形态学实验技术

形态学实验技术河北联合大学实验中心李琪佳组织切片制作技术

石蜡切片常规染色技术石蜡切片特殊染色技术免疫组织（细胞）化学技术

免疫细胞化学的理论基础免疫荧光细胞化学技术免疫酶细胞化学技术亲和免疫细胞化学技术

重点介绍：电子显微镜技术（electronmicroscope,EM）1.透射电子显微镜2.扫描电子显微镜3.电镜技术与生物医学超微结构4.细胞超微结构与超微结构病理激光扫描共聚焦显微镜技术（ConfocalLaserScanningMicroscope）集高、精、尖细胞分析及工程技术于一体的新技术。该仪器突破了普通光学显微镜不能对细胞或组织内部进行定位检测的限制，实现了对细胞内部光学断层扫描成像。可检测细胞内核酸、细胞骨架、细胞内pH、Ca离子浓度、膜电位、过氧化物、细胞间通讯、细胞筛选及定量等。为活细胞功能研究开辟了新途径，成为现代细胞生物学研究不可缺少的的工具。流式细胞仪技术（FlowMicrofluorimetry）

是一种单细胞定量分析和分选的新技术。其范围包括了细胞表面或细胞内的各种抗原、蛋白、酶以及基因表达产物；还有细胞内的核酸定量或DNA倍体、细胞周期分析；尤其是癌基因的检测、血细胞表型分析、细胞分子和粘附分子的检查、细胞凋亡分析、肿瘤相关抗原及单种细胞的纯化。第一章组织切片制作技术第一节概述

组织切片的制作技术属于组织病理学范畴它是指采用包埋剂使组织内渗入某种支持物质，使组织保持一定的硬度，然后利用切片机切成薄片，经染色在显微镜下观察。根据支持物的不同，有石蜡切片、明胶切片、塑料切片、冷冻切片等类别。制成的切片捞置于载物网上，经烘干后可进行染色或备用。

组织切片技术包括组织的取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片及染色等。组织病理学标本大致可分为：手术标本、内镜取材标本、穿刺标本、细胞学标本第二节组织的处理

取材固定脱水透明浸蜡与包埋一、取材（tisssueprocessing）1材料新鲜：活检组织离体后立即固定，最迟不能高于30分钟。2取材部位及切面：纵切或横切往往是显示组织结构明晰的关键。掌握正确的取材部位就必须熟悉机体的组织结构和解剖特点，原则上应在病变与正常组织的交界处取材，避开坏死出血区。，甚至卷曲变形，特别是神经肌肉组织，可将其两端扎在木片或小木棍上进行固定。3.勿使组织受挤压：取材刀剪应锋利，切开时取材刀严禁来回挫动，以避免组织结构变形、细胞破碎。

4.防止变形：固定后的组织或多或少会产生收缩现象5组织块力求小而薄：切块的大小、厚度及质地决定了固定的效果，一般情况下，取材大小为2×1cm，厚度为2－4mm。二、固定（fixation）固定是将某些化学试剂（固定液）渗透到需要保存或制作切片的脏器或组织、细胞中，使其所含物质尽量保持在生活状态时的形态结构和位置。固定的目的：1.迅速防止组织细胞的死后变化,防止自溶与腐败使之尽量保持生前的形态结构。2.使细胞内的蛋白质、糖、脂肪、酶等成分变为不溶性物质，以保持其原有形态及特定位置。3.能将细胞的半液体状变成半固体状，使组织变硬以利切片。4.可使组织内的各种成分产生不同的折光率。5.某些固定液可起助染作用而增进染色。固定方法

浸泡固定注射、灌注固定微波固定蒸汽固定常用的固定剂单纯性固定剂：甲醛（福尔马林formalin）乙醇；乙酸。混合固定剂：中性甲醛pH7.0（甲醛、磷酸缓冲液）；A-F液（甲醛、酒精）三、脱水（dehydration）将组织内的水分用某些化学试剂置换出来的过程脱水的目的标本经固定和水洗后，组织内有大量水份，不能与二甲苯混溶，因此必须脱水。常用的脱水剂和脱水方法脱水剂有：乙醇、丙酮等

80％酒精30分钟

95％酒精1－2小时

95％酒精1－2小时

100％酒精1－2小时

100％酒精1－2小时四、透明（clearing）

为使石蜡能浸入组织块，组织脱水后必须经过一种既能与酒精相混合，又能溶解石蜡的溶剂，而达到石蜡浸入组织块的目的。此时因组织块的水分被二甲苯取代，其折射指数接近于组织蛋白的折光指数，组织块变得透亮。因此透明是石蜡包埋前的一个特定步骤。透明的目的：便于浸蜡、包埋。透明剂即能与脱水剂相混溶，又能与包埋剂（石蜡）相混溶，起到桥梁作用。

大多数脱水剂不能和包埋剂（石蜡）混溶，故必须通过透明剂置换出脱水剂后才能进行后续程序。常用的透明剂二甲苯：为最常用的透明剂，有毒、易燃、易挥发；沸点1380C-1400C,长期接触对粘膜有刺激作用。氯仿:易挥发微溶于水，易溶于醇、醚、苯等。它比二甲苯透明力差，但不宜使组织变脆，使大块组织的良好透明剂常用的透明方法二甲苯透明法（常用）：彻底脱水的组织块二甲苯1二甲苯2，此二步总的时间不超过40分钟。氯仿透明法：彻底脱水的组织块按3：1氯仿、纯酒精混合液1小时氯仿1-2小时1：1氯仿石蜡混合液1小时。五、浸蜡与包埋浸蜡(paraffininfiltrating)和包埋(embedding)

是指标本经过前期处理后，再置于支持物中，使支持物透入组织内部，并将组织埋入、包裹的过程。常用的支持物有明胶、石蜡、火棉胶、树脂、炭蜡等，他们及时浸透剂又是包埋剂。其中最常用的是石蜡。

浸蜡的方法此法应在560C－620C的温箱内进行，液状石蜡的量应为标本的25－30倍。方法：透明后的组织520C－540C（软蜡）1小时540C－560C石蜡1小时580C－600C（硬蜡）1小时540C－560C石蜡进行包埋第三节组织切片切片（section）1.整修蜡块：组织四周应留有2－4mm蜡边，蜡块的上下两边应平行。2.镶装：镶装平面应尽可能与切片刀刃平行。3.调整：切片机的进度尺常定在4－6μm，切片刀的倾斜角在20度左右。4.修切平面：修切的组织片不能过厚，以免造成组织块的人为损失，标准为15μm／次。5.切片：要求质量，左手毛笔，右手眼科镊，转速均匀。6.展片、捞片：常用水温为450C左右，组织膜与玻片附着的位置为，右手持片，玻片的左2／3正中。7.烘片：烘烤箱的温度为630C以下，时间常为12小时。第二章石蜡切片常规染色技术第一节概述染色的意义及目的:染色（stainning）是用染液对组织切片进行处理，使组织中的不同成分被染上相应的颜色，产生不同的折射率，以利于光镜观察和分析。组织染色属于生物染色的范畴。染色种类：包括普通染色、特殊染色、单一染色、多色染色等。第二节苏木素—伊红染色（HE染色）苏木素（haematoxylin）又称苏木精，一种天然碱性染料，对细胞核具有优良的染色能力。伊红Y（eosin）又称曙红Y,简称伊红，属酸性染料，是良好的细胞质染色剂。苏木素(haematoxylin)—伊红染色法，简称HE染色，是医学领域中最广泛应用于细胞和组织的染色方法，也被称为常规染色。一、HE染色的基本原理细胞核染色的原理：细胞核主要由DNA构成，带负电荷，呈酸性，易于带正电荷的碱性染料结合。

