血液凝固及其影响因素

试验五：血液分散及其影响要素【试验目的】学习血液分散的根本过程生疏加快或延缓血液分散的一些要素【试验原理】

试验人：同组人：血液分散是一个酶的有限水解激活过程，在此过程中有多种凝血因子参与。依据凝血过程起动时激活因子根源不一样，可将血液分散分为内源性激活门路和外源性激活门路。内源性激活门路是指参与血液分散的全部凝血因子在血浆中，外源性激活门路是指受损的组织中的组织因子进入血管后，与血管内的凝血因子共同作用而启动的激活过程。【试验资料和器具】家兔72个、竹签、秒表、试管架、哺乳动物手术器材一套、兔手术台、动脉夹、塑料动脉插管、线、棉花、水浴槽、冰盒液状白腊、肝素、草酸钾1~2mg、脑匀浆液0.1ml、生理盐水【试验过程】1、动物麻醉及颈部手术〔此部由助教教师操作〕取一只动物，称重。按1g/kg体重的剂量将乌拉坦〔氨基甲酸乙酯〕由耳缘静脉缓慢注入，观看动物肌张力、呼吸与角膜反射的变化。动物麻醉后背位固定于兔手术台上。剪去颈部手术野的毛，沿颈正中线在喉头上一指至锁骨上一指的地方作一5～7cm 的皮肤切口。分别皮下组织及肌肉。2、颈总动脉插管〔此部由助教教师操作〕在气管双侧鉴别并分别颈总动脉，颈总动脉下方穿两条线备用。在左边颈总动脉的近心端夹一动脉夹，在动脉夹远心端距动脉夹约3cm处结扎。用小剪刀在结扎线的近侧〔结扎线与动脉夹之间〕沿向心方向剪一小斜口〔约占管径的一半〕，向心脏方向插入动脉插管，由备用的线结扎固定。取血时将动脉夹松开即可。31mL动脉血后，向每个试管中注入1mL兔动脉血，并摇匀。自血液流出动脉插管开头计时。除第1管外，其余各管每隔15秒钟将试管倾斜一次，观看液面能否倾斜即血液能否流淌，直到试管内血液不再流淌为止，记录凝血时间。当第2管已经分散时，再倾斜第1管看血液能否分散，假设还没有分散则按上述方法每隔15秒钟倾斜一次，直到血液分散为止，记录凝血时间，即为该兔血的分散时间。2管为比较，各管观看其余各管中血液分散时间。922滴，观看血液能否分散。5管中的玻棒，用水洗净，观看附着在玻棒上的纤维蛋白。留意事项：取放试管时要用拇指和食指捏住试管的上端，不要握住试管的底部，免得手的温度影响结果。每支试管口径及采血量要尽量全都，不行相差太大。记录凝血时间要正确。45°时，试管内血液不见流淌为准。【试验结果及有关谈论】管号 试验条件

凝血时间凝血时间〔一组〕〔二组〕

现象讲解参与0.1％肝素溶液 大于1

简洁，主要经过与抗凝血酶Ⅲ〔AT-Ⅲ〕联合，而加大于 强后者对活化的Ⅱa、Ⅸa、Ⅹa、Ⅺa和Ⅻa凝血因

20min

20min

子的抑制作用。后来果涉及阻挡血小板分散和损坏，〔因子Ⅲ〕。抑制血小板的齐集和开释。它对血中有机成分和无机成分的测定均无影响。参与2％草酸钾溶液20.1mL〔6滴〕3静置

大于20min7min30s

血液分散的多个环节中都需要钙离子的参与，故寻常用枸橼酸钠、草酸钠和草酸钾作为体外抗凝剂，它们可与钙离子联合而除掉血浆中的钙离子，进而CaCl2CaCl2中的钙离子会起到凝血因子IV的作用，进而使再次启动凝血过程，血液分散。草酸盐是可逆性抗凝剂。但本次试验中参与CaCl2后并无消灭凝血现象，可能是CaCl2溶液配置有问题，或许由于操作不妥，凝血因子已经完好失活。血液流出血管后，很快会分散。血液流出血管后血小板倾斜可加快血小板的粘附齐集过程，并加大血小每隔15S倾斜45°细玻璃粉少量6

