比色法原理课件

1吸光光度法

原理1吸光光度法

2一吸光光度法的基本原理特点灵敏度高：测定下限可达10－5～10－6mol/L,10-4%～10-5%准确度能够满足微量组分的测定要求：相对误差2～5％（1～2％）操作简便快速应用广泛

吸光光度法是基于被测物质的分子对光具有选择性吸收的特性而建立起来的分析方法。2一吸光光度法的基本原理特点吸光光度法是基31.光的基本性质

电磁波的波粒二象性磁场向量电场向量传播方向YZX与物质作用31.光的基本性质电磁波的波粒二象性磁场向量电场向量传播方4波粒二象性结论:一定波长的光具有一定的能量，波长越长(频率越低)，光量子的能量越低。单色光：具有相同能量(相同波长)的光。混合光：具有不同能量(不同波长)的光复合在一起。真空中:4波粒二象性结论:一定波长的光具有一定的能量，波长越真空中:5光学光谱区远紫外近紫外可见近红外中红外

远红外（真空紫外）10nm~200nm200nm

~380nm380nm

~780nm780nm~2.5m2.5m

~50m50m

~300m5光学光谱区远紫外近紫外可见近红外中红外远红外（真空62.溶液中溶质分子对光的吸收与吸收光谱/nm颜色互补光400-450紫黄绿450-480蓝黄480-490绿蓝橙490-500蓝绿红500-560绿红紫560-580黄绿紫580-610黄蓝610-650橙绿蓝650-760红蓝绿不同颜色的可见光波长及其互补光62.溶液中溶质分子对光的吸收与吸收光谱/nm颜色互补光7300400500600700/nm350525545Cr2O72-MnO4-1.00.80.60.40.2AbsorbanceCr2O72-、MnO4-的吸收光谱3507300400500600700/nm3505255483.光吸收基本定律:Lambert-Beer定律A=lg(I0/It)=kbcItI0bdxII-dIs朗伯定律(1760)A=lg(I0/It)=k1b比尔定律(1852)A=lg(I0/It)=k2c吸光度介质厚度(cm)在自动分析仪中体现为比色杯厚度83.光吸收基本定律:Lambert-Beer定律A=l9吸光度A、透射比T与浓度c的关系ATcA=kbc9吸光度A、透射比T与浓度c的关系ATcA=kbc10吸光度与光程的关系A=bc

光源检测器0.00吸光度检测器b样品光源0.22吸光度光源检测器0.44吸光度b样品b样品10吸光度与光程的关系A=bc光源检测器0.00吸11吸光度与浓度的关系

A=bc

吸光度0.00光源检测器

吸光度0.22光源检测器b

吸光度0.42光源检测器b11吸光度与浓度的关系A=bc吸光度0.00光源1201234mg/mlA。。。。*0.80.60.40.20溶液浓度的测定A＝bc工作曲线法(校准曲线)朗伯-比尔定律的分析应用120123413二光度分析的方法和仪器

(一)光度分析的几种方法方便、灵敏，准确度差。常用于限界分析。观察方向1.目视比色法c4c3c2c1c1c2c3c413二光度分析的方法和仪器

(一)光度分析的几种方法142.光电比色法通过滤光片得一窄范围的光(几十nm)光电比色计结构示意图灵敏度和准确度较差142.光电比色法通过滤光片得一窄范围的光(几十nm)光电153.吸光光度法和分光光度计光源单色器吸收池检测系统稳压电源分光光度法的基本部件通过棱镜或光栅得到一束近似的单色光.波长可调,故选择性好,准确度高.153.吸光光度法和分光光度计光源单色器吸收池检测系统稳压16分光光度计的主要部件光源：发出所需波长范围内的连续光谱，有足够 的光强度,稳定。 可见光区：钨灯，碘钨灯(320～2500nm)

紫外区：氢灯，氘灯(180～375nm)单色器：将光源发出的连续光谱分解为单色光的 装置。

棱镜:玻璃350～3200nm,石英185～4000nm

光栅:波长范围宽,色散均匀,分辨性能好,使用方便16分光光度计的主要部件光源：发出所需波长范围内的连续光谱，17吸收池：(比色皿)用于盛待测及参比溶液。 可见光区：光学玻璃池 紫外区：石英池检测器：利用光电效应，将光能转换成电流讯号。 光电池，光电管，光电倍增管指示器： 低档仪器：刻度显示（p307，图8.12)

中高档仪器：数字显示，自动扫描记录17吸收池：(比色皿)用于盛待测及参比溶液。18(二)分光光度计的类型18(二)分光光度计的类型19多通道仪器（MultichannelInstruments）

光电二极管阵列(通常具有316个硅二极管)photodiodearrays(PDAs)

同时测量200～820nm范围内的整个光谱,比单个检测器快316倍,信噪比增加