细胞质的染色原理:细胞之内主要成分是蛋白质,为两性化合物，细胞浆的染色与pH值有密切关系，当pH调到蛋白质等电点时，胞浆对外不显电性，此时酸或碱性染料不易染色。

必须将pH调至等电点以下时，再染液中加入醋酸使胞浆带正电（阳离子），就可被带负电荷（阴离子）的染料染色。

伊红Y:是一种化学合成的酸性染料，在水中解离成带负电的阴离子，与蛋白质的带氨基正电荷（阳离子）结合而使细胞浆染成红色。

二、染色方法1.自温箱中取出切片后，立即放入二甲苯①、②中脱蜡各5分钟。2.入纯酒精1、2中各5分钟以洗去二甲苯。3.入95%酒精和80%酒精中各5分钟。4.入自来水洗涤（水化）。5.入苏木素染液5-10分钟。6.自来水洗。7.0.5-1%盐酸酒精分化数秒钟。8.

充分水洗蓝化30分钟。9.0.5-1%伊红1-2分钟。10.80%、95%、纯酒精1、2(脱水)各5分钟。11.

二甲苯1、2中(透明)各5－10分钟。12.

中性树胶封固。HE染色中二甲苯、酒精和水洗作用：1.二甲苯的作用:二甲苯可以洗去石蜡，使染料更易进入到细胞和组织内；染色后的二甲苯起透明切片的作用。以利于光线的透过。2.酒精的作用:酒精用于苏木素染色前由高浓度向低浓度逐渐下降处理切片,洗脱用于脱蜡的二甲苯。酒精和二甲苯互溶，二甲苯被除去。梯度酒精(95%,80%)使水分逐渐进入切片，以免引起细胞形态结构的人工改变。伊红染色后的梯度酒精(80%,90%,95%,100%)是为了逐渐脱去组织中的水分,为二甲苯进入细胞(透明)创造条件。否则切片组织不能显示清晰的细胞和组织结构。3.水洗:水洗是为了使苏木精进入细胞核内，使细胞核着色；染色后的水洗是为洗去未与切片结合的染液；分化后的水洗是为了除去分化液和脱下的染料。HE染色中分化和蓝化的作用：1.分化作用:苏木素染色后,水洗去未结合在切片中的染液,但细胞核内结合过多的染液和细胞浆中吸附过多的染料必须用分化液(1%盐酸酒精）脱去，以保证核与浆的染色分明。将此过程称为染色的分化作用。但不能过度。2.蓝化作用:

当分化以后苏木精在酸性条件下处于红色离子状态，在碱性条件下则处于兰色离子状态。所以分化后用水洗去酸而中止分化，也可用稀氨水或温水变蓝。此过程称蓝化作用。第三节组织切片特殊染色(Masson三色染色)

为了显示组织或细胞中的正常结构或病理过程中出现的异常物质、病变、病原体等，需要选用相应的显示这些成分的染色方法进行染色，这些是常规染色所不能的。故称特殊染色。如细胞中的黑色素或含铁血黄素的区别，用特殊染色即可做到。

结缔组织含有三种纤维，即胶原纤维、网状纤维和弹力纤维。这三种纤维广泛分布于身体各处，常见于器官与器官之间，组织与组织之间以及细胞和细胞之间，这些纤维具有支持、连接、营养、防御、保护和创伤修复等功能，在H.E染色中有时难以区别，特别是在某些病理改变时，则要借助于特染鉴别。

特殊染色的方法很多，在此仅介绍胶原纤维染色。显示胶原纤维的方法很多，最常用的是Masson三色染色和V.G染色。应用：判定多种组织、器官的病变程度及修复情况；区分肿瘤组织中的纤维与平滑肌成分。Masson三色染色技术操作Masson复合染色液：酸性复红、丽春红、橘黄G、醋酸亮绿染色液（可用苯胺蓝替换）：亮绿、醋酸染色过程：

1.切片脱蜡至水

2.苏木素染5分钟,水洗

3.盐酸酒精分化,水洗

4.染于丽春红复红液5分钟,水洗5.磷钼酸水溶液分化5分钟,水洗6.染于亮绿2-5分钟7.脱水、透明、封固结果判定:胶原纤维呈绿色或蓝色，肌纤维、纤维素、红细胞呈红色，胞核呈蓝黑色。脑尼氏体

星形细胞肾淀粉样变刚果红染色肝表面抗原维多利亚蓝第三章免疫组织（细胞）化学

(immunohistochemistry,IHC)第一节免疫组织化学概论免疫组织化学是利用免疫学抗体与抗原结合的原理及组织化学技术对组织、细胞特定抗原或抗体进行定位和定量的技术，是免疫学与细胞化学相结合的一个分支学科。若想学好免疫组织化学，必须先了解与之相关的免疫学基础。

免疫组织化学主要原理是用荧光素、生物素或地高辛等标记的抗体（或抗原）对细胞或组织内的相应抗原（或抗体）进行定性、定位或定量检测，经过组织化学的呈色反应之后，用显微镜、荧光显微镜或电子显微镜观察。

凡是能作抗原、半抗原的物质，如蛋白质、多肽、核酸、酶、激素磷脂、多糖、受体及病原体等都可用相应的特异性抗体在组织、细胞内将其用免疫细胞化学手段检出和研究。乳腺导管癌ER细支气管肺泡癌TTF-1免疫细胞化学的突出优点是：1.高度的特异性抗原抗体反应是特异性最强的反应之一，细胞化学所用的抗体必须是特异性强的多价或单价抗体，具有高度的认别能力，在抗原识别上可达到单个氨基酸的水平，这是其它组织化学方法难以相比的。2.敏感性高免疫细胞化学采用各种有效方法最大限度保存细胞和组织内待检物的抗原性，采用多种增敏方法，使用高度敏感的和高亲和力的抗体，保证检出细胞内超微量的抗原分子，用显微镜和电子显微镜观察结果，因此它是在细胞、分子水平或基因水平的检测技术。3.方法步骤统一虽然免疫组化技术的方法很多，但基本程序相同只要掌握了原理和一种方法，其它方法大同小异。4.既可定位、定性又可定量免疫组化技术用于组织或细胞成分定性、定位及定量的研究有关的免疫学理论

一、抗原、抗体的概念及抗原抗体的关系

抗原(Antigen)凡能刺激机体产生抗体，并能与抗体发生特异性结合的物质称为抗原。物质所具有的这种特性称为抗原性。抗原可以是可溶性物质（如病毒和蛋白质）或微粒（细菌或组织细胞）。也可有外源性和内源性之分。

