选一21微生物的实验室培养课件

专题2微生物的培养与应用专题2微生物的培养与应用1特点：结构相当简单,个体多数十分微小。微生物包括哪五类：病毒细菌放线菌真菌原生动物微生物基础知识特点：结构相当简单,个体多数十分微小。微生物包括哪五类：病毒2SARS病毒、禽流感病毒、是由一个核酸分子（DNA或RNA）与蛋白质构成的非细胞形态的营寄生生活的生命体。病毒SARS病毒、禽流感病毒、是由一个核酸分子（DNA3细菌细胞微小而透明，通常用适当染料染色后显微镜观察

常见的三种细菌典型形态葡萄球菌大肠杆菌霍乱弧菌细菌细菌细胞微小而透明，通常用适当染料染色后显微镜观察4放线菌结构：原核细胞分支状的菌丝（营养（基内）菌丝、气生菌丝）链霉素、土霉素、四环素、氯霉素、红霉素、庆大霉素应用:放线菌结构：链霉素、土霉素、四环素、应用:5真菌是一种真核生物，通常又分为三类，即酵母菌、霉菌和蕈菌（大型真菌）真菌是一种真核生物，通常又分为三类，即酵母菌、霉菌和蕈菌（6是动物界中最低等的一类真核单细胞动物，个体由单个细胞组成。原生动物草履虫大变形虫是动物界中最低等的一类真核单细胞动物，个体由单个细胞组成。7课题1微生物的实验室培养（以培养大肠杆菌为例）一、需要为培养的微生物提供合适的营养和环境条件二、需要确保其他微生物无法混入配制培养基进行无菌操作在实验室中培养纯净的微生物，需要为培养物提供怎样的条件呢？课题1微生物的实验室培养（以培养大肠杆菌为例）一、需8一、基础知识：（一）培养基

1.概念：

2.培养基的类型和用途液体培养基固体培养基据物理性质分天然培养基合成培养基据化学成分分选择培养基鉴别培养基据用途分

培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。半固体培养基一、基础知识：（一）培养基1.概念：2.9标准培养基类型配制特点主要应用物理性质固体培养基半固体培养基液体培养基化学组成合成培养基天然培养基目的用途选择培养基鉴别培养基加入琼脂较多加入琼脂较少不加入琼脂添加（或缺少）某种化学成分添加某种指示剂或化学药剂由已知成分配制而成，培养基成分明确菌种的分离菌种的鉴别菌种分离,鉴定,计数菌种保存工业生产，连续培养菌种分类、鉴定工业生，产降低成本由天然成分配制而成，培养基成分不明确标准培养基类型配制特点主要应用物理性质固体培养基半固体培养基10选择培养基加入青霉素的培养基:

分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基:

分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基:

分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基:

分离自养型微生物选择培养基加入青霉素的培养基:11大肠杆菌在伊红美蓝培养基上典型特征

鉴定培养基：鉴定所培养生物的类型紫黑色，并带有金属光泽大肠杆菌在伊红美蓝培养基上典型特征鉴定培养基：鉴定所培养生12固体培养基：菌落固体培养基：菌落132.特征：大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。3.功能：1.定义：菌落鉴定菌种的重要依据单个或少数菌体在固体培养基上大量繁殖子细胞群体2.特征：大小、形状、光泽度、3.功能：1.定义：菌落鉴定菌14几种菌落及其形态金黄色葡萄球菌菌落路邓葡萄球菌几种菌落及其形态金黄色葡萄球菌菌落路邓葡萄球菌153、培养基的营养构成淀粉琼脂培养基(培养放线菌用)

可溶性淀粉20g

KNO3

1g

NaCl0.5g

K2HPO40.5g

MgSO40.5g

FeSO40.01g

琼脂20g

水1000ml

pH7.2—7.4pH7.0—7.23、培养基的营养构成淀粉琼脂培养基(培养放线菌用)pH16

不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、和氮源、无机盐；3、培养基的营养构成另外还需要满足微生物生长对pH、氧气以及特殊营养物质（如生长因子）等的要求。

