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实验报告2019.7.29~2019.9.1实验报告2019.7.29~2019.9.11PCR（聚合酶链式反应）1.目的：在物质中提取的DNA量较少，之后大量扩增，获得大量目的片段2.原理及过程：热变性温度：95度（计算方法：每对AT为2度，CG为4度）过程：DNA双链断裂形成单链复性温度：55度过程：引物配对上DNA单链延伸温度：72度过程：DNA酶催化DNA互补链的延伸循环（大约循环20~30次）PCR（聚合酶链式反应）1.目的：在物质中提取的DNA量较少23.反应成分模板DNA、引物、dNTP、Mix缓冲液（DNA聚合酶、镁离子）、去离子水4.方向：5’~3’5.产生数量反应初期以指数形式增加，之后进入平台期3.反应成分3聚丙烯酰胺凝胶电泳1.配胶、制胶用量：25ml大小的胶需要2.0g的琼脂糖凝胶固体。若目的DNA片段量过小可增加琼脂糖凝胶的浓度；相反，若DNA片段过大，可降低琼脂糖凝胶的浓度方法：配胶用单蒸水溶解，在微波炉中加热，放置微烫手，再加入核酸染液约20微升，可倒入胶板中等待凝固加样在一次性手套上将LoadingBuffer与样液混匀（6×LoadingBuffer为LoadingBuffer：样液=1：5）聚丙烯酰胺凝胶电泳1.配胶、制胶4保种保种液：25%甘油：将菌液低转速（5000rpm）大约离心2600ml的菌液（2管离心管）50%甘油：将菌液和保重液同体积混合保种贮藏加入600~700微升的保种液，放置在-80度中（保种管、离心管）保存保种保种液：5生物膜的抑膜与解膜抑膜与解膜的定义：抑膜是在细菌生长的同时加入化合物是细菌不成膜；解膜是利用化合物降解已存在的细胞膜。对致病菌的认识：枯草芽孢杆菌：阳性菌，形成的细胞膜在液体与气体表面，褶皱铜绿假单胞菌：阴性菌，形成的细胞膜在液体底部金黄色葡萄球菌：阳性菌，形成的细胞膜在液体底部生物膜的抑膜与解膜抑膜与解膜的定义：抑膜是在细菌生长的同时加6对成膜条件的尝试将涂平板的细菌接入液体培养基（LB）中，摇床24小时左右在酶标仪中测量LB中的细菌数，将细菌稀释到5×10^5，放入24孔板中培养，总体积约1~1.5ml对成膜条件的尝试7实验设计：对照：Msgg培养基+菌液阴性对照：Msgg培养基+菌液+DMSO实验组：Msgg培养基+菌液+不同浓度梯度的化合物实验结果

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