抗体(Antibody)是机体受抗原刺激后，在体液中出现的一种能与相应抗原发生反应的球蛋白，称免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)。含有免疫球蛋白的血清称免疫血清。人类免疫球蛋白有五类即IgG,IgM,IgA,IgE,IgD。抗体的种类：根据获得抗体的途径或来源不同分类免疫抗体，天然抗体，自身抗体，完全抗体，不完全抗体。抗原与抗体的关系抗原是引起机体产生免疫反应的主要外因，决定免疫反应的特异性，机体与抗原物质的斗争过程中为加速循环和排除抗原而产生的抗体、致敏淋巴细胞等物质，是机体排除异体物质的保护性反应。没有抗原的刺激，机体不能产生抗体；利用抗体可以检测抗原物质。二、免疫细胞化学的分类根据标记物的不同，免疫细胞化学技术可分为免疫荧光细胞化学技术；免疫酶细胞化学技术；免疫铁蛋白技术；免疫金—银细胞化学技术；亲和免疫细胞化学技术；免疫电子显微镜技术等。

不同的免疫细胞化学技术，各具有独特的试剂和方法，但其基本技术方法是相似的，都包括:抗体的制备，组织材料的处理，免疫染色、对照试验、显微镜观察等步骤。目前国内外市场各种特异性抗体日益增多，可直接应用市售产品。我国自制抗体种类较少。三、免疫染色可在细胞涂片或组织切片上进行免疫染色。一般程序是：①标记抗体与标本中抗原反应结合；②用PBS洗去未结合的成分；③直接观察结果(免疫荧光直接法)；或显色后再用显微镜观察(免疫酶直接法)。在此基础上发展出间接法，多层法，双标记法等各种方法。第二节免疫荧光细胞化学技术免疫荧光细胞化学技术(immunofluorescencecytochemistrytechnique）是将已知的抗原或抗体标记上荧光素，再与组织切片或涂片中相应的抗原或抗体起反应，从而使形成的免疫复合物上带有一定量的荧光素，在荧光显微镜下借助紫外光激发呈现出黄绿色或橘红色荧光，由此检测抗原或抗体并定位。此方法称荧光抗原（抗体）法。以荧光抗体方法较为常见。直接法:用已知特异性抗体与荧光素结合，制成特异性荧光抗体。直接用于组织抗原的检查。常用于肾穿和病原体的检查。间接法：

是直接法的重要改进。先用特异性抗体（一抗）与组织标本反应，再用间接荧光抗体（二抗）与结合在抗原的抗体结合，形成抗原－抗体－荧光抗体的复合体。是荧光亮度增强，灵敏性高，目前应用广泛。检测操作流程(直接法）

在制备或购得高质量的荧光抗体的前提下，可按直接法进行如下的操作：1.细胞爬片、涂片经丙酮固定10min后进入PBS充分洗涤；石蜡切片脱蜡入水后，0.1%胰蛋白酶消化40min左右入PBS洗涤。2.适当稀释的荧光抗体于湿盒内370C环境下孵育50min。3.PBS洗3×3min。4.0.1%伊文氏兰衬染3min。5.蒸馏水洗，水溶性封固剂封片。切片的观察及保存

染色好的标本应立即在荧光显微镜下进行观察异硫氰酸荧光黄（FITC）为黄绿色荧光；四乙基罗达明（BR200)为明亮橙色荧光；四甲基异硫氰基罗丹明（TRITC)为橙红色荧光；CY3为鲜红色荧光。随着时间的推移及观察次数的增加，荧光逐渐减弱。12小时后衰减25％，一周后衰减60％。坏死和凋亡的比较：绿色细胞为凋亡；红色细胞为坏死第三节免疫酶细胞化学技术免疫酶细胞化学技术（immunoenzymecytochemistrytechnique）是在抗原抗体特异性反应的前提下，借助酶细胞化学原理探测细胞内抗原或抗体及其存在部位的一门技术。该方法将抗原抗体的免疫反应与酶的高效催化作用原理有机地结合，通过酶催化底物进而发生一系列的化学反应，使溶液呈现出颜色反应，从而显示抗原抗体特异性反应的存在。

方法：按照酶是否预先与抗体结合在一起可分为酶标抗体法和非标记抗体酶法常用的标记酶依次为：辣根过氧化物酶（horseradishperoxidase，HRP）、碱性磷酸酶（alkalinephosphatase，ALP）、葡萄糖氧化酶（glucoseoxidase，GOD）。酶的成色反应取决于产生不同色素的底物（如DAB）及适当的反应条件。免疫酶直接法免疫酶间接法（一）直接法：用酶（如HRP）标记的特异性抗体（一抗）直接与标本中的相应抗原结合，形成抗原—抗体—HRP复合物，最后用酶底物DAB—H2O2（二胺基联苯胺）呈现棕色或深棕色产物。优点：简单、省时、特异性高、非特异性染色较轻；缺点：敏感性差。（二）间接法：先用未标记的特异性抗体（一抗）与标本中相应的抗原反应，再

用酶标记的“抗抗体”（二抗）与已形成抗原抗体复合物的第一抗体分子反应，然后再进行显色反应。优点：用途广泛，只要标记一种抗体，就可以检测多种抗原。一般免疫组化多采用此法。

上述免疫酶直接法和间接法属酶标抗体法。酶底物显色剂DABBCIP-NBTAECNewFuchsin卡巴唑（三）过氧化物酶抗过氧化物酶复合物法（peroxidase—antiperoxidase，PAP）此种方法属非标记抗体酶法（抗酶抗体法）。由于在酶标记过程中，酶与抗体之间的结合损害部分抗体和酶的活性，降低了抗体的效价。另外，血清中非特异性抗体也可被酶标记，增加非特异性背景染色。因此，在酶标记的基础上，发展了不标记抗体的免疫酶技术。

此方法先用酶（HRP）制成高效价特异性抗体，再将酶与抗酶抗体形成复合物（PAP复合物）。此复合物稳定性好，灵敏度高。可以避免酶标过程中酶和抗体的减弱。基本染色流程：抗原抗体结合后，依次滴加第二抗体和PAP复合物，最终形成抗原—特异性一抗—第二抗体—PAP复合物PAP法原理第四节亲和免疫细胞化学亲和免疫细胞化学技术（affinitycytochemistytechnique）是利用两种物质之间的高度亲和能力而互相结合的化学反应。此种具有高度亲和能力的物质是卵白素—生物素。生物素（biotin）即维生素H。卵白素（avidin）称抗生物素，具有4个与维生素H亲和力极高的结合点，他们之间的亲和力比抗原抗体的亲和力高100万倍，既能牢固结合以又不影响彼此生物活性。称抗生物素—生物素系统。其技术方法有：①抗生物素—生物素—过氧化物酶复合法(avidin-biotinperoxidasecomplextechnique,ABC法)、②标记生物素—抗生物素法(labelledavidin-biotintechnique,LAB)、③链霉抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法(streptavidin-peroxidasecomplex,SP)等。

ABC复合物是将过氧化物酶结合在生物素上，再将生物素-过氧化物酶连接物与过量的抗生物素蛋白反应而制备。将抗生物素分别连接生物素标记的第二抗体和生物素标记的酶，第一抗体为非标记抗体，生物素标记的二抗与ABC复合物相连接，最后进行显色反应定位。

