高中生物选修一-DNA的粗提取与鉴定课件

讨论2：如何证明他们是遗传物质？讨论3：怎样才能将细胞内的这些物质分离出来？讨论1：构成生物体的遗传物质是什么？讨论2：如何证明他们是遗传物质？讨论3：怎样才能将细胞内的1§5.1DNA的粗提取与鉴定§5.1DNA的粗提取与鉴定2一、基础知识（一）提取DNA的方法1.提取生物大分子的基本思路

选用一定的物理或化学方法，分离具有不同物理或化学性质的生物大分子2.提取DNA的基本思路提取DNA，去除其他成分利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异一、基础知识（一）提取DNA的方法1.提取生物大分子的基本思3⑴DNA的溶解性DNA和蛋白质等成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀；或者让其他成分溶解，DNA析出3.DNA等大分子的理化性质⑴DNA的溶解性DNA和蛋白质等成分利用这一特点，或者让其4DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。将DNA与蛋白质进一步分离。⑵DNA不溶于酒精溶液⑶DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性①蛋白酶——水解蛋白质，

对DNA没有影响②高温——大多数蛋白质不能忍受60～80℃

而DNA在80℃以上才会变性③洗涤剂——溶解细胞膜，去除脂质和蛋白质

但对DNA没有影响DNA不溶于酒精溶液，⑵DNA不溶于酒精溶液⑶DNA对酶5高中生物选修一--DNA的粗提取与鉴定ppt课件6试剂：（二）DNA的鉴定条件：二苯胺沸水浴条件下，

DNA遇二苯胺被染成蓝色沸水浴现象：试剂：（二）DNA的鉴定条件：二苯胺沸水浴条件下，

DNA遇7二、实验设计（一）实验材料的选取从下列材料中选取2～3种原则：菜花、香蕉、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜；鱼卵、猪肝、鸡血、哺乳动物的红细胞；在液体培养基中培养的大肠杆菌凡是含有DNA的生物材料都可以考虑选用DNA含量相对较高的组织二、实验设计（一）实验材料的选取从下列材料中选取2～3种原则8（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液1、动物细胞2、植物细胞——容易破碎——需要溶解细胞膜鸡血细胞溶液：加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，

过滤后收集滤液想一想：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分大量进入血细胞，使血细胞胀裂；加上搅拌作用，加速鸡血细胞细胞膜、核膜破裂，

从而释放出DNA①加入一定的洗涤剂和食盐②充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液想一想：洗涤剂和食盐的作用分别是什么？洗涤剂——离子去污剂，能溶解细胞膜，利于DNA释放食盐——NaCl，利于DNA的溶解于研磨液中（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液1、动物细胞2、植物细胞—9使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，

导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理讨论：滤液/研磨液中可能含有哪些成分？答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质想一想：如果研磨不充分，会对实验结果产生

怎样的影响？使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，

导致看不101.DNA的溶解性2.DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性（三）除去滤液中的杂质1.DNA的溶解性2.DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性（11讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？方案二：利用蛋白酶分解杂质蛋白，使提取的DNA

与蛋白质分开；方案三：利用DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，

使蛋白质变性，与DNA分离讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？方案二：利用蛋白酶分解12（四）DNA的析出与鉴定与滤液体积相等的冷却的酒精溶液(体积分数95％)，静置2－3min，溶液中会出现白色丝状物

——粗提取DNA用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水1、DNA的析出（四）DNA的析出与鉴定与滤液体积相等的冷却的酒精溶液(体13高中生物选修一--DNA的粗提取与鉴定ppt课件142.DNA的鉴定⑴向两支试管中分别加入2mol/LNaCl

溶液5ml⑵其中一支试管中加入DNA丝状物⑶各加入二苯胺试剂4ml⑷混匀后，置于沸水浴中加热5min⑸待冷却后，比较两只试管中溶液的颜色变化观察现象：溶解丝状物的溶液变为蓝色2.DNA的鉴定⑴向两支试管中分别加入2mol/LN15观察你提取的DNA颜色，如果不是白色丝状物，说明DNA中的杂质较多；二苯胺鉴定出现蓝色说明实验基本成功，如果不呈现蓝色，可能所提取的DNA含量低，或是实验操作中出现错误，需要重新制备四、课题成果评价：是否提取出了DNA观察你提取的DNA颜色，四、课题成果评价：是否提取出了DNA16课题延伸本课题使用的洗涤剂是多组分的混合物，在严格的科学实验中很少使用。实验室提取高纯度的DNA时，通常使用十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）、十二烷基硫酸钠（SDS）或吐温等化学试剂。课题延伸本课题使用的洗涤剂是多组分的混合物，在严格的科学实验172、你认为从细胞中提取某种特定的蛋白质与提取DNA一样容易吗？答：提取蛋白质比提取DNA的难度大。这是因为，与DNA相比，蛋白质对温度、盐浓度、pH等条件要敏感得多，很容易失活；并且蛋白质的空间结构多种多样，理化性质各不相同，使得蛋白质的提取没有一种统一的方法，只能根据特定蛋白质的特性摸索提取的条件，设计特定的方法。2、你认为从细胞中提取某种特定的蛋白质与提取DNA一样容易吗18为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？

1、用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；

2、用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质。为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？1、用19⑴过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液目的:获得含核物质的滤液

⑵过滤含粘稠物的0.14mol/LNaCl溶液目的:获取纱布上的粘稠物

⑶过滤溶解有DNA的2mol/LNaCl溶液目的:得到含DNA的滤液

本实验中有三次过滤,分别有什么作用?⑴过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液本实验中有三次过滤,分别有20第一次搅拌加蒸馏水的鸡血细胞液

加速细胞的破裂第二次搅拌加2mol/LNaCl溶液的滤液

使DNA与溶液混合均匀第三次搅拌加蒸馏水至0.14mol/LNaCl溶液

稀释NaCl溶液,析出DNA第四次搅拌放入2mol/LNaCl溶液中纱布上的粘稠物

使DNA尽可能多的溶于溶液中第五次搅拌体积分数为95%的酒精

提取含杂质较少的DNA实验中有五次用玻璃棒搅拌?分别有什么作用?第一次搅拌加蒸馏水的鸡血细胞液实验中有五次用玻璃棒搅拌?分别21方法步骤

加入物质

目的

1.制备鸡血细胞液

柠檬酸钠溶液

①

2.提取鸡血细胞细胞核物质

20m1蒸馏水

②幻灯片18

3.溶解细胞核内的DNA

2m1／L的NaCI溶液40mL

③幻灯片18

4.析出含DNA的黏稠物

蒸馏水

④

5.滤取含DNA的黏稠物

⑤

6.将DNA的黏稠物再溶解

2mol／L的NaCl溶液20mL

⑥

7.过滤含DNA的NaCl溶液

⑦

8.提取含有杂质较少的DNA

冷却的95％的酒精50mL

⑧幻灯片18

A:(1)向试管中加入0.015mol／L的NaCl溶液5mL

(2)加入DNA

(3)4

mL二苯胺试剂

9.DNA的鉴定

B:(1)向试管中加入0.015mol／L

的NaCl溶液5mL

(2)4mL二苯胺试剂

⑨

方法步骤加入物质目的1.制备鸡血细胞液柠檬酸钠溶液22①加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