸馏完毕后，按以上步骤蒸馏下一个样品，直到全部蒸馏完毕。按“ESC”键，回到最初的操作面板，将光标移到“CLEANING”键，按“START”键，进行清洗。4.4滴定：1） 打开电位滴定仪上的开关。2） 校准：连续按“MODE”键，直到屏幕显示MODE CAL再按“ENTER”键，屏幕显示CAL ******将一种缓冲溶液放在磁力搅拌器上，并放入磁子，把电极插入溶液中，打开开关。按“START”键屏幕显示cal.temp 25.0°C输入目前溶液温度，再按“ENTER”键，屏幕显示TOC\o"1-5"\h\zbuffer1PH 7.00输入在目前温度下缓冲溶液对应的PH值，然后按“ENTER”键屏幕会显示电压值，当其不变动时，屏幕显示buffer2PH 470F将电极放入第二个缓冲溶液中，并输入目前温度下的PH值，再按“ENTER”键，当电压值稳定后，屏幕显示PH(as)6.89slope0.985关闭搅 —注：框中数值为举例说明。测量按“MODE”键，直到屏幕显示如果屏幕显示的不是PH，请按“SELECT”键选择，直到显示PH,然后按“ENTER”键，屏幕显示SETPH ******b.按“PARAMETERS"键，屏幕显示>SETI按“ENTER”键，屏幕显示EPatPH OFF输入滴定终点eg.EPatPH 4.60然后按“ENTER”键dynamics OFF输入“2”，然后按“ENTER”键max.rate 10.0ml/min|按“ENTER”键min.rate 25.0ul/min再按“QUIT”键。将被测溶液放到搅拌器上，放入磁子，打开开关，按“START”键，开始滴定。滴定结束后，先关掉搅拌器，取出电极和滴定管，再关闭滴定仪上的开关。结果表述：样品中的蛋白质含量(g/100g)=(V-V)Xc(H+)X0.014X6.38/m0式中：V：滴定时消耗硫酸标准溶液得体积，mlV空白实验消耗硫酸标液的体积，ml0C(H+)：硫酸标液中H+浓度，mol/lm：样品的质量，0.014：氮原子的摩尔质量，kg/mol6.38:氮换算为乳蛋白质的系数注意事项：消化前检查抽洗机的碱液是否需要更换，管路、滤网是否堵塞。蒸馏前必须先打开冷凝水。蒸馏前检查蒸馏水、氢氧化钠、硼酸溶液是否够用。使用前校准电极，但每天蒸馏完毕后必须将电极浸泡在蒸馏水中。方法三：仪器法(引用于IDF141C：2000)仪器：120型(或50型)全组份分析仪、40ml烧杯方法取约40ml、20-40°C经过滤、混匀的牛乳样品于烧杯中，将烧杯放在全组份分析仪的吸样管下，选择相应的检测程序，按检测键，待电脑显示屏出现检测结果时，即可读数。三、全乳固体含量的测定方法一（基准法）：常压干燥法仪器设备电子天平：精度为0.1mg称量皿（铝皿或玻璃皿）：配有移动盖，直径为50-70mm，高度为25mm干燥器：配有有效干燥剂恒温干燥箱：可控制恒温在102±2C,烘箱中的温度应均匀恒温水浴锅10ml吸管试剂：海砂:适用性测试（1） 将约20g海砂同短玻璃棒一起放于一皿盒中，然后敞盖在102±2C烘箱中，至少干燥2h。把皿盒盖盖后放入干燥器中冷却至室温后称量，准至0.1mg.（2） 用5ml水将海砂润湿，用短玻璃棒混合海砂和水，将它们再次放入烘箱中烘4h。把皿盒盖盖后放入干燥器中冷却至室温后称量，准至0.1mg.两次称量的差不应超过0.5mg.（3） 如果两次称量的质量差超过0.5mg,则需对海砂进行下面的处理后，才能使用：让海砂在6mol/1的盐酸溶液煮沸30min,经常搅拌。尽可能地倾出上清液，用水洗涤海砂，直到不再有酸。再用6mo1/1氢氧化钠溶液煮沸30min,经常搅拌，用水洗涤海沙,直到不再有碱。然后重复进行适用伊利液态奶事业部生鲜牛乳检验方法性测试。步骤3.1取洁净称量皿，内加10.0g海砂及一根小玻璃棒，置于102±2°C烘箱中，干燥0.5-1.0h后取出，放入干燥器内冷却0.5h后称量，应重复干燥至恒重。3.2准确称取5g左右样品于称量皿中，用小玻棒搅匀放在沸水浴上蒸干，并随时搅拌。3.3将蒸干后的称量皿用滤纸搽净水垢置于102±2C烘箱中干燥3h后盖好取出，放入干燥器中，冷却至室温称重（准至0.1mg）。3.4再将称量皿置于102±2C烘箱中干燥0.5h后盖好取出，放入干燥器中，冷却至室温称重（准至0.1mg）。3.5重复上述操作，直到两次连续称量质量之差不超过0.5mg。