ABC法

一、抗生物素—生物素—过氧化物酶复合法（ABC）原理特点：1.敏感性高:比PAP法高20-40倍,这是由于生物素与抗生物素间有较强的结合力。2.特异性强:背景染色淡。3.方法简便:节约时间,PAP法需两天,而ABC法仅需几小时。ABC-HRP法操作流程1.石蜡切片脱蜡至PBS。2.0.1％－0.05％胰蛋白酶消化30min。3.PBS洗涤。4.0.3％H2O2甲醇液或3％H2O2室温孵育20min。5.正常动物血清(5-10%)室温孵育10min。6.不洗，滴加适当稀释的一抗370C60min或40C过夜。7.生物素标记的第二抗体室温30-60min8.PBS洗涤。9.ABC复合物1:100－1:150（A和B液于临用前等量混合）370C60min或40C过夜。10.PBS洗涤。11.DAB-H2O2显色（镜检控制），水洗、复染、封片。二、标记生物素—抗生物素法（LAB）原理

用生物素标记抗体为一抗体，以酶标记抗生物素为第二抗体，经成色反应而显示抗原物质。特点:方法简便，但灵敏度低。LAB法操作流程切片在含有1:100生物素标记的第一抗体孵育1h,室温。PBS洗2次，每次5min。用1：200过氧化物酶标记的抗生物素液孵育45min，水洗。酶呈色反应。三、SP免疫组化染色原理SP法采用生物素标记的第二抗体与链霉菌抗生物素蛋白连接的过氧化物酶及基质素混合液来检测细胞和组织中的抗原。特点:1.高敏感性;2.低背景;3.简便快速;4.结果稳定SP法原理SP法操作流程1、脱蜡至水2、修复抗原3、0.3%过氧化氢室温10min4、非免疫血清室温5—30min5、特异性免疫抗体(一抗)37℃60min或4℃过夜6、Biotin—IgG（二抗）37℃30—40min7、Straptavidin—HRP37℃40—50min8、DAB显色各步间均以PBS液充分洗涤第二代聚合酶两步法(Envision)DaKOEnvision显色系统是2001年投入美国市场的，2002年引入中国，它是将二抗和酶通过一个多聚葡聚糖骨架联接成一个多聚体(Envision)，把传统的二抗、三抗分别孵育合成一次孵育，由于不再有二抗三抗通过生物素的结合，故整个系统不受内源性生物素的干扰，是一个高敏感性显色系统。此方法由于简单、快速、敏感性强且避免了内源性生物素所造成的背景染色，有逐渐取代其他免疫酶组织化学检测方法的趋势。Envision法Envision法操作流程1.石蜡切片脱蜡至PBS。2.0.3％H2O2甲醇液或3％H2O2室温孵育20min。3.抗原修复。4.滴加适当稀释的一抗370C60min或40C过夜。5.PBS洗涤。6.EnVision370C孵育30min或室温60min。7.PBS洗涤。8.DAB(0.04%)显色（镜检控制），水洗、复染、封片。何杰金氏淋巴瘤R-S细胞CD30甲状腺癌CD44v6甲状腺乳头状癌

E-cadherin乳腺浸润性导管癌PR乙型肝炎HBsAg脑胶质瘤MAP2a&b免疫组化染色应注意免疫组化染色方法已不是什么很难的问题，操作步骤简单也易掌握,但要染好免疫组化,其中方法的技巧将是每位操作者在实际工作不断摸索和探讨的事,但最基本的应从以下方面加以注意。提高免疫组化敏感性的方法概述：提高免疫组化敏感性有两种途径，一是增加IHC方法的敏感性，如二步法较三步法的敏感性较为显著提高；另一途径是通过对石蜡切片酶消化和热处理是IHC检测敏感性大为提高。抗原热修复是甲醛固定组织后会使蛋白质的三级结构发生改变，尤其是蛋白质分子苯环结构上的结构位置发生改变，从而使要检测的抗原决定簇位点改变方向，通过高温使抗原决定簇的位点恢复。另外，2/3的商品化的抗体需酶消化以暴露抗原决定簇。

抗原修复(antigenretrieval，AR)

其作用是暴露抗原，增加细胞和组织的通透性，以便抗原抗体最大限度的结合，增加特异性染色，避免非特异性染色。目前常用的修复方法有以下几种。

蛋白酶消化可以去除覆盖抗原决定簇表面的杂蛋白，更为重要的是因甲醛固定而引起的交联被打开而起暴露抗原决定簇的作用。目前常用的酶有：胰蛋白酶（主要用于细胞内抗原的修复）；胃蛋白酶（主要用于细胞间质或基底膜抗原的修复）。

热诱导的抗原修复对大多数抗原有效，尤其是对核抗原的修复作用更为明显，最常用的抗原修复液是pH6.0的枸橼酸缓冲液和pH8.0的EDTA缓冲液，它们的作用原理是通过钠离子的螯合而实现的。热诱导的抗原修复包括水浴加热法、微波加热法、高压加热法。

0.01%mol/L枸橼酸缓冲液，pH6.0（800-1500ml）于压力锅中，大火加至沸腾，将脱蜡水化后的切片置于不锈钢或耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，盖上锅盖，扣上压力阀，继续加热至喷汽，即达到工作温度和工作压力（扣阀至喷汽以6min为最佳），开始计时，1-2min后，压力锅离开热源，1min后用自来水冲淋锅体使之冷却至室温，去阀开盖，取出玻片，蒸馏水冲，后用PBS冲三次。高压加热法抗原未修复酶消化的比较合适的抗体稀释度是免疫染色的关键，现市场销售的一抗多为即用型，对抗体的滴度无需摸索，但对浓缩型一抗，则应筛出最佳的滴度。抗体的过高及过低都可影响结果的准确性。应达到最大的抗原染色强度和最低的背景着色。温育时间大部分抗体温育时间为30-60min，必要时可4℃过夜(约18h)。温育的温度常37℃，也可在室温中进行，对抗原抗体反应强的以室温为佳。37℃可增强抗原抗体反应；适用于多数抗体染色，但应注意在温箱中进行，防止切片干燥而导致失败。多层染色法对弱的抗原可用间接法(双层)、PAP和ABC法（三层）、四或五层PAP法或ABC法，或PAP的ABC联合染色法等，可以较大程度的提高敏感性，获得良好结果。组织中非抗原抗体反应出现的阳性染色称为非特异性背景染色，最常见的原因是蛋白吸附于高电荷的胶元和结缔组织成分上。最有效方法是在用第一抗体前加第二抗体动物之非免疫血清(1:5-1:20)封闭组织上带电荷基团而除去与第一抗体非特异性结合。必要时可加入2%-5%牛血清蛋白，可进一步减少非特异性染色。作用时间为10-20min。也可用除制备第一抗体以外的其它动物血清(非免疫的)。有明显溶血的血清不能用，以免产生非特异性染色。减少或消除非特异性染色的方法

非特异性着色非特异性着色

根据所用的染色方法，可选用适当的复染方法。如阳性结果呈红或棕色，则用苏木素将细胞核染成兰色，以便定位检测。也可用1%-2%甲基绿复染。复染苏木精甲基绿

其目的在于证明和肯定阳性结果的特异性，排除非特异性疑问。主要是针对第一抗体对照，常用的对照方法包括：①阳性对照；②阴性对照；③阻断试验；④替代对照；⑤空白对照；⑥自身对照；⑦吸收试验。对照免疫组化染色对照的设计

