重组乙型肝炎疫苗

重组乙型肝炎疫苗——动物细胞工程制药制作者：黄玉玲背景乙型肝炎是由病毒引起的，约占所有病毒性肝炎的40﹪，它可以急性发病，也可以形成慢性肝炎，并进而引发肝硬化，肝癌，而其中很大一部分人可以是健康的病毒携带者，不出现症状，但表面抗原（HbsAg）阳性，或者同e抗原（HbeAg）阳性，常常是重要的传染源。在我国，人口众多，而这样的慢性病毒携带者约有一亿人，是对公共卫生的一个重要威胁。乙肝病毒属DNA病毒科，有三种外壳的基因编码。乙肝病毒具有五种抗原抗体系统：即表面抗原抗体(HBsAg与抗-HBs)、e抗原抗体(HBeAg与抗-HBe)、核心抗原抗体(HBcAg与抗-HBc)、x抗原抗体(HBxAg与抗-HBx)和HBv-DNA。有临床意义的主要有HBsAg与抗-HBs、HBeAg与抗-HBe和抗-HBc，简称“两对半”。临床主要表现为食欲减退、恶心、厌油、乏力、巩膜黄染、黄色尿、肝脏肿大、肝区痛等。简介重组乙型肝炎疫苗是由重组酵母或重组CHO工程细胞表达的乙型肝炎表面抗原，经纯化、灭活及加入佐剂吸附制成。前者为重组酵母乙型肝炎疫苗，后者为重组CHO乙型肝炎疫苗。其性状为白色混悬液，静置形成可摇散的沉淀。疫苗用法(2)注射部位为上臂三角肌肌内。(1)本疫苗注射时要充分摇匀。(3)新生儿第1针在出生后24小时内注射，1个月及6个月后注射第2、3针;其他人群免疫程序为第0、1、6个月，剂量均为5ug/支。疫苗制备取国家批准的重组酵母乙型肝炎疫苗的原始菌种，经一代扩增，制成生产菌种，逐级扩增后接种于发酵罐，在适宜温度和时间内进行三级发酵，收集细胞，经破碎，吸附粗提，疏水色谱法精提乙型肝炎表面抗原，再经硫氰酸盐处理，除菌滤过，甲醛灭活，氢氧化铝吸附等，加入硫柳汞作为防腐剂。取国家批准的重组CHO乙型肝炎疫苗的细胞株，用静置培养或旋转法培养细胞，当乙型肝炎表面抗原的分泌量达到每1.0mg/L时，收获培养液，经硫酸铵盐析，2～3次密度梯度离心和色谱法纯化后，再经浓缩，除菌滤过，甲醛灭活，氢氧化铝吸附等，加硫柳汞作为防腐剂，分装制成。鉴别与检查【鉴别】取本品，照《中国生物制品规程》酶联免疫吸附法，与已知乙型肝炎表面抗体确证其为乙型肝炎表面抗原。【检查】照《中国生物制品规程》规定的方法检查如下项目。纯度不得低于98%。氢氧化铝每1ml不得过1mg。硫柳汞不得过0.01%。甲醛不得过0.01%。异常毒性取本品，依法检查，应符合规定。热原取本品，依法检查，应符合规定。无菌取本品，用直接接种法检查，应符合规定。【效价测定】取本品，照《中国生物制品规程》测定，应符合规定。酵母乙型肝炎疫苗的ED50不得过1.5μg。体外相对效力试验抗原含量与参比苗的抗原比值不低于0.5。CHO乙型肝炎疫苗的ED50与参比苗的ED50比值不低于1.0。【类别】亚单位疫苗。【规格】酵母乙型肝炎疫苗0.5ml:5μgCHO乙型肝炎疫苗1ml:10μg【贮藏与效期】在2～8℃的暗处保存。有效期2年。重组乙型肝炎疫苗的种类及生产现状

血源乙肝疫苗经过十年上亿人份人群接种，证明具有良好的安全性的免疫原性，但存在对生产者和献血者健康有潜在危险性，生产成本高等缺陷，我国已经完成同重组乙肝疫苗对血源疫苗的替代工作。目前重组乙肝疫苗主要分为酵母，（酿酒酵母和甲基营养型酵母）以及中国仓鼠卵巢细胞（ChineseHamsterOvarycell,CHO）表达疫苗。（一）酿酒酵母

1982年Valenzuela首先在酿酒酵母中成功表达乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg），1986年9月美国默克公司的重级酵母乙肝疫苗首次取得专利并得到美国FDA的批准。1989年7月比利时史克比成公司的另一重组酵母乙肝炎疫苗也取得专利。目前重组酵母乙肝疫苗的生产厂家除默克公司，史克公司外，我国北京天坛生物，深圳康泰公司也大量生产该种疫苗。其优点为：酵母为低等真核微生物，易于在营养成份简单的培养基中高密中发酵培养，利用工业化生产，表达量高，目前世界上大规模生产和上市的疫苗大多数由该表达系统制备而成。（二）甲基营养型酵母

共有4种表达系统。甲基营养型酵母生产HbsAg具有培养基廉价，目的基因与酵母染色整合的优点，不仅可克服质粒丢失，还可提高表达量。汉逊酵母（HansenulaPolymorpha，H.P.）和毕赤酵母（PichiaPastoris，P.P.）系统已应用于工业化生产。已上市的酿酒酵母和甲基营养型酵母表达乙肝疫苗为含HbsAg成份的疫苗。（三）CHO疫苗

本疫苗系用基因工程技术将乙型肝炎表面抗原基因片段重组到中国仓鼠卵巢细胞(CHO)内，通过对细胞培养增殖，增殖分泌乙肝表面抗原(HBsAg)于培养液中，经纯化加佐剂氢氧化铝后制成。疫苗外观有轻微乳白色沉淀。国产酵母乙肝疫苗的效果

研究证明：国产血源乙肝疫苗的保护效果至少维持9-10年，国产重组乙肝疫苗（主要为酵母疫苗）的免疫效果和免疫持久性如何，是人们关心的重点。因为乙肝病毒缺乏易感动物模型，乙肝疫苗的免疫效果考核只能应用人体考核来评价，既往研究证明应用乙肝苗阻断HbsAg、HbeAg双阳性母亲的新一儿传播HBV是评价乙肝疫苗的效力的最直接指标，且1-10岁儿童对乙肝疫苗反应较好。我们选择新生儿和儿童作为疫苗考核对象，进行国产酵母乙肝疫苗的免疫效果和持久性研究。阶段结果报告如下：免疫效果新生儿（1）母婴传播阻断保护率：应用6批国产量5μg酵母疫苗对163例HbsAg，HbeAg双阳性母亲的新生儿进行母婴传播阻碍断效果考核，结果保护率在81.48-92.07%之间，远高于文献报道的10μg（59.2%）和20μg（74.3%）血源乙肝疫苗,与30μg血源乙肝疫苗的保护率(85.1%)相当,而进口5μgM苗(46例,)10μgA苗(58例)和10μgS酵母疫苗(30例)的保护率分别为90.33%、86.59%和92.58%。表明国产酵母疫苗免疫效果达到国外同类产品和30μg国产血源乙肝疫苗的保护水平。2）抗体GMT：未发现第一针免后3、9、12月时，HbsAg、HbeAg双阳性孕妇所生新生儿的抗体GMT与HbsAg单阳性及健康孕妇所生新生儿抗体GMT有显著差异。小学生：（