结果表示样品的水份含量（％）=（m-m）/mX10021式中：m—样品的重量，gm—称量皿加海砂、玻棒的重量，g1m—称量皿加海砂、玻棒和样品干燥后的重量，g2方法二：仪器法（IDF141C：2000）仪器：120型（或50型）全组份分析仪、40ml烧杯2．方法取约40ml、20-40C经过滤、混匀的牛乳样品于烧杯中，将烧杯放在全组份分析仪的吸样管下，选择相应的检测程序，按检测键，待电脑显示屏出现检测结果时，即可读数。四、非脂乳固体含量的测定方法一：计算法用基准法测得样品全脂乳固体、脂肪含量后，依据公式进行计算。非脂乳固体=全脂乳固体-脂肪方法二：仪器法（IDF141C：2000）仪器：120型（或50型）全组份分析仪、40ml烧杯2．方法取约40ml、20-40°C经过滤、混匀的牛乳样品于烧杯中，将烧杯放在全组份分析仪的吸样管下，选择相应的检测程序，按检测键，待电脑显示屏出现检测结果时，即可读数。五、酸度的测定方法一：基准法原理用0.1mol/L氢氧化钠滴定牛乳至PH为8.3，由此消耗的0.1mol/L氢氧化钠溶液毫升数可计算出牛乳的酸度。仪器碱式滴定管（0-10刻度，精确到0.05ml）25ml量筒c10ml刻度吸管PH计：带玻璃电极合适当的参比电极，已用PH7和PH的缓冲溶液校准，可读至0.01PH单位。40ml烧杯试剂0.1mol/LNaOH标准溶液：防止二氧化碳的渗入煮沸冷却的蒸馏水方法吸取10ml牛乳置于干燥的40ml烧杯中，加入煮沸冷却的蒸馏水20ml，加入磁力搅拌器，进行搅拌。用滴定管向烧杯中加入氢氧化钠标准溶液，直到PH达到8.3（用PH计测定），滴定过程中始终用磁力搅拌器进行搅拌，整个滴定过程应在lmin内完成。分析结果表述A二VXCX10A：牛乳的酸度，0TV：消耗氢氧化钠标准溶液毫升数，mlC：氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L方法二：常规法仪器碱式滴定管（0-10刻度，精确到0.05ml）l50ml三角瓶25ml量筒1ml刻度吸管、10ml刻度吸管试剂0.1mol/LNaOH标准溶液：防止二氧化碳的渗入。酚酞溶液：取0.5g酚酞溶于75ml体积分数为95%的乙醇中，加入20ml水,用0.1mol/LNaOH标准溶液调至加入一滴立即变成粉红色，再加水定容至100ml。煮沸冷却的蒸馏水终点标准色：在加好样品和水的三角瓶中加入3滴0.005%碱性品红溶液，摇匀即得滴定终点标准色（2小时更换一次）。方法吸取10ml牛乳置于干燥的150ml三角瓶中，加入煮沸冷却的蒸馏水20ml、酚酞溶液0.5ml，用0.1mol/LNaOH标准溶液滴至微红色（与标准色相比较）,整个滴定过程需在45秒内完成，在30秒内不褪色为止。记录消耗的NaOH标准溶液的毫升数。分析结果表述A二VXCX10A：牛乳的酸度，0TV：消耗氢氧化钠标准溶液毫升数，mlC：氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L六、 PH值的测定仪器酸度计或电位滴定仪（测定前均需校准）方法将酸度计的电极插入装有样品的容器中（样品在水浴中保持至25°C或将酸度计电极进行温度补偿），待显示数字稳定后，读数。七、 杂质度的测定仪器旋片式真空泵、抽滤瓶、真空瓶、24mm布氏漏斗、杂质度棉板方法将干净杂质度棉板放入布氏漏斗中，插上真空泵电源，取混匀的液体乳样500ml,预热至30-40C全部通过棉板抽入抽滤瓶中，用无杂质水冲洗盛样容器及附于过滤板上的牛乳，然后用此棉板与标准板对照，即为此样品杂质度。当过滤板上杂质的含量介于两个级别之间时，判定为杂质含量较多的级别。八、 收奶温度的测定取样后，立即将校准过的温度计插入样品中，待温度计温度不再变化时（一般为lmin左右），读取读数。九、酒精实验生鲜牛乳在酸度升高后，与等体积中性酒精混合后会出现絮片。酸度值可根据生成絮片时对应的乙醇浓度可粗略地判定出来，见表1表1酒精浓度不出现絮片的参考酸度68o2OoT以下70o19oT以下72o18oT以下（包括18oT）75o16oT以下（包括16oT）仪器平皿，直径80-90mm温度计量筒，25ml吸管，2ml酒精计试剂所有试剂均应为分析纯；实验用水至少应是蒸馏水。酒精：根据需要用分析纯中性乙醇配制68°、70°、72。或75°的酒精。注：如酒精呈酸性，可用0.1mol/LNaOH进行中和至稍有粉色，中和时推荐使用5g/L酚酞指示剂。方法准确吸取2ml牛乳于洁净干燥的平皿中。注：该步骤开始后，应将试验连续进行下去直至完成，中间不得间断。