自身对照

空白对照阴性对照替代对照抑制对照吸收实验对照

阳性对照自身对照：

在同一切片上，与检测的目的物对照比较。如Actin、CD34在正常组织中的血管壁肌层应为阳性，Vimentin可选间质细胞。如果应为阳性的组织是阳性，则技术操作正确，如为阴性，则表明技术或免疫试剂质量有问题。阳性对照用已知抗原阳性的标本与待检标本同时进行免疫细胞化学染色，对照切片应呈阳性结果，称为阳性对照。证明全过程均符合要求，尤其当待检标本呈阴性结果时，阳性对照尤为重要。阴性对照1.用确证不含已知抗原的标本作对照，呈阴性结果。2.空白对照：用缓冲液替代一抗。3.替代对照：用非免疫血清替代一抗。当待检标本呈阳性结果时，阴性对照就更重要，用以排除假阳性。假阳性：

组织成分与染色试剂及抗血清之间的非特异结合称假阳性。如细胞浆内存在的内源性过氧化物酶能够与DAB-H2O2反应，导致假阳性。因此，最好做内源性过氧化物酶阻断。对免疫细胞化学结果的判断应持科学的慎重态度，要准确判断阳性和阴性，排除假阳性和假阴性结果，必须严格对照实验，对新发现的阳性结果，除有对照试验结果外，应进行多次重复实验，要求用几种方法进行验证，如用PAP法阳性，可再用ABC法验证。必须学会判断特异性染色和非特异性染色，对初学者更为重要，否则会得出不科学的结论。免疫细胞化学结果的判断

阳性细胞的染色特征免疫细胞化学的呈色深浅可反映抗原存在的数量，可作为定性、定位和定量的依据。阳性细胞染色分布有三种类型

①胞浆；②细胞核；③细胞膜表面。大部分位于胞浆；灶性或弥漫性；由于细胞内抗原量不同，染色强度也不一；阳性细胞定位于单个细胞，与阴性细胞交织分布；切片边缘、刀痕处染色强度加深，不能用于判断阳性。Rb2/P130

有两种方法：一是对检测结果阳性细胞指数来定性。判断方法是以一个视野中的阳性细胞数与总细胞的百分比，再取10个相同视野算去平均数。另一种方法是以染色阳性强度和阳性检出率相结合而定，一般阳性细胞数在0—25%为阴性，25—50%为阳性+，50—75%为阳性++，75%以上为阳性+++。第二种方法易出现人为误差。用图像分析系统进行结果检测的定量分析更为准确。

结果统计：实验设计

根据课题要求，通过查阅文献选出具有代表意义的较新的抗体，通过合适的联系方式确定抗体的出处，购买方式及到货日期。在每次染色或每一批染色前，都应列出实验计划，做好免疫组化标记记录单，拿到的任何一种抗体都应首先进行预实验，以确定正式实验中抗原的修复方式、抗体的最佳稀释度及孵育时间等，然后才能进行大批的实验。强化节能减排实现绿色发展内容览要节能减排，世界正在行动为什么要节能减排什么是节能减排节能减排，我们正在行动0502010403目录CONTENTS一、什么是节能减排

在《中华人民共和国节约能源法》中定义的节能减排，是指加强用能管理，采取技术上可行、经济上合理以及环境和社会可以承受的措施，从能源生产到消费的各个环节，降低消耗、减少损失和污染物排放、制止浪费，有效、合理地利用能源。从具体意义上说，节能，就是降低各种类型的能源品消耗；减排，就是减少各种污染物和温室气体的排放，以最大限度地避免污染我们赖以生存的环境。二、为什么要节能减排1、节能减排是缓解能源危机的有效手段

当下，能源危机迫在眉睫，国外有关机构的统计结果显示：2010年中国的能源消耗超过美国，成为全球第一。2011年2月底，中国能源研究会公布最新统计数据显示，2010年我国一次能源消费量为32.5亿吨标准煤，同比增长6%，超过美国成为全球第一能源消费大国。统计数据称，2010年中国一次能源消费量为24.32亿吨油当量，同比增长11.2%，占世界能源消费总量的20.3%。美国一次能源消费量为22.86亿吨油当量，同比增长3.7%，占世界能源消费总量的19.0%。

根据全球已探明传统能源储量测算，按照当前能源消耗增长速度，传统的石化燃料（煤、石油、天然气）已经不够人类再使用一百年。目前新能源的开发利用方兴未艾，2010年全球有23%的能源需求来自再生能源，其中13%为传统的生物能，多半用于热能（例如烧柴），5.2%是来自水力，来自新的可再生能源（小于20MW的水力，现代的生物质能，风能，太阳，地热等）则只有4.7%。在再生能源发电方面，全球来自水力的占16%，来自新的再生能源者占5%。如果我们不对现有能源和资源节约使用，按照目前情况持续下去，有可能百年之后，人类将会部分进入一个“新石器时代”。2节能减排是保护自然生态环境的强力武器

这就是我们美丽的太阳系概念图从太空中拍摄到的蔚蓝色的精灵——地球如诗如画的乡间美景，逸趣横生的劳动生活！

这几乎就是我们每个人为之向往的家园！

然而我们目前不得不面对的却是自然生态环境的日益恶化！

“温室气体大量排放，发生温室效应，造成全球变暖，这已是不争的事实！”目前，在各种温室气体中，二氧化碳对温室效应的影响约占50%，而大气中的二氧化碳有70%是燃烧石化燃料排放的。我们可以了解到冰川融化、海平面上升、干旱蔓延、农作物生产力下降、动植物行为发生变异等气候变化带来的影响。我国最近两年干旱频发，有相当部分原因是受到全球气候变化问题的影响，而这也是我们目前面临的最复杂、最严峻的挑战之一。长江江西九江段裸露出来的江滩湘江长沙橘子洲以西河床（2009年）江西赣江南昌段裸露的桥墩（2009年）温室效应导致气候变化，打破降雨平衡，旱涝频发洪水泛滥——当大自然露出锋利的爪牙，

我们才发现自己原来是如此脆弱，不堪一击！温室效应导致冰川融化

北极熊等极地生命形态遭遇严重的生存危机受世界气候变化影响，曼谷遭遇洪水

温室效应导致的冰川融化还将造成海平面升高的后果，它将直接威胁到沿海国家以及30多个海岛国家的生存和发展。美国环保专家的预测更令人担忧，再过50年～70年，巴基斯坦国土的1/5、尼罗河三角洲的1/3以及印度洋上的整个马尔代夫共和国，都将因海平面升高而被淹没；东京、曼谷、上海、威尼斯、彼得堡和阿姆斯特丹等许多沿海城市也将完全或局部被淹没。

目前，在温室气体排放方面，我们国家正保持领先优势并有继续将其扩大的趋势！！！

马尔代夫倒计时：预计将于90年内被海水淹没。原因：全球变暖导致海平面上升.

