第九章化学发光免疫技术课件

第九章化学发光免疫技术第九章化学发光免疫技术1优选第九章化学发光免疫技术优选第九章化学发光免疫技术2发光免疫分析:

是将发光分析和免疫反应相结合而建立起来的一种新的检测微量抗原或抗体的新型标记免疫分析技术。全自动化学发光分析仪发光免疫分析:

是将发光分析和免疫反应相结合而建立起来的一种3第一节概述一、发光的分类是指一种物质由电子激发态回复到基态时，释放出的能量表现为光的发射，称为发光。根据形成激发态分子的能量来源不同，可将发光分为三种光照发光、生物发光和化学发光。第一节概述一、发光的分类4（一）光照发光是指发光剂经短波长入射光照后进入激发态，回至基态时发出较长的可见光。（一）光照发光是指发光剂经短波长入射光照后进入激发态，回至基5（二）生物发光典型例子为荧火虫发光。荧火虫发光素光ATP、O2、Mｇ2+荧光素酶（二）生物发光典型例子为荧火虫发光。ATP、O2、Mｇ2+荧6（三）化学发光是指常温下经化学反应所产生的发射光。化学发光是一个多步骤的过程。（三）化学发光是指常温下经化学反应所产生的发射光。71928年，化学家首次发现这种化合物有一个奇妙的特性，它被氧化时能发出蓝光。在检验血痕时，鲁米诺与血红蛋白发生反应，显出蓝绿色的荧光。在化学发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放能量的化合物，称为化学发光剂或发光底物。五、化学发光免疫的非均相分离方式RT3反三碘甲状腺原氨酸二、化学发光产生的条件MyoglobinI肌红蛋白2、这些化学能必须能被某种物质分子吸收而产生电子激发，并且有足够的光量子产生。二、发光剂的标记技术（自学）FSH促卵泡激素TPA组织多肽抗原E2，Estradiol雌二醇RT3反三碘甲状腺原氨酸第九章化学发光免疫技术AFP甲胎蛋白一、直接化学发光免疫分析二、发光剂的标记技术（自学）荧火虫发光素光四、化学发光免疫技术的分类TMA甲状腺微粒体抗体二、化学发光产生的条件1、反应必须提供足够的能量（170300KJ/mol）2、这些化学能必须能被某种物质分子吸收而产生电子激发，并且有足够的光量子产生。1928年，化学家首次发现这种化合物有一个奇妙的特性，它被氧8直接化学发光间接化学发光直接化学发光9三、化学发光效率三、化学发光效率10AFP甲胎蛋白3、电化学发光免疫分析4、鲁米诺氧途径免疫分析LH黄体生成素MyoglobinI肌红蛋白五、化学发光免疫的非均相分离方式2、化学发光酶免疫分析TPA组织多肽抗原PSA前列腺特异性抗原在检验血痕时，鲁米诺与血红蛋白发生反应，显出蓝绿色的荧光。在化学发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放能量的化合物，称为化学发光剂或发光底物。四、化学发光免疫技术的分类鲁米诺早在1853年就被合成出来了。FSH促卵泡激素TPA组织多肽抗原第九章化学发光免疫技术四、化学发光免疫技术的分类1、直接化学发光免疫分析2、化学发光酶免疫分析3、电化学发光免疫分析4、鲁米诺氧途径免疫分析常用化学发光剂：（1）吖啶酯类直接标记发光剂（2）三联吡啶钌电化学发光剂（3）酶促反应发光剂：鲁米诺AMPPD(金刚烷)AFP甲胎蛋白四、化学发11（一）固相分离——板式或管式（二）过滤分离——过滤杯（膜）（三）珠式分离——与丙烯酰胺小珠子（四）顺磁珠性颗粒分离——顺磁性颗粒五、化学发光免疫的非均相分离方式（一）固相分离——板式或管式五、化学发光免疫的非均相分离方式12一、化学发光剂在化学发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放能量的化合物，称为化学发光剂或发光底物。第二节化学发光剂和标记技术一、化学发光剂在化学发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的13第九章化学发光免疫技术课件14第九章化学发光免疫技术课件15第九章化学发光免疫技术课件16五、化学发光免疫的非均相分离方式三、电化学发光免疫分析五、化学发光免疫的非均相分离方式FTEST游离睾酮TroponinI肌钙蛋白I化学发光免疫技术因标记物为非放射性物质，且易于实现自动化，具有快速、简便、灵敏、特异等特点，已广泛应用于各种激素、肿瘤标志物、药物及其化微量生物活性物质测定。TroponinI肌钙蛋白I五、化学发光免疫的非均相分离方式CEA癌胚抗原四、化学发光免疫技术的分类PSA前列腺特异性抗原在化学发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放能量的化合物，称为化学发光剂或发光底物。（四）顺磁珠性颗粒分离——顺磁性颗粒荧火虫发光素光在检验血痕时，鲁米诺与血红蛋白发生反应，显出蓝绿色的荧光。荧火虫发光素光（3）酶促反应发光剂：鲁米诺化学名称为3氨基邻苯二甲酰肼。3、电化学发光免疫分析五、化学发光免疫的非均相分离方式17第九章化学发光免疫技术课件18第九章化学发光免疫技术课件19鲁米诺早在1853年就被合成出来了。1928年，化学家首次发现这种化合物有一个奇妙的特性，它被氧化时能发出蓝光。化学名称为3氨基邻苯二甲酰肼。刑侦学应用在检验血痕时，鲁米诺与血红蛋白发生反应，显出蓝绿色的荧光。这种检测方法极为灵敏，能检测只有百万分之一含量的血。鲁米诺早在1853年就被合成出来了。1928年，化学家首次发20第九章化学发光免疫技术课件21第九章化学发光免疫技术课件22二、发光剂的标记技术（自学）