在加有乳样的平皿中加入2ml75°酒精（或根据需要使用68°，或70°或72°酒精），要边加边摇，使酒精与牛乳均匀混合，观察是否有絮片（或微细颗粒）生成。注：仲裁试验必须在20°C条件下进行。7.5结果判定出现絮片的牛乳为酒精试验阳性乳，不出现絮片的牛乳为酒精试验阴性乳。十、煮沸实验取50ml乳样于250ml三角瓶中，置于电炉上加热，加热过程中不停摇动。当三角瓶中的牛乳沸腾后，将三角瓶取下，观察瓶底白色颗粒的多少（与《生鲜牛乳煮沸实验颗粒标准板》进行比较）。掺假的测定一、食盐原理鲜乳中氯化物与硝酸银反应生成氯化银沉淀，用铬酸钾作指示剂，当乳中的氯化物与硝酸银作用后，过量的硝酸银与铬酸钾生成赭红色（砖红色）铬酸银。仪器试管：18X180mm试管架吸管：2ml试剂配制硝酸银标准溶液：取分析纯硝酸银置105°C烘箱内干燥30分钟，取出放在干燥器内冷却后，准确称取9.6克，用蒸馏水洗入1000ml棕色容量瓶中，摇匀、定容。100g/L铬酸钾溶液：取10g铬酸钾，溶于100ml蒸馏水中。方法取2ml乳样于洁净的试管中加铬酸钾溶液5滴，摇匀，再准确加入9.6g/LAgNO溶液1.5ml,摇匀，观察结果。3结果判定正常乳：呈砖红色掺假乳：土黄色f鲜黄色（a、b、c级）二、蔗糖原理蔗糖在酸性溶液中水解产生的果糖与溶于强酸内的间苯二酚溶液加热后显红色沉淀反应。仪器试管，18X180mm试管架吸管，2ml可调电炉试剂配制称取间苯二酚0.4克用少量蒸馏水溶解，加浓盐酸200ml,再加蒸馏水稀释至600ml置于棕色瓶中，室温保存三个月，冰箱保存半年。方法取间苯二酚盐酸溶液1.5ml于小试管中，加鲜乳5滴，加热煮沸2—3分钟，观察结果。结果判断正常乳：淡棕黄色掺蔗糖乳：>0.1%：浅桔红色 >0.3%：桔红——红色>0.5%：深桔红——砖红色 >1%：砖红色混浊甚至沉淀注意事项：盐酸浓度要准确，否则影响显色反应。试剂配制及贮存过程中被有机物污染，特别是糖类污染；若试剂变为红色即不能使用。加热时间过长，其它醛类糖也能产生浅红色的反应。三、尿素原理尿素与二乙酰—肟在酸性条件下，经镉离子（或三价铁离子）的催化产生缩合，并在氨基硫脲存在下，生成3，5，6—三甲基—1，2，4三胺的红色复合物。仪器试管，18X180mm试管架吸管，2ml可调电炉试剂配制酸性试剂：在1升容量瓶中加入蒸馏水约100ml,然后加入浓硫酸44ml及85%磷酸66ml，冷却至室温后，加入硫氨脲30mg，硫酸镉2克溶解后用蒸馏水稀释至1000ml。贮棕色瓶中冰箱内保存半年不变。20g/L%二乙酰——肟试剂：称取二乙酰——肟2克，溶于100ml蒸馏水中。贮棕色瓶中放置冰箱内，可保存半年不变。应用液：取酸性试剂90ml加二乙酰 肟10ml混合均匀，即可使用。方法取应用液1—2ml于试管中，加鲜乳一滴加热煮沸约1分钟观察结果。结果判定正常乳：无色或微红色掺入尿素或尿的乳，立即呈深红色。掺入量越大，显示越快，红色越深；注正常乳煮沸时间超过2分钟，也可出现淡红色。四、食碱方法一：溴麝香草酚兰法原理鲜乳中如掺碱，可使指示剂变色，由颜色的不同，大略判断加碱量的多少。仪器试管，18X180mm试管架吸管，2ml试剂配制取0.04克溴百里香草酚兰（溴麝香草酚兰）溶于100ml分析纯乙醇中。方法取乳样约2ml于小试管中，沿管壁慢慢加入指示剂约0.5ml，将试管轻轻转动几圈，然后垂直放置2分钟后，观察指示剂与样品接触面颜色变化。结果判定正常奶：黄色掺碱奶：0.03%黄绿色0.1%绿色0.5%青绿色1.0%青色注意事项：0.05%淡绿色0.3%深绿色0.7%淡青色1.5%深青色掺水乳（因水的PH大都在7—9之间）、掺洗衣粉乳（因洗衣粉中加有碳酸钠）、乳房炎乳（因为细菌分解乳酪蛋白产生氨及乳房代谢功能的改变而造成PH值升高）与掺碱指示剂的接触面均可呈黄绿至淡绿色。方法二：玫瑰红酸法试剂配置玫瑰红酸（乙醇溶液）：称取0.05g玫瑰红酸溶于100ml分析纯乙醇中。方法于盛有2ml牛乳的试管中加入2ml玫瑰红酸溶液，摇匀，观察颜色变化。结果判定乳中如无碱性物质则呈黄色，有碱性物质则呈玫瑰红色，其加入量与颜色的深浅成正比。五、硝酸盐、亚硝酸盐(定性检测方法)1．亚硝酸盐1.1仪器试管，①18X180mm试管架吸管，1ml1.2试剂对氨基苯磺酸10ga—萘胺 1g酒石酸 89g上述三种试剂分别称好后，在研钵中研碎，在棕色试剂瓶中干燥保存。或哈尔滨乳品中心亚硝酸盐试剂。1.3方法取亚硝酸盐试剂一耳勺(0.04-0.05g)于入试管中，加入被检乳样1ml,振荡溶解，1-2分钟观察判定。