马尔代夫是一个群岛国家，80%是珊瑚礁岛，全国最高的两座岛屿距离海平面只有2.4米。因此，它也是受到全球变暖影响最严重的国家.在过去一个世纪里，该国家海平面上升了约20厘米，根据联合国政府间气候变化问题研究小组的报告，2100年全球海平面有可能升高0.18米至0.59米。届时，马尔代夫将面临灭顶之灾。太平洋上的一颗美丽的翡翠——马尔代夫澄澈的碧蓝海水上徜徉着白云——这就是人间天堂婆娑的椰树，洁白的沙滩，舒适的躺椅

图瓦卢倒计时：预计将于未来50至100年消失。原因：气候变暖导致海平面上升.

这个由9座环形珊瑚岛群组成、平均海拔1.5米的小国家每逢二三月大潮期间，就会有30%的国土被海水淹没。近20年来，这些由珊瑚礁形成的海岛已被海水侵蚀得千疮百孔，土壤加速盐碱化，粮食和蔬菜已很难正常生长。事实上，图瓦卢人从2001年就已开始陆陆续续地告别自己的国家，迁往美国、新西兰等国。澳大利亚大堡礁倒计时：20年消失原因：全球变暖和人为破坏大堡礁1981年被列入自然类世界遗产，支撑着规模巨大的旅游业。然而，自上世纪80年代以来，由于全球变暖导致海洋酸性增加以及人为破坏，珊瑚渐渐在人们的视线中消失。海洋学家查利·沃隆今年7月公布的一份报告指出，全球气候变暖将在短短20年时间内让大堡礁荡然无存。

美丽的澳大利亚大堡礁大堡礁色彩缤纷的美丽珊瑚礁和鱼群大堡礁的明星——与海葵共生的小丑鱼

南北极倒计时：50年消失原因：全球变暖导致冰帽融化温室效应造成全球气温升高已经使得两极冰帽开始融化，冰帽融化不仅直接冲击当地的生态环境，使现存的南北极生物面临灭绝，南北极也渐渐消亡。全球海平面上升，许多低洼地区的国家甚至会因此而被淹没。以上几个现实中正在慢慢被证实的例子，已经为我们敲响了最刺耳的警钟，如果我们再不及时采取强有力的措施，那么，后果将不堪设想。我们，需要尽可能为子孙后代留下一个相对较好的生存环境，这是我们每个人义不容辞的责任！【开普勒-22b】科学家用开普勒望远镜发现首颗适合居住星球美国航空航天局（NASA）12月5日宣布，该局通过开普勒太空望远镜项目证实了太阳系外第一颗类似地球的、可适合居住的行星。报道称，NASA表示，科学家们利用开普勒太空望远镜在距地球约600光年的一个恒星系统中新发现了一颗宜居行星。该行星被命名为“开普勒-22b”，半径约为地球半径的2.4倍，这是目前被证实的最接近地球形态的行星。目前，该行星的主要成分尚不清楚，绕恒星运行的周期约为290个地球日。这颗行星围绕运转的母恒星比太阳略小、略冷，但和太阳一样属于比较稳定、寿命比较长的恒星。因此，这也是首次在与太阳系类似的恒星系统中发现宜居行星。最新发现的行星“不冷不热”，温度大约为22.2℃，正好适合人类居住。此外，这颗行星上还可能有液态水，而液态水被科学家视为生命存在的关键指标。据悉，相关研究成果将发表在美国《天体物理学》杂志上。各种水体污染继续加剧，“清流”变“浊流”超标排放造成河流的污染，导致大量鱼类死去，仍存活的鱼类体内也富集了数量不一的各类有害物质酸性气体超标排放导致酸雨形成酸雨频降导致严重污染

以下是全国酸雨分布示意图我国三大酸雨区包括(我国酸雨主要是：硫酸型）1.西南酸雨区：是仅次于华中酸雨区的降水污染严重区域。2.华中酸雨区：目前它已成为全国酸雨污染范围最大，中心强度最高的酸雨污染区。3.华东沿海酸雨区：它的污染强度低于华中、西南酸雨区。我国酸雨主要分布地区是长江以南的四川盆地、贵州、湖南、湖北、江西，以及沿海的福建、广东等省。在华北，很少观测到酸雨沉降，其原因可能是北方的降水量少，空气湿度低，土壤酸度低。然而值得注意的是北方如侯马、京津、丹东、图们等地区现在也出现了酸性降水。酸雨危害是多方面的，包括对人体健康、生态系统和建筑设施都有直接和潜在的危害。酸雨还可使农作物大幅度减产，特别是小麦，在酸雨影响下，可减产13%至34%。大豆、蔬菜也容易受酸雨危害，导致蛋白质含量和产量下降。酸雨对森林和其他植物危害也较大，常使森林和其他植物叶子枯黄、病虫害加重，最终造成大面积死亡。空气中的二氧化硫先与空气中的氧气反应生成三氧化硫，再与氢离子结合生成浓硫酸，浓硫酸再与水反应生成酸雨。酸雨具有腐蚀性，人体遇到酸雨很容易得皮肤癌。被酸雨毁坏的丛林，其危害超乎想象受到酸雨腐蚀影响的乐山大佛

长明灯、长流水等现象屡见不鲜，这些琐碎的细节造成了当今社会能源、资源的大量浪费。3节能减排是改善日常能源和各种资源浪费严重的有力措施长流水现象随处可见

在此，我想向各位在此通报我们各类资源占有率：我国水资源总量占世界水资源总量的7%，居第6位。但人均占有量仅有2400m3，为世界人均水量的1/4，居世界第119位，是全球13个贫水国之一;我国森林面积为15894．1万公顷，全国森林覆盖率达到16．55％，居世界首位，但人均森林蓄积量只有世界人均蓄积量的1／8;当前，我国天然气产量仅居世界第19位，占世界总产量的1%，消费量排名在世界第20位以后；消费量是世界总量的0.9%。节能减排对大至国家、小至个人都是很有意义的一件事情！

首先，国家在节能减排政策方面不断出台各种强制性政策，不断提高对各类企业节能减排组织机构与能力建设的要求；其次，中央和地方政府大幅度增加节能减排方面的财政预算,在税收、价格等方面有各种激励机制，激发企业节能减排的热情；再次，自主节能减排可以企业降低生产经营成本，具有非常直观的经济效益；最后，节能减排是衡量一个企业是不是一个有强烈社会责任意识的优秀企业的重要标准（即你所在的企业是否受人尊重）。4节能减排与企业的发展休戚相关

总之，种种事实向我们说明了节能减排工作的必要性和迫切性！！！而节能减排目标的实现，也涉及生产、生活、建设、流通和消费等各个环节，关系各行各业、社会各界和我们自己的切身利益，所以，在公在私，我们都要充分调动各方面参与这项工作的积极性，全社会动员，全民参与，实施节水、节油、节煤、节电、节地等等，使节能减排成为每个企业、每个社区、每个单位、每个学校、每个家庭、每个社会成员的自觉行动，这是非常必要的。三节能减排世界正在行动世界各国和各相关组织机构的行动计划1、各国从政策律例上为节能减排加大支持力度，很多国家都把节能减排纳入企业管理的一个强力约束指标。2、全球相关组织发起积极行动“地球1小时”是世界自然基金会向全球发出的一项倡议，呼吁个人、社区、企业和政府在每年3月份的最后一个星期六熄灯1小时，以此来激发人们对保护地球的责任感，以及对气候变化等环境问题的思考，表明对全球共同抵御气候变暖行动的支持。参加活动的法国巴黎艾菲尔铁塔灯光对比的图景英国积极响应“地球一小时”熄灯活动，图为伦敦的大本钟灯光明灭对照四节能减排我们正在行动1