4min 5min 板开释的凝血因子与血细胞的接触面积，进而加快了凝血的过程。该过程是内源性凝血过程。玻璃粉是异物，可激活凝血因子Ⅶ及血小板，启理盐水〕 2min45s

动凝血过程。6脑组织浸出液滴〕15s30s脑组织液中有组织因子门路抑制物，是外源性凝血门路的特异性抑制剂，因此能加快凝血过程。7置于40℃水浴滴生理盐水〕165s165s适合高升温度，能增加酶的活性，加快凝血过程。8置于10℃水浴滴生理盐水〕大于20min降低温度能够降低酶的活性，延缓凝血过程。有富有弹在竹签的搅动下，特别是缠上线的接触面粗拙的竹9竹签搅拌滴生理盐水〕性的纤维蛋白纠葛同上签，能加快凝血过程，使凝血因子按必定次序接踵激活而生成凝血酶，最终使纤维蛋白原变为纤维蛋在竹签上白，而纠结在竹签上，形成一层蛋白膜。机体凝血系统包含凝血和抗凝两个方面，二者间的动向均衡是正常机体保持体内血液流淌状态和防范血液丢掉的重点。机体的正常止凝血，主要依靠于完好的血管壁构造和功能，有效的血小板质量和数目，正常的血浆凝血因子活性。此中，血小板和凝血因子是生理性止凝血的重要成分,(见图1)。抗凝系统不单包含抗凝因子，还包含纤溶系统。BT出血时间 CFT束臂试验