二、发光剂的标记技术（自学）

23第三节化学发光免疫分析的类型一、直接化学发光免疫分析第三节化学发光免疫分析的类型一、直接化学发光免疫分析24五、化学发光免疫的非均相分离方式PrenatalScreening产前筛查TumorMakers肿瘤标志物（四）顺磁珠性颗粒分离——顺磁性颗粒2、化学发光酶免疫分析保证了临床应用中的简便性，避免了试验中的稀释误差。HCG/βHCG绒毛膜促性腺激素1、直接化学发光免疫分析（3）酶促反应发光剂：鲁米诺优选第九章化学发光免疫技术Thyroid甲状腺四、化学发光免疫技术的分类化学名称为3氨基邻苯二甲酰肼。TPA组织多肽抗原CKMB肌酸激酶同工酶五、化学发光免疫的非均相分离方式AMPPD(金刚烷)2、这些化学能必须能被某种物质分子吸收而产生电子激发，并且有足够的光量子产生。2、这些化学能必须能被某种物质分子吸收而产生电子激发，并且有足够的光量子产生。二、发光剂的标记技术（自学）四、化学发光免疫技术的分类五、化学发光免疫的非均相分离方式25二、化学发光酶免疫分析发光酶免疫分析(LEIA):是用参与催化某一发光反应的酶来标记抗原或抗体，在抗原抗体反应结束后，加入底物，通过酶催化底物发光反应，发出的光在特定仪器上进行测定。二、化学发光酶免疫分析发光酶免疫分析(LEIA):是用参与催26HRP标记的LEIA（一）辣根过氧化酶标记的化学发光免疫分析HRP标记的LEIA（一）辣根过氧化酶标记的化学发光免疫分析27（二）碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析ALP标记的LEIA（二）碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析ALP标记的LEIA28第九章化学发光免疫技术课件29三、电化学发光免疫分析电化学发光免疫分析（ECLIA）是电化学发光和免疫测定相结合的产物。三、电化学发光免疫分析电化学发光免疫分析（ECLIA）是电化30第九章化学发光免疫技术课件31第四节化学发光免疫测定的临床应用化学发光免疫技术因标记物为非放射性物质，且易于实现自动化，具有快速、简便、灵敏、特异等特点，已广泛应用于各种激素、肿瘤标志物、药物及其化微量生物活性物质测定。第四节化学发光免疫测定的临床应用化学发光免疫技术因标记物为32临床应用特点1、灵敏度高，特异性强可实现ng甚至pg级微量待测物的定量检测，保证了各种激素、病毒抗原抗体等微量物质的准确定量测定。临床应用特点1、灵敏度高，特异性强332、线性范围宽可满足103106数量级的绝对定量检测需要。保证了临床应用中的简便性，避免了试验中的稀释误差。2、线性范围宽343、标记物稳定，试剂有效期长有效期可长达一年3、标记物稳定，试剂有效期长354、自动化程度高，检测菜单齐全4、自动化程度高，检测菜单齐全36Thyroid甲状腺T3三碘甲状腺原氨酸T4四碘甲状腺原氨酸FT3游离三碘甲状腺原氨酸FT4游离四碘甲状腺原氨酸RT3反三碘甲状腺原氨酸TRAB促甲状腺受体抗体TGA甲状腺球蛋白抗体TMA甲状腺微粒体抗体TG甲状腺球蛋白TSH(3rdGen)促甲状腺激素(第三代超敏)Thyroid甲状腺37Fertility生育FSH促卵泡激