不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、和氮源、无17碳源

（1）概念：（2）不同微生物所利用的碳源不同①异养型：②自养型：含碳有机物（有机碳）含碳无机物（无机碳）3、培养基的营养构成糖类（主要）、蛋白质、脂肪酸碳酸盐，碳酸氢盐，二氧化碳等①构成细胞物质和一些代谢产物②异养微生物的能源（3）作用：凡是能为微生物提供碳元素的营养物质碳源

（1）概念：（2）不同微生物所利用的碳源不同含碳18①无机氮源：N2、NH4+、NO3-、NH3等。②有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等。凡是能够为微生物提供N元素的营养物质。主要用于合成蛋白质、核酸及含N的代谢产物。氮源（1）概念：⑵来源：⑶作用：①无机氮源：N2、NH4+、NO3-、NH3等。②有机氮源：19生长因子⑶常见的生长因子：⑴概念：⑵作用：微生物生长不可缺少的微量有机物。酶和核酸的组成成分。维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。生长因子⑶常见的生长因子：⑴概念：⑵作用：微生物生长不可缺少20（二）无菌技术1.定义：

无菌技术泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。（1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；

（2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；

（3）为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近旁进行；

（4）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。

应该从哪些方面避免杂菌污染呢？（二）无菌技术1.定义：无菌技术泛指在培养微生物21（1）消毒和灭菌的定义：2.消毒与灭菌的概念及两者的区别

比较项理化因素的作用强度消灭微生物的数量芽孢和孢子能否被消灭消毒灭菌较为温和部分生活状态的微生物不能强烈全部微生物能（2）区别：（1）消毒和灭菌的定义：2.消毒与灭菌的概念及两者的区别比22芽孢有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。孢子细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖作用的生殖细胞。能直接发育成新个体。芽孢有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，233.常用的消毒与灭菌的方法（1）消毒的方法1、煮沸消毒法：2、巴氏消毒法：3、化学药物消毒法:4、紫外线消毒：……消毒灭菌方法有哪些？分别适用于哪些操作对象？如何操作？紫外线照射30min70-75℃下煮30min或80℃下煮15min用75%酒精进行皮肤消毒;氯气消毒水源；适量喷洒石碳酸或煤酚皂溶液消毒100℃煮沸5-6min3.常用的消毒与灭菌的方法（1）消毒的方法1、煮沸消毒法：消24①灼烧灭菌②干热灭菌

③高压蒸汽灭菌

（2）灭菌的方法干热灭菌箱160-170℃下加热1-2h。100kPa、121℃下维持15-30min。①灼烧灭菌（2）灭菌的方法干热灭菌箱160-170℃下加热251.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外,还有什么目的？2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。旁栏思考消毒灭菌1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物26

本实验采用牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠杆菌的纯化培养。1、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基2、纯化大肠杆菌大肠杆菌二、实验操作(以培养大肠杆菌为例)实验过程分为两个阶段：本实验采用牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠杆菌的纯化培27二、实验操作(以培养大肠杆菌为例)㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.计算2.称量3.溶化4.灭菌:5.倒平板:二、实验操作(以培养大肠杆菌为例)㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养281.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？问题讨论1

可用手触摸锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手时，就可以倒平板了。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？

通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。293.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？可以防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染。空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.在倒平板的过程中，如305.如何检验制备的培养基灭菌是否合格？如果未接种的培养基在恒温箱中保温1—2天，无菌落生长，说明培养基的制备成功；否则需要重新制备。5.如何检验制备的培养基灭菌是否合格？如果未接种的培养基在恒31（二）纯化大肠杆菌微生物的纯化：将待检测微生物样品通过划线或涂布接种在固体培养基上，样品中的每一个细胞或孢子都可以生长繁殖形成单个菌落。将单个菌落接种到斜面培养基上，经过培养后，即可得到一个微生物的纯种。（二）纯化大肠杆菌微生物的纯化：将待检测微生物样品通过划线或32平板划线的操作（二）纯化大肠杆菌平板划线法和稀释涂布平板法。1.微生物的接种的常用接种方法：2.平板划线的操作方法平板划线的操作（二）纯化大肠杆菌平板划线法和稀释涂布平板法。33选一21微生物的实验室培养ppt课件34选一21微生物的实验室培养ppt课件35选一21微生物的实验室培养ppt课件361.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？

以免接种环温度太高，杀死菌种。问题讨论22.不要划破培养基的原因？为了不影响对菌落形态的观察和特征鉴别；一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的。1.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？373.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？