4结果判定正常乳无色，如掺亚硝酸盐乳则由掺入量的不同而呈现出微粉——水粉——粉红。2．硝酸盐2.1原理鲜乳中的硝酸盐经氢还原成亚硝酸盐后，再与对氨基苯磺酸中和甲一苯胺作用，形成红色的偶氮化合物。2.2仪器试管，①18X180mm试管架吸管，1ml2.3试剂哈尔滨乳品检测中心的鲜奶硝酸盐试剂方法取硝酸盐试剂一耳勺(0.04-0.05g)倒入试管中，加入被检乳样1ml,振荡溶解，1-2分钟观察判定。结果判定如亚硝酸盐与硝酸盐显色程度一样，说明乳样中只有亚硝酸盐，如硝酸盐的显色重于亚硝酸盐，则说明乳样中不但有亚硝酸盐而且有硝酸盐，如无色，则即无硝酸盐也无亚硝酸盐。注意事项试管用前要用不含亚硝酸盐或硝酸盐的水刷洗，以防影响结果。低温季节化验时，加乳样后应加温至室温观察。注意硝酸盐、亚硝酸盐试剂生产日期(保存期三年)，避光贮存，用后马上盖严，防透空气。六、硫酸盐原理鲜乳中的硫酸盐与氯化钡形成硫酸钡沉淀，过量的钡离子与玫红酸钠反应生成玫红酸钡呈玫瑰红色。若鲜乳中掺入硫酸盐后，因氯化钡被硫酸盐全部沉淀，无游离的钡离子，因而不能与玫红酸反应，故呈黄色。仪器试管，18X180mm试管架吸管，2ml试剂配制a.称取氯化钡3克，加蒸馏水少许溶解后，加浓盐酸20ml,加蒸馏水至250ml。b.玫红酸钠1克，氯化钠49克，干燥研磨至粉末状，密闭保存。方法取乳2ml于小试管中，加入玫红酸钠指示剂约0.3克混匀，加氯化钡溶液4—5滴混匀，放置3—5分钟后观察结果。结果判定正常乳：呈玫瑰红色最低检出量：1/1000，掺入硫酸盐乳呈黄色或土黄色。注意事项：严格控制酸度，酸度过大易褪色，酸度不足不显色。对不能判定乳样可取乳10ml，加10%氯化钡溶液0.5一1ml离心沉淀，正常鲜乳沉淀物很少，掺硫酸盐乳有较多量硫酸钡沉淀。七、饴糖（糖稀）及葡萄糖1.原理饴糖中的葡萄糖被葡萄糖氧化酶氧化生成葡萄糖酸及过氧化氢；后者在过氧化物酶的作用下，使还原性氧受体领联甲苯铵氧化成兰色化合物。方法使用医院检验尿糖的尿糖试纸测试。八、米汤、淀粉类1.原理淀粉遇碘呈兰色反应。仪器试管，18X180mm吸管，2ml酒精灯试剂配制碘化钾20g、碘5g先用大约20ml的蒸馏水溶解，然后定容至250ml。方法取2ml乳样于试管中，加热煮沸，观察乳液是否有沉积现象，然后加入3-5滴KI—I试剂，观察。判定结果正常乳呈现淡黄色。掺淀粉乳呈现兰色。掺糊精粉乳呈现红色或紫色。九、豆浆、豆饼水1.原理：牛奶中加入豆浆、豆饼水，由于其中有皂角素，加入NaOH或KOH生成黄色物质。2.试剂：28%NaOH或KOH方法：取牛奶5ml，加5mlKOH溶液，阳性显黄色，此试验应做阴、阳性对照试验。方法一：三氯化铁方法原理甲醛常被作为防腐剂而掺入牛乳中，鲜乳中的甲醛在酸性溶液中与三氯化铁产生紫色反应。仪器吸管，2ml、0.5ml试管，18X180mm试管架可调式电炉试剂配制称取0.2g三氯化铁溶于100ml浓盐酸中。方法取乳样2ml于小试管中，加入三氯化铁盐酸溶液0.5ml,混匀于沸水中水浴1分钟，观察颜色。结果判定正常乳：呈黄色或淡黄褐色。掺甲醛乳：呈紫色。最低检出量1/4000。有些涂料中含有甲醛或甲醛的衍生物，亦可检出。方法二：溴化钾—浓硫酸方法1.仪器吸管，2ml、0.5ml试管，18X180mm试管架试剂浓硫酸（分析纯）溴化钾（分析纯）方法取3ml浓HSO放入试管中，加入溴化钾晶粒几粒（0.004g）,沿试管壁24徐徐加入待检验乳样1ml，勿使乳样与酸液混合。结果判定在牛乳与酸液的接触面如果出现紫色，便证明甲醛存在。不含甲醛的牛乳接触面呈现淡黄褐色，当甲醛含量较大，紫色环会立刻出现或经1-2min后出现。卫生指标的测定样品的采取采样时应注意部位等代表性，散装的样品应放于灭菌容器中，及时送检。鲜乳在气温较高情况下应进行冷藏，不得使用任何防腐剂（培养法）。一、细菌总数方法一：平板法（GB4789.2-94）原奶：将检样摇匀，无菌操作将检样25ml放于含有225ml灭菌生理盐水三角瓶中或以无菌操作用1ml灭菌吸管吸取检样1ml,沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水的试管中，振摇混匀；作为1:10的稀释液；做10倍递增稀释，递增稀释一次,即换用1支1ml灭菌吸管。选择适合的稀释倍数;同时做空白及环境对照试验。1．培养基和试剂（1） 营养琼脂培养：营养琼脂按说明制备、分装于300ml三角瓶中，高压灭菌（121°C、15分钟）。