.节能减排，国家在行动

在政策方面，国家财政十大措施支持新能源与节能减排：一是大力支持风电规模化发展，建立比较完善的风电产业体系；二是实施“金太阳”工程，加快启动国内光伏发电市场；三是开展节能与新能源汽车示范推广试点，鼓励北京、上海等13个城市在公交、出租等领域推广使用；四是加快实施十大重点节能工程，鼓励合同能源管理发展；五是加快淘汰落后产能，对经济欠发达地区淘汰电力、钢铁等13个行业落后产能给予奖励；

六是支持城镇污水管网建设，推进污水处理产业化发展；七是支持生态环境保护和污染治理，加大重点流域水污染治理，促进企业加强污染治理，加强农村环境保护，探索跨流域生态环境补偿机制；八是实施“节能产品惠民工程”，扩大节能环保产品使用和消费；九是支持发展循环经济，全面推行清洁生产；十是支持节能减排能力建设，建立完善能效标识制度，节能统计、报告和审计制度，加强环境监管能力建设。

出台十二五节能减排规划，作为十二五发展重要考核指标之一，计划在“十二五”期间，全国31个省市自治区被分为5类地区，每类地区确定一个节能指标，其单位GDP能耗降低率分为10%—18%。“十二五”期间和今年我国工业节能减排四大约束性指标：单位工业增加值能耗、二氧化碳排放量和用水量分别要比“十一五”末降低18%、18%以上和30%，工业固体废物综合利用率要提高到72%左右；今年这四项指标同比要分别降低4%、4%以上和7%左右以及提高2.2个百分点。十二五期间，SO2、COD排放总量要比“十一五”末分别减少10%和5%。

我国在节能减排各项相关体系构建上日益严密，约束力和影响力日益凸显！--节约型的生产体系、消费体系建设加快；--政策保障体系“三管齐下”，形成比较完善的节能政策保障体系（法律、行政、经济）；--技术支撑体系：节能技术创新的能力不断提高，节能产品层出不穷，节能成为一些企业“创品牌”的亮点；--监督管理体系：管理节能的部门和机构不断增多、级别不断提高，队伍不断壮大，能力不断提高：（首长负责、中央和地方成立新机构、新鲜血液）

为此，我国还专门制定并推广十大重点节能工程，它包括：节约和替代石油、燃煤工业锅炉（窑炉）改造、区域热电联产、余热余压利用、电机系统节能、能量系统优化、建筑节能、绿色照明、政府机构节能以及节能监测和技术服务体系建设工程。综上所述，我们可以看到国家在节能减排方面的决心和投入是多么的坚决，这一点是非常可喜的！2节能减排，我们自己在行动从之前的实例表明，节能减排与国家、企业息息相关，同时与我们自身也是密不可分的。因为我们每个人都是节能减排这项很有意义的工作执行者，只有当我们每个人都具备强烈的节能减排意识和责任心的时候，节能减排这项工作的开展才算是有了最广泛、最强大的基础和平台，才会达到或者超出预期的效果。事实上，节能减排对我们的工作现实生活也有非常重要的作用——一方面能提高我们的工作质量和个人素养，另一方面还可以节约生活成本，畅享低碳生活！

通过对之前几个节能减排项目的介绍，我们可以看到，节能减排其实并不神秘，很多可以实施的项目就在我们身边以各种形式存在着，它可以是对原有放空蒸汽的回收利用，可以是对冷凝液四处横流浪费现象的有效解决，可以是工艺操作法方面的改进，可以是对设备自身问题的优化解决，等等。然而我们要认识到，尽管我们身边存在不少需要优化改进的问题，但是能否发现并解决这些问题则取决于我们自身的技术水平、工作思路和责任心是否到位，而这三个方面是直接2.1树立和增强节能减排意识有利于我们提高自身的工作质量、个人素养以及未来的发展

决定我们的工作质量和个人综合素养的高低的重要因素，并会最终影响到个人未来的发展。换句话说，节能减排工作开展质量的高低，可以在某种程度上直接反映个人工作能力的高下！从现在起，如果你是班长或巡检员，那么，请你保持细致敏感、善于发现问题的心态，把自己责任范围内的所有工艺问题汇总起来，与技术员和厂领导一起去讨论、解决，然后你就会发现这非常有利于你的技术水平和综合素质的全面提高，如果你又一颗强烈的进取心，那么还有什么理由不用心去做好节能减排工作呢？2.2节能减排可以节约生活成本，畅享低碳生活

我们通过以下方面可以培养良好的节能习惯：1、合理使用空调如果每台空调在国家提倡的26℃基础上调高1℃,每年可节电22度,相应减排二氧化碳21千克.如果对全国1.5亿台空调都采取这一措施,那么每年可节电约33亿度,减排二氧化碳317万吨.如果全国每年10%的空调更新为节能空调,那么可节电约3.6亿度,减排二氧化碳35万吨.2、节能装修如果全国每年2000万户左右的家庭装修能做到减少1千克装修用铝材和钢材，节约使用0.1立方米装修用的木材和1平方米建筑陶瓷,那么可节能约100万吨标准煤,减排二氧化碳220万吨.3、采用节能方式洗衣如果选用节能洗衣机每月用手洗代替一次机洗，每年少用1千克洗衣粉,那么每年可节能约50万吨标准煤,减排二氧化碳120万吨.4、减少粮食浪费

"谁知盘中餐,粒粒皆辛苦",可是现在浪费粮食的现象仍比较严重.而少浪费0.5千克粮食(以水稻为例),可节能约0.18千克标准煤,相应减排二氧化碳0.47千克.如果全国平均每人每年减少粮食浪费0.5千克,每年可节能约24.1万吨标准煤,减排二氧化碳61.2万吨.

5、节约用水可以用淘米水去洗碗或者浇花。冲洗衣服时，可以加入少量肥皂粉，因为洗衣粉遇到肥皂会减少很多泡沫，既省水又节约清洗的时间。洗脸、洗手用小脸盆接住水，然后倒进大桶收集起来。洗手、洗澡、洗衣、洗菜的水和较干净的洗碗水，都可以收集起来洗抹布、擦地板、冲马桶。刷牙时要用多少水就盛多少水，不要开着水龙头让水一直流个不停。

6.节约照明用电注意随手关灯。使用高效节能灯泡。美国的能源部门估计，单单使用高效节能灯泡代替传统电灯泡，就能避免四亿吨二氧化碳被释放。节能灯最好不要短时间内开关，节能灯在开关时是最耗电的，对于保险丝的损伤也是最大的。白天可以干完的事不留着晚上做，洗衣服、写作业在天黑之前做完。早睡早起有利于身体健康，又环保节能。

7、低碳烹调法尽量节约厨房里的能源。食用油在加热时产生致癌物，并造成油烟污染居室环境。减少烹炸的菜肴。

如果我们的节能减排工作做到位了，那么，你就会享受到低碳生活带来的种种好处：居家更温暖——建筑节能改造，提高室温5-7℃交通更便利——地铁、公共车、城际高速铁路家庭支出更少——绿色照明、节能产品惠民政策购买高效节能产品更便宜——以旧换新、惠民工程我们赖以生存的天更蓝、水更绿、空气更清新！