操作的第一步灼烧接种环是：问题讨论2

每次划线前灼烧接种环是：为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物

为了杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。3.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？384.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。4.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是395.在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？问题讨论2划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。5.在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？问题讨论406.描述什么是平板划线法？6.描述什么是平板划线法？413.稀释涂布平板法系列（梯度）稀释操作9mL水9mL水9mL水9mL水9mL水9mL水1mL1011021031041051061mL1mL1mL1mL1mL稀释涂布平板法操作过程分两个步骤，即系列稀释操作和涂布平板操作。3.稀释涂布平板法系列（梯度）稀释操作42涂布平板操作涂布平板操作43

1.涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？

应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。问题讨论31.涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划442.描述什么是稀释涂布平板法？9mL水9mL水9mL水9mL水9mL水9mL水1mL1011021031041051061mL1mL1mL1mL1mL系列稀释操作2.描述什么是稀释涂布平板法？9mL水9mL水9mL水9mL453.平板划线法和稀释涂布平板法为什么能纯化微生物？通过连续划线，使细菌数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终得到单个细菌繁殖而来的菌落。问题讨论3在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落。3.平板划线法和稀释涂布平板法为什么能纯化微生物？通过连续划46平板划线法和稀释涂布平板法的操作方法各不相同。但技术核心都是要防止杂菌污染，保证培养物的纯度。菌落分布并不均匀，不易分离出单个菌落，不能计数菌落分布均匀，便于计数平板划线法和稀释涂布平板法的操作方法各不相同。但技术核心都是47斜面接种穿刺接种斜面接种穿刺接种485.菌种的保藏接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保存。4.微生物的恒温培养⑵长期保存：甘油冷冻管藏法⑴临时保藏：保持菌种的纯净1mL甘油灭菌+1mL菌液，充分混合后，于-20℃的冷冻箱中保存5.菌种的保藏接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于449三、结果分析与评价（一）培养基的制作是否合格如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。（二）接种操作是否符合无菌要求如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。（三）是否进行了及时细致的观察与记录培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。三、结果分析与评价（一）培养基的制作是否合格50微生物的培养基础知识实验操作结果分析与评价培养基定义：分类：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配置出供其生长繁殖的营养物质固体培养基液体培养基无菌技术培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法定义：消毒与灭菌常用消毒灭菌方法制备牛肉膏蛋白胨固体培养基纯化大肠杆菌课堂小结微生物的培养基础实验操作结果分析与评价培养基定义：分类：人们51课堂检测1、有关微生物营养物质的叙述中，正确的是（）A.是碳源的物质不可能同时是氮源B.凡碳源都提供能量C.除水以外的无机物只提供无机盐D.无机氮源也能提供能量D课堂检测1、有关微生物营养物质的叙述中，正确的是（52营养类型能源氢的供体基本碳源微生物举例代谢类型光能无机营养(光能自养型)光能有机营养(光能异养型)化能无机营养(化能自养型)化能有机营养(化能异养型)光光无机物有机物无机物有机物无机物有机物二氧化碳二氧化碳及简单有机物二氧化碳有机物大多数已知细菌和全部真核微生物硝化细菌氢细菌紫色非硫细菌蓝细菌绿色硫细菌藻类营养类型能源氢的供体基本碳源微生物举例代谢类型光能无机营养(53编号成分含量①粉状硫10g②（NH4）2SO40.4g③K2HPO44.0g④MgSO49.25g⑤FeSO40.5g⑥CaCl20.5g⑦H2O100ml2、右表是某微生物培养基成分，请据此回答：（1）右表培养基可培养的微生物类型是

。自养型微生物编号成分含量①粉状硫10g②（NH4）2SO40.4g③K254（3）若除去成分②，加入（CH2O），该培养基可用于培养

。（4）表中营养成分共有

类。（5）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是

。（6）用于菌种鉴定，应该增加的成分是

。固氮微生物

3调整pH

琼脂（或凝固剂）（3）若除去成分②，加入（CH2O），该培养基可用于培养552011河南高考有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题：（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以

为唯一碳源的固体培养基土，从功能上讲，该培养基属于

培养基。原油选择2011河南高考原油选择56（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即

和

。（3）为了筛选出高效