（2） 生理盐水：8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，分装、高压灭菌（121C、15-20分钟）。2．操作程序1） 对样品进行编号、记录；原料奶选取10-3至10-5三个稀释度的样品稀释液。2） 培养基准备检查预先灭菌过的营养琼脂培养基是否处于正常、可用状态。将灭菌营养琼脂培养基用微波炉加热加in或融化后，在45C水浴中保温待用。3） 接种培养在无菌操作的条件下，在一个灭菌平皿内倾入15mL营养琼脂培养基，并暴露至接种过程结束，标记后以作为环境对照品。按样品编号在灭菌平皿底部作相应的标记，并记录在“微生物检验操作表”中。在无菌操作条件下，用1ml的灭菌吸管移取1ml选定样品稀释液或样品原样至灭菌平皿内。同上对同一样品重复操作即每个选定的样品稀释度做两个平皿。按以上步骤，以1毫升无菌生理盐水作为空白操作对照。在无菌操作条件下，将约15ml的营养琼脂培养基倾入样品平皿中，将平皿置于操作台面上轻轻转动，使样品和培养基混合均匀。待琼脂凝固后，将平皿翻转，即保持有标记和培养基的一面向上。将所有平皿（包括空白和环境对照）置于36±1°C的恒温培养箱内，保持48±2小时。4） 菌落计数方法做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。5） 菌落计数的报告平板菌落数的选择选取菌落数在30—300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释菌落数，若片状菌落不到平板一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个板后乘2代表全皿菌落数。平皿内如有链状菌生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链，可视为一个菌落；若果有不同来源的几条链，则应将每条链作为一个菌落计。稀释度的选择应选择平均菌落数在30—300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之。若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30—300之间，则视两者之比来决定。若其比值小于或等于2，应报告其平均数；若大于2，则报告其中较小的数字。若所有稀释度的平均菌落数均大于300,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。W.若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。V.若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之。可.若所有稀释度的平均菌落数均不在30—300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。③菌落数的报告菌落数在100以内时，按其实有数报告，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零数，也可有10的指数来表示。方法二：仪器法（仅适用于生鲜牛乳）1）仪器设备BactoScanFC型微生物检测仪、微生物采样小瓶2）方法（见FC微生物快速检测仪操作规程）取牛乳样放于吸管下，设定检测样品为NORMAL，并输入样品数据，按

“STORE”键，再按MEASURE键进行测定，待屏幕出现检测结果时，即可读数。二、耐热芽孢的测定（利乐提供）1）设备和材料（1） 生化培养箱：55±1°C（2） 高压蒸汽灭菌锅恒温水浴锅：46±1°C天平电炉吸管：1ml和10ml，标有0.1ml单位的刻度三角瓶：平皿：皿底直径为9cm试管：15X150mm酒精灯试管架、试管筐灭菌刀或剪刀、灭菌镊子酒精棉球记号笔白瓷缸(用于煮开水)(16)温度计：1-100C(17)超净工作台培养基和试剂营养琼脂培养基：营养琼脂按说明制备、分装于300ml三角瓶中，高压灭菌(121C、15分钟)。生理盐水：8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，分装后高压灭菌121C、15分钟。方法用10ml灭菌吸管吸取5ml乳样加入灭菌试管中。在另一支试管中加入与乳样等量的水。在装水的试管中插一根温度计。