CRT血块缩短试验

BPC血小板计数CT凝血时间 RT复钙时间

APTT活化局部凝血活酶时间PT凝血酶原时间 PF血小板第3因子 TF组织因子 Fb纤维蛋白3TXA2

血栓素A2

HT5－羟色胺 PK激肽开释酶原 HMWK高分子量激肽原图1 正常止血体制及血栓与止血常用选择试验检测环节血小板的作用：在正常的血液循环中，血小板其实不与内皮细胞外表或其余细胞发生作用，而是沿着毛细血管内壁摆列，保持其完好性，血管局部受损害时，血小板的止血兼有机械性的拥塞伤口和生物化学性粘附齐集作用。止血时，第一是受损的血管壁发生缩短，使局部血液流淌变慢或削减。血液中的血小板在vWF因子存在下快速粘附于暴露的胶原纤维，此时血小板被激活，血小板形态发生转变，由正常的圆盘状态变为圆(IIb/IIIa由纤维蛋白原介导发生相互粘附、齐集)，此为血小板第一相齐集，激活的血小板便发生开释反响和花生四烯酸代谢，此中很多物质，如血小板的ADP等，可加快血小板的齐集、变性成为不行逆的“其次相齐集”，形成白色血栓，构成了早期止血的屏障。与此同时，由血小开释和激活很多促凝物质参与血液分散反响。血小板膜磷脂外表供给了凝血反响的场所，血小板第3TXA2和5-HT促进进一步缩短，血小板缩短蛋白则最终可使纤维蛋白缩短(血块缩短)，使血栓更为结实，止血更为完全。凝血过程：血液分散简称凝血，是血液由流淌状态变为凝胶状态的过程，它是止血功能的重要构成局部。凝血过程是一系列凝血因子被接踵酶解激活的过程，最终生成凝血酶，形成纤维蛋白凝块。迄今为止，参与凝血的因子共有14个。此顶用罗马数字编号的有12个(从Ⅰ－Ⅷ，此中因子Ⅵ其实不存在)。习惯上，前4个凝血因子常分别称为纤维蛋白原(因子Ⅰ)、凝血酶(因子Ⅱ)、组织因子(因子Ⅲ)和钙离子(因子Ⅳ)VI是血清中活V，故不再视为一独立的凝血因子。内源性凝血门路内源性凝血门路是指参与的凝血因子全部来自血液(内源性)。临床上常以活化局部凝血活酶时间(APTT)来反响体内内源性凝血门路的状况。内源性凝血门路是指从因子Ⅻ激活，到因子 X激活的过程。当血管壁发生损害，内皮下组织暴露，带负电荷的内皮下胶原纤维与凝血因子接触，因子Ⅻ即与之联合，在HK和PK的参与下被活化为Ⅻa。在不依靠钙离子的条件下，因子Ⅻa将因子Ⅺ激活。在钙离子的存在下，活化的Ⅺa又激活了因子Ⅸ。单独的Ⅸa激活因子X的效劳相当低，它要与Ⅷa联合形成1：1的复合物，又称为因子X酶复合物。这一反响还确定有Ca2+和PL共同参与。2．外源性凝血门路外源性凝血门路：是指参与的凝血因子并不是全部存在于血液中，还有外来的凝血因子参与止血。这一过程是从组织因子暴露于血液而启动，到因子Ⅹ被激活的过程。临床上以凝血酶原时间测定来反响外源性凝血门路的情况。组织因子是存在于多种细胞质膜中的一种特异性跨膜蛋白。当组织损害后，开释该因子，在钙离子的参与下，它与因子Ⅶ一同形成1：1复合物。一般以为，单独的因子Ⅶ或组织因子均无促凝活性。但因子Ⅶ与组织因子联合会很快被活化的因子Ⅹ激活为Ⅶa，进而形成Ⅶa组织因子复合物，后者比Ⅶa单独激活因子Ⅹ加强16000倍。外源性凝血所需的时间短，反响快速。外源性凝血门路主要受组织因子门路抑制物(TFPI)调理。TFPI是存在于正常人血浆及血小板和血管内皮细胞中的一种糖蛋白。它经过与因子Ⅹa或因子Ⅶa-组织因子-因子Ⅹa联合形成复合物来抑制因子Ⅹa或因子Ⅶa-组织因子的活性。此外，争论表示，内源凝血和外源凝血门路能够相互活化。3．凝血的共同门路从因子X被激活至纤维蛋白形成，是内源、外源凝血的共同凝血门路。主要包含凝血酶生成和纤维蛋白形成两个阶段。凝血酶的生成：即因子Ⅹa、因子Ⅴa在钙离子和磷脂膜的存在下构成凝血酶原复合物，即凝血活酶，将凝血酶原转变为凝血酶。纤维蛋白形成：纤维蛋白原被凝血酶酶解为纤维蛋白单体，并交联形成稳固的纤维蛋白凝块，这一过程可分为三个阶段，纤维蛋白单体的生成，纤维蛋白单体的聚合，纤维蛋白的交联。纤维蛋白原含有三对多肽链，此中纤维蛋白肽A(FPA)和B(FPB)带很多负电荷，凝血酶将带负电荷多的纤维蛋ABFPAFPB能够反响凝血酶的活化程度，所以FPAFPB的浓度测定也可用于临床高凝状态的展望。纤维蛋白单体生成后，即以非共价键联合，形成能溶于尿素或氯醋酸中的纤维蛋白多聚体，又称为可溶性纤维蛋白。纤a与钙离子的参与下，相邻的纤维蛋鹤发生快速共价交联，形成不溶的稳固的纤维蛋白凝块。纤维蛋白与凝血酶有高亲和力，所以纤维蛋白生成后即能吸附凝血酶，这样不单有助于局部血凝块的形成，并且能够防止凝血酶向循环中集中。在凝血共同门路中有两步重要的正反响反响，有效地放大了内外源凝血门路Xa形成后，可反响激活因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ；二是凝血酶形成后，可反响激活因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅹ、Ⅺ、以及凝血酶原。凝血酶还可促进血小板发生齐集和开释反响，刺激血小板缩短蛋白惹起血块退却。但大批凝血的产生却反过来损坏因子Ⅷ、和因子Ⅴ，这是正常凝血的负反响调理，以防范不适合的过分凝血。抗凝剂的选择：LDH、丙酮酸激酶、AKP和淀粉酶有抑制作用。50～61u肝素/5ml血。留意钠盐可使淀粉酶高升。氟化钠：常用氟化钠—草酸钠混淆抗凝剂作血糖测定的抗凝剂