素LH黄体生成素PRL催乳素E2，Estradiol雌二醇PRG孕酮TEST睾酮FTEST游离睾酮HCG/βHCG绒毛膜促性腺激素BHCG绒毛膜促性腺激素B亚单位FE3游离雌三醇PAPPA妊娠相关血浆蛋白DHEAS脱氢表雄酮Fertility生育38Cardiac心血管及心肌标志物类TroponinI肌钙蛋白IMyoglobinI肌红蛋白CKMB肌酸激酶同工酶AI血管紧张素IAII血管紧张素IIAldosterone醛固酮脑自然肽N端前体蛋白Cardiac心血管及心肌标志物类39TumorMakers肿瘤标志物AFP甲胎蛋白CEA癌胚抗原Ferritin铁蛋白TPA组织多肽抗原PAP前列腺酸性磷酸酶PSA前列腺特异性抗原FPSA游离前列腺特异性抗原CA125糖类抗原125TumorMakers肿瘤标志物40TGA甲状腺球蛋白抗体CA125糖类抗原125PAPPA妊娠相关血浆蛋白1、直接化学发光免疫分析FE3游离雌三醇是指发光剂经短波长入射光照后进入激发态，回至基态时发出较长的可见光。（一）辣根过氧化酶标记的化学发光免疫分析保证了临床应用中的简便性，避免了试验中的稀释误差。2、化学发光酶免疫分析TumorMakers肿瘤标志物五、化学发光免疫的非均相分离方式TRAB促甲状腺受体抗体FSH促卵泡激素1、反应必须提供足够的能量（170300KJ/mol）（四）顺磁珠性颗粒分离——顺磁性颗粒四、化学发光免疫技术的分类荧火虫发光素光（一）固相分离——板式或管式FT4游离四碘甲状腺原氨酸第二节化学发光剂和标记技术（2）三联吡啶钌电化学发光剂AFP甲胎蛋白ATP、O2、Mｇ2+AFP甲胎蛋白BHCG绒毛膜促性腺激素B亚单位MyoglobinI肌红蛋白在化学发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放能量的化合物，称为化学发光剂或发光底物。FTEST游离睾酮保证了临床应用中的简便性，避免了试验中的稀释误差。优选第九章化学发光免疫技术CKMB肌酸激酶同工酶是指常温下经化学反应所产生的发射光。化学发光是一个多步骤的过程。化学名称为3氨基邻苯二甲酰肼。1、直接化学发光免疫分析五、化学发光免疫的非均相分离方式五、化学发光免疫的非均相分离方式AMPPD(金刚烷)1、反应必须提供足够的能量（170300KJ/mol）荧火虫发光素光（2）三联吡啶钌电化学发光剂四、化学发光免疫技术的分类ATP、O2、Mｇ2+在检验血痕时，鲁米诺与血红蛋白发生反应，显出蓝绿色的荧光。第九章化学发光免疫技术2、这些化学能必须能被某种物质分子吸收而产生电子激发，并且有足够的光量子产生。4、自动化程度高，检测菜单齐全化学发光免疫技术因标记物为非放射性物质，且易于实现自动化，具有快速、简便、灵敏、特异等特点，已广泛应用于各种激素、肿瘤标志物、药物及其化微量生物活性物质测定。AFP甲胎蛋白E2，Estradiol雌二醇（一）固相分离——板式或管式AFP甲胎蛋白优选第九章化学发光免疫技术FPSA游离前列腺特异性抗原在化学发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放能量的化合物，称为化学发光剂或发光底物。（3）酶促反应发光剂：鲁米诺荧火虫