将装有乳样和水的试管同时放入沸水浴中(在电炉上用白瓷缸把水煮沸，伊利液态奶事业部生鲜牛乳检验方法并保持沸腾)。⑸直至“装水试管”的温度达到100°C，计时10分钟(如果水不到100°C就沸腾，则等候时间需延长；或在水中加入盐以提高沸点温度，但要避免奶样沸腾)。10分钟后，取出试管，用冷水冷却乳样至室温。用1ml灭菌吸管分别吸1ml冷却后混匀的乳样于两个灭菌平皿中。及时将凉至46°C的营养琼脂注入平皿约15ml，并转动平皿使之混匀；同时做环境对照试验。⑼待营养琼脂凝固后，翻转平板。置于55±1°C的培养箱内培养72土2h，取出计数(同细菌菌落测定计数方法)。三、芽孢总数的测定仪器和材料生化培养箱：36±1°C高压蒸汽灭菌锅恒温水浴锅：46±1°C天平电炉吸管：1ml和10ml，标有0.1ml单位的刻度三角瓶：容量为250ml、300ml平皿：皿底直径为9cm试管：15X150mm酒精灯试管架、试管筐灭菌刀或剪刀、灭菌镊子酒精棉球记号笔白瓷缸(用于煮开水)(16)温度计：1T00°C(17)超净工作台培养基和试剂(1)养琼脂培养基：营养琼脂按说明分装于300ml三角瓶中，高压灭菌(121C、15分钟)。(2)生理盐水：8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，分装、高压灭菌(121C、15-20分钟)。方法用10ml灭菌吸管吸取5ml乳样加入灭菌试管中。在另一支试管中加入与乳样等量的水。在装水的试管中插一根温度计。将装有乳样和水的试管同时放入热水中(在电炉上用白瓷缸把水煮至有小气泡时)。⑸直至“装水试管”的温度达到80C，计时，保温10分钟。10分钟后，取出试管，用冷水冷却奶样至室温。用1ml灭菌吸管分别吸1ml冷却后混匀的乳样于两个灭菌平皿中。及时将凉至46C的营养琼脂注入平皿约15ml，并转动平皿使之混匀；同时做环境对照试验。⑼待营养琼脂凝固后，翻转平板。置于36土1C的培养箱内培养72土2h，取出计数(同菌落总数测定计数方法)。四、嗜冷菌总数的测定方法一：标准方法(IDF101A：1991)设备和材料低温培养箱：可控4°C—6°C2） 培养基和试剂营养琼脂培养基：营养琼脂按说明分装于300ml三角瓶中，高压灭菌（121°C、15分钟）。生理盐水：8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，分装后高压灭菌（121°C、15-20分钟）。3） 操作同细菌总数测定。4） 培养温度及时间置于4-6C的培养箱（或冰箱保鲜室）内培养10天，取出计数（同细菌总数测定计数方法）。方法二：快速测定方法（IDF132A:1991）1）设备培养箱：21C±0.5°C2） 培养基酵母提取物2.5g 胰蛋白胨5.0g 脱脂奶粉1.0g葡萄糖1.0g 琼脂10-15g 蒸馏水1000分装于300ml三角瓶中，高压灭菌（121°C、15分钟）。PH值为6.93） 操作同细菌总数测定。4） 培养温度及时间在21C±0.5°C下恒温培养25h（需严格控制温度、时间），取出计数（同细菌总数测定计数方法）五、乳房炎乳检测（国标法）仪器吸管，0.5ml、5ml白色平皿试剂配制称取60g碳酸钠（NaCO.10HO）溶于100毫升蒸馏水中，称取40g无水32氯化钙溶于300毫升蒸馏水中。二者须均匀搅拌、加温、过滤，然后将二种滤液倾注一起，予以混合、搅拌、加温和过滤，于第二次滤液中加入等量的15%氢氧化钠溶液，继续搅拌、加温，过滤即为试液。加入溴甲酚紫于试液内，有助于结果的观察。试剂宜放在棕色玻璃瓶中保存。方法吸取乳样3ml于白色平皿中，加0.5毫升试液，立即回转混合，约10s后观察结果。结果判定现象结果无沉淀及絮片—（阴性）稍有沉淀发生土（可疑）肯定有沉淀（片条）+邙日性）发生粘稠性团块并继之分为薄片++（强阳性）有持续性的粘稠性团块（凝胶）+++（强阳性）六、体细胞的检测方法一：显微镜法（手工校准Somacount150校准方法）一、 配制500ml染色液所用药品如下：2.5g美蓝，280ml95%的乙醇，200ml二甲苯，20ml冰醋酸二、 操作：1、将前三种药品放入一个500ml带有螺丝口的棕色瓶内，放于室温至少两小时溶解，轻轻摇动（防止爆炸），放入4-7°C冰箱内20小时（过夜）。趁温度低时加入20ml冰醋酸，轻轻摇动，立刻过滤到另外一个瓶内（去掉未溶美蓝,美蓝结晶），放于冰箱内贮存，用时再过滤到一小瓶内。