节能减排，让我们用明天的视野设计今天的工程！在此处添加演示文稿标题在此处添加演示文稿正文在此处添加演示文稿正文在此处添加演示文稿正文强化节能减排谢谢！实现绿色发展！单击此处添加副标题内容蛋白质-能量营养障碍了解营养不良和肥胖均是营养平衡紊乱所致综合征；熟悉营养不良和肥胖症的病因和病理生理；掌握营养不良和肥胖症的临床表现和诊断标准；掌握营养不良和肥胖症的防治原则。目的和要求

蛋白质-能量营养不良

protein-energymalnutrition,PEM蛋白质-能量营养不良是由于缺乏能量和/或蛋白质所致的一种营养缺乏症，主要见于3

岁以下婴幼儿。临床上以体重明显减轻，皮下脂肪减少和皮下水肿为特征，常伴有各器官系统的功能紊乱。急性发病者常伴有水、电解质紊乱，慢性者常有多种营养素缺乏。定义消瘦型：能量供应不足为主浮肿型：蛋白质供应不足为主浮肿-消瘦型：两者兼有临床类型长期摄入不足—喂养不当

母乳不足，未及时添加富含蛋白质的食品；人工喂养调配不当；骤然断奶，辅食添加不及时、不恰当；长期以淀粉类食物喂养；不良的饮食习惯；

病因消化吸收不良

消化系统解剖异常：如唇裂、腭裂、幽门梗阻、肠旋转不良等；

消化系统功能异常：如迁延性腹泻、过敏性肠炎、肠吸收不良综合征等；病因需要量增加

急慢性传染病恢复期；生长发育快速阶段；疾病使营养素消耗过多；先天不足、营养基础差（早产、双胎）病因新陈代谢异常各系统功能低下病理生理

蛋白质低蛋白血症水肿

摄入不足脂肪胆固醇↓、脂肪肝消瘦、皮下脂肪↓、消失消化吸收不良营养不良碳水化合物血糖偏低昏迷

水、盐代谢细胞外液↑低渗脱水低钠、低钾需要增加体温调节体温偏低系统功能低下

贫血消化系统消化液↓消化吸收功能↓维生素缺乏系消化酶↓腹泻统循环系统心脏收缩力↓血压偏低、脉细弱功能泌尿系统尿重吸收↓多尿、低比重尿低下神经系统脑细胞数↓表情淡漠、反应迟钝、记成分改变忆力减退、条件反射不易建立、精神抑郁间伴烦躁不安免疫系统胸腺、淋巴结特异性免疫功能↓容易脾脏、扁桃体、非特异性免疫功能↓感染肠、阑尾等淋巴组织萎缩

系统功能低下体重：不增（早期表现）→下降皮下脂肪厚度：是判断营养不良程度的重要指标之—减少→消失腹部→躯干→臀部→四肢→面部身高：不长→低于正常

临床表现皮肤干燥、苍白→弹性差→肌肉萎缩→

老人状、“皮包骨”精神乏力→萎靡→反应迟钝；食欲下降→腹泻与便秘交替；其它：浮肿（凹陷性），体温低，BP↓

肌张力↓临床表现营养性贫血：小细胞低色素贫血最常见多种维生素缺乏：维生素A缺乏（角膜浑浊、溃疡）微量元素缺乏：锌继发各种感染：反复呼吸道感染、反复腹泻等自发性低血糖：要警惕，多在凌晨发生并发症血清白蛋白浓度：代谢周期短的蛋白浓度下降有早期诊断价值IGF-I(胰岛素样生长因子1)下降作为诊断蛋白质营养不良指标牛磺酸、必需氨基酸↓，非必需氨基酸无变化实验室检查淀粉酶、脂肪酶、转氨酶、胰酶、嘌呤氧化酶活力均↓胆固醇、电解质、微量元素浓度下降生长激素水平升高

-经治疗后以上项目可恢复正常值实验室检查诊断依据：年龄：多见于<3岁婴儿；喂养史；体重不增，反而下降；皮下脂肪少，注意顺序规律；全身相应各系统紊乱；合并症存在。诊断体重低下(underweight)：慢性或急性营养不良体重低于同年龄、同性别参照人群的均值减2SD以下；中度：体重低于同年龄、同性别参照人群的均值减2SD～3SD；重度：体重低于同年龄、同性别参照人群的均值减3SD以下

分型与分度生长迟缓（stunting）：慢性长期营养不良身长低于同年龄、同性别的参照人群的均值减2SD以下；中度：身长低于同年龄、同性别的参照人群的均值减2SD～3SD；重度：身长低于同年龄、同性别的参照人群的均值减3SD以下分型与分度消瘦（wasting）：近期、急性营养不良体重低于同性别、同身高的参照人群的均值减2SD；中度：体重低于同性别、同身高的参照人群的均值减2SD～3SD；重度：体重低于同性别、同身高的参照人群的均值减3SD以下分型与分度

根据能量缺乏为主、还是蛋白质缺乏为主进行分型：消瘦型：以能量缺乏为主，可进一步分度浮肿型：以蛋白质缺乏为主消瘦-浮肿型临床类型处理危及生命的并发症：脱水、酸中毒、电解质紊乱、休克、低血糖等祛除病因：积极治疗原发病，如纠正畸形、控制感染、改进喂养方式。调整饮食：应由少至多，循序渐进，不可操之过急，否则会引起消化不良。治疗轻度：250～330kJ/kg.d（60～80Kcal/kg.d开始；中、重度：165～230kJ/kg.d(40～

55Kcal/kg.d开始->逐步少量增加，渐加至500～727kJ/kg.d(120～170Kcal/kgkg.d；蛋白质从1.5～2g/kg开始逐渐->3.0～4.5g/kg。丰富的维生素和微量元素食物。促进消化,改善消化功能

药物：B族维生素，胃蛋白酶，胰酶蛋白质同化类固醇制剂（苯丙酸诺龙10～25mg/次，每周1～2

次，连用2～3周）胰岛素（2～3U/次/天，1～2周一疗程）锌制剂中医治疗：其他：成分输血、静脉营养等合理喂养：母乳喂养、及时添加辅食、正确选用代乳品、纠正不良饮食习惯合理安排生活作息制度：防治传染病和先天畸形：推广应用生长发育监测图：预防1强化节能减排实现绿色发展CONTENTS01什么是节能减排02为什么要节能减排03节能减排，世界正在行动04内容览要05节能减排，我们正在行动目录一、什么是节能减排

在《中华人民共和国节约能源法》中定义的节能减排，是指加强用能管理，采取技术上可行、经济上合理以及环境和社会可以承受的措施，从能源生产到消费的各个环节，降低消耗、减少损失和污染物排放、制止浪费，有效、合理地利用能源。

从具体意义上说，节能，就是降低各种类型的能源品消耗；减排，就是减少各种污染物和温室气体的排放，以最大限度地避免污染我们赖以生存的环境。二、为什么要节能减排1、节能减排是缓解能源危机的有效手段

当下，能源危机迫在眉睫，国外有关机构的统计结果显示：2010年中国的能源消耗超过美国，成为全球第一。2011年2月底，中国能源研究会公布最新统计数据显示，2010年我国一次能源消