2、准备样品：奶样加热到40°C使脂肪混匀（上下倒置九次），不能保存太久，最多二星期。分瓶，标号、放于冰箱冷藏。3、涂片：涂在正面，通过嗜水处理，涂之前用酒精轻轻檫掉油。4、 用10M移液管移取液体。用一杯40°C蒸馏水洗吸样管，先拔出来洗干净，针头放于水中洗5-6次，易于插拔为止。5、 样品混匀加热至40°C，冲洗吸样管三次。6、 吸样后擦干净针头外部，将样品放于载玻片上，同一个样品涂四次（四个位置）用曲别针涂匀样品在片上，放于室温自然晾干后，在酒精灯上过两次（二秒），冷却后染色（可同时作两片，背对背放至染液中）。染色四分钟后，取出，45。角靠放在瓶子上沥干。7、 准备两杯35°C蒸馏水共500ml蒸馏水（温度重要，否则容易剥离）。第一杯水中速浸2次，第二杯水中速浸2次斜靠于瓶旁凉干，干后即可用显微镜读数。三、显微镜校准用测微尺加上显微镜油放于油镜下，先将镜头挨住镜片，再调节，使之离开镜片，然后观察，计算视野宽度。读片时竖走，数数计算面积（直径X宽度）显微镜系数K= 。注：W为视野宽度，K为确定后，镜不变，K就不变。记好显微镜及镜头编号。其中染色较深的算，浅色不算，三次取平均值来校准设备。注：本检验室显微镜系数为 。方法二：体细胞检测仪法见体细胞检测仪操作规程。七、抗生素的测定方法一：仪器法仪器：漩涡混合器温育箱离心机Charm7600分析仪（或其它仪器Rosa、Snap）13X100mm试管及试管盖300卩l移液枪及吸嘴10ml移液管医用棉签药品试剂所用水为蒸馏水。&-内酰胺试剂盒链霉素试剂盒磺胺试剂盒闪烁液基准液实验步骤3.16-内酰胺类3.1.1样品在测试前放冰浴中冷却至0-7°C。3.1.2将绿药片加至空试管中，用移液枪加300卩l水，在漩涡混合器上混合10秒钟打碎药片。3.1.3加5.0±0.25ml样品，在漩涡混合器上混合均匀；加黄色药片立即混合。3.1.4将试管放入温育箱，85±2C温育3分钟。3.1.5以3400转/分离心3分钟，立即取出试管弃去上清液，用棉签擦去上层脂肪环，并保持试管垂直，不碰及底部药片。3.1.6加300卩l水，在漩涡混合器上将沉淀物充分打碎并混合均匀。3.1.7加3ml闪烁液，加盖垂直震动直到呈均一雾状。3.1.8在分析仪上进行60秒读数，读取［14C］上的cpm值。2链霉素类3.2.1于试管中加3/4量的样品离心3分钟，冷冻至0-7°C。3.2.2于一空试管中加入白色药片，加300ul水，混合10秒钟打碎药片。3.2.3加入步骤1中离心后的样品5.0土0.25ml（于脂肪层下），加入绿色药片并立即摇匀。3.2.4将试管放入温育箱，35±2C温育3分钟。3.2.5以3400转/分离心3分钟，立即取出试管弃去上清液，用棉签擦去上层脂肪环，并保持试管垂直，不碰及底部药片。3.2.6加300ul水，在漩涡混合器上将沉淀物充分打碎并混合均匀。3.2.7加3ml闪烁液，加盖垂直震动直到呈均一雾状。3.2.8在分析仪上进行60秒读数，读取［3H］上的cpm值。3.3磺胺类先加白色药片，后加粉红色药片，其他过程同B-内酰胺类检测步骤，在分析仪上读取［3H］上的cpm值。结果判定4.1测定结果比基准值大50以上，可判定为样品阴性。4.2测定结果比基准值大，但差值不足50时，应重新用Charm7600测定一分钟，如重新测定结果小于或等于基准值，则判定为样品阳性；如测定结果比基准值大，则判定为阴性。测定结果小于基准值，判定为假阳性，应重新测定，如重新测定结果小于或等于基准值，则判定为样品阳性。5基准值的测定5.1零基准值5.1.1用100ml40dC的蒸馏水溶解零基准品，溶解后放至冰浴中15分钟。5.1.2按各类不同抗生素的检测方法测定各自的零基准液，测定3个cpm值,结果取平均值，此平均值即为零基准值。阳性基准值5.2.1用配制好的零基准液100ml溶解阳性基准品，溶解后放至冰浴中15分钟。按各类不同抗生素的检测方法测定各自的阳性基准液，测定6个cpm值，计算其平均值，将平均值加平均值的15%即为阳性基准值。方法二：TTC法（见GB5409-85）注：菌液制备接种操作应在无菌条件下进行如果是干粉菌种应在无菌条件下称取2-3g溶于1000ml灭菌的脱脂乳中。脱脂乳的制备可用脱脂乳粉与水以1：9混合配制而成。制定依据：八、硝酸盐、亚硝酸盐的测定（定量法）原理将样品溶解于水，沉淀脂肪和蛋白质后进行过滤。用镀铜的镉使一定量的滤液中的硝酸盐还原为亚硝酸盐，在一定量的未还原的滤液和已还原的滤液中加入磺胺和N-1-萘基-乙二胺二盐酸盐，使其显粉红色，然后用分光光度计以538nm的波长测其吸光度。将测得的吸光度与亚硝酸盐标准溶液的吸光度进行比较，计算出样品中的亚硝酸盐含量和硝酸盐还原后的亚硝酸盐总量；从两者之间的差值可计算出硝酸盐的含量试剂a.去离子水镀铜镉粒：直径0.3-0.8mm硫酸铜溶液：溶解20g五水硫酸铜(CuSO・5H0)于水中，稀释至1000ml。42盐酸-氨水缓冲溶液：PH9.60-9.70。用600ml水稀释75ml浓盐酸。混匀后,再加入135ml浓氨水，用水稀释至1000ml混匀。用精密PH计调PH值为9.60-9.70。盐酸溶液：c(H+)约为2mol/L，用水将160ml的浓盐酸稀释至1000ml。盐酸溶液：c(H+)约为0.1mol/L，将50ml2mol/L的盐酸溶液用水稀释至1000ml。沉淀蛋白和脂肪的溶液：硫酸锌溶液：将53.5g的七水硫酸锌(ZnSO・7HO)溶于水中，并稀释至100ml。42亚铁氰化钾溶液：将17.2g的三水亚铁氰化钾［KFe(CN)・3HO］溶于水中，462稀释至100ml。EDTA溶液：用水将33.5g的二水乙二胺四乙酸二钠(NaCHNO・2HO)溶2101423 2解，稀释至1000ml。显色液1：体积比450:550盐酸溶液。将450ml盐酸加入到550ml水中，冷却后装入试剂瓶中。显色液2：5g/L的磺胺溶液。在75ml水中加入5ml浓盐酸在水浴上加热，用其溶解0.5g磺胺(NHCNHSONH)。冷却至室温后用水稀释至100ml。必要2624 2 2时进行过滤。显色液3：1g/L的萘胺盐酸盐溶液。将0.1g的N-1-萘基-乙二胺二盐酸盐(CHNHCHCHNH・2HCL)溶于水，稀释至100ml必要时过滤。107 2 2 2硝酸钾标准溶液：相当于硝酸盐的浓度0.0045g/L。将硝酸钾(KNO)在3110-120°C的温度范围内干燥至恒重，冷却后称取1.4680g，溶于1000ml容量瓶中，用水定容。在使用的当天，于1000ml容量瓶中，取5ml上述溶液和20ml缓冲溶液(试剂4）用水定容。1ml该标准溶液中含4.5ug的NO-。3m.亚硝酸钠标准溶液：相当于亚硝酸盐的浓度为 0.001g/L。将亚硝酸钠（NaNO）在110-120°C的温度范围内干燥至恒重，冷却后称取0.150g，溶于21000ml容量瓶中，用水定容。在使用的当天配制该溶液。于1000ml容量瓶中，取10ml上述溶液和20ml缓冲溶液（试剂4）用水定容。1ml该标准溶液中含1.00ug的NO-。2仪器所有玻璃仪器都要用蒸馏水冲洗，以保证不带有硝酸盐和亚硝酸盐。电子天平：灵敏度为0.1mg烧杯：100ml三角瓶：250ml、50ml容量瓶：100ml、500ml、和1000ml5•移液管：2ml、5ml、10ml、25ml刻度吸管：2ml、5ml、10ml、25ml量筒：根据需要选取玻璃漏斗：直径约9cm定性滤纸：直径约18cm还原反应柱：简称镉柱分光光度计：测定波长538nm，使用1-2cm光程的比色皿。PH计：精度为土0.01，使用前用PH7和PH9的标准液进行校正。操作步骤制备镀铜镉柱置镉粒于三角瓶中（所用镉粒的量以达到要求的镉柱高度为准）。1.2加足量的盐酸（试剂5）浸没镉粒，摇晃几分钟。滗出液体，在三角瓶中用水反复冲洗，直到把氯化物全部冲洗掉。4.1.4在镉粒上镀铜。向镉粒中加入硫酸铜溶液（试剂2）（每克镉粒约需2.5ml）,摇晃1min。滗出液体，立即用水冲洗镀铜镉粒，注意镉粒要始终用水浸没。当冲洗水中不再有铜沉淀时即可停止冲洗。在用于盛装镀铜镉粒的玻璃柱底部装上几厘米高的玻璃纤维。在玻璃柱中灌入水，排净气泡。将镀铜镉粒尽快地装入玻璃柱，使其暴露于空气的时间尽量短。镀铜镉粒的高度应在15-20cm的范围内。新制备柱的处理以不大于6ml/min的流量将由750ml水225ml硝酸钾标准溶液（试剂12）20ml缓冲溶液（试剂4）和20mlEDTA（试剂8）溶液组成的混合液通过刚装好镉粒的玻璃柱，接着用50ml水以同样流速冲洗该柱。检查柱的还原能力这种检查每天至少进行两次，一般在开始时和一系列测定之后。用移液管将20ml的硝酸钾标准溶液（试剂12）移入还原柱顶部的贮液杯中，再立即向该贮液杯中添加5ml缓冲液（试剂4）。用一个100ml的容量瓶收集洗提液。洗提液的流量不应超过6ml/min。在该贮液杯将要排空时，用约15ml水冲洗杯壁，冲洗水流完后，再加入15ml水重复冲洗。当第二次冲洗水也流完后，将贮液杯灌满水，并使其以最大流速流过柱子。当容量瓶中的洗提液接近10