沉淀反应 沉淀反应（免疫学检验课件）

第十四章沉淀反应本章要点沉淀反应的概念及特点。1液相内沉淀试验的原理及种类。2凝胶内沉淀试验的原理及种类。3双向琼脂扩散试验的应用。4凝胶免疫电泳技术的种类及原理。5沉淀反应方法的技术要点、影响因素及临床应用。6CONTENTS目录010203液相内沉淀试验凝胶内沉淀试验凝胶免疫电泳技术前言沉淀反应（precipitation)可溶性抗原与相应抗体发生特异性结合，在适当条件下而出现的沉淀现象。多克隆抗体可与抗原表面多个不同的表位结合，容易与多个抗原交联成网状结构而发生沉淀，而单克隆抗体只与抗原表面的一种表位结合，不易形成交联，故不适用于免疫沉淀试验。沉淀反应分类1.液相内沉淀试验环状沉淀反应、絮状沉淀反应、免疫比浊度分析。2.凝胶内沉淀试验单向琼脂扩散试验、双向琼脂

扩散试验。3.凝胶免疫电泳技术对流电泳技术、免疫电泳技术、

火箭电泳技术、免疫固定电泳技术。液相内沉淀试验01液相内沉淀试验环状沉淀试验：抗原溶液叠加在细玻璃管内的抗体液面上，二者在两液面交界处形成白色沉淀环。1液相内沉淀试验絮状沉淀试验：可溶性抗原、抗体在液相中特异性结合，形成絮状沉淀物。2液相内沉淀试验环状沉淀试验：透射、散射和免疫胶乳比浊法，应用于自动化。3凝胶内沉淀实验02凝胶内沉淀实验指可溶性抗原、抗体在含有电解质的凝胶内自由扩散形成浓度梯度，二者在比例合适的位置形成肉眼可见的沉淀线或沉淀环。根据抗原与抗体反应的方式和特性，可分为单向琼脂扩散试验和双向琼脂扩散试验。凝胶内沉淀实验一、单向琼脂扩散试验（平板法）一、单向琼脂扩散试验（平板法）抗体与待测的抗原,在两者比例合适的部位结合形成沉淀环。环的大小与抗原的浓度成正相关。本法稳定、简便、无需仪器设备。重复性和线性均可信，但灵敏度稍差、耗时长、影响因素多。一、单向琼脂扩散试验（平板法）单向免疫扩散试验凝胶内沉淀实验二、双向琼脂扩散试验（平板法）二、双向琼脂扩散试验（平板法）将抗原抗体分别加在琼脂糖凝胶不同的对应孔中，两者在凝胶中自由扩散，在比例合适处形成白色沉淀线。沉淀线的位置、形状以及对比关系，可进行定性分析，如抗原或抗体的存在与否、相对含量估计、相对分子量分析和性质分析。本法操作简单、特异性高、结果可靠、成本低廉，但灵敏度低，耗时长，不能精确定量。二、双向琼脂扩散试验（平板法）双向琼脂扩散试验应用双向琼脂扩散试验应用A：Ag、Ab浓度及分子量近似；B：Ag、Ab浓度近似，分子量Ag＜Ab；C：Ag、Ab浓度近似，分子量Ag＞Ab；D：浓度Ag＞Ab，分子量近似；E：浓度Ag＞Ab，分子量Ag＜Ab；F：浓度Ag＜Ab，分子量Ag＞Ab1.抗原或抗体的定性分析。2.抗原、抗体的相对分子量和相对浓度的估计。双向琼脂扩散试验应用抗原完全相同3.抗原性质的分析抗原部分相同抗原完全不同双向琼脂扩散试验应用4.抗体效价的测定5.抗原或抗体纯度的鉴定凝胶免疫电泳技术03凝胶免疫电泳技术电泳分析与沉淀反应的结合产物，即可溶性抗原和抗体在直流电场的作用下，在凝胶内加速定向泳动，彼此相遇而特异性结合，在比例合适处形成可见的沉淀物。该技术提高了沉淀反应的速度和敏感度，广泛用于临床实验诊断和科学研究。凝胶免疫电泳技术一、对流免疫电泳技术凝胶免疫电泳技术无沉淀线出现表明无相应的抗原。沉淀线位于抗原抗体孔中间，说明两者比例较适合。沉淀线偏向抗原孔一方，表示抗体浓度＞抗原，反之，则是抗体浓度＜抗原浓度。一、对流免疫电泳技术凝胶免疫电泳技术一、对流免疫电泳技术凝胶免疫电泳技术二、火箭免疫电泳技术凝胶免疫电泳技术单向免疫扩散和电泳的定量检测技术。固定抗体不移动，抗原向正极泳动，随着抗原量减少，基底区越来越窄，形成的沉淀线逐渐变窄，形成一个如火箭的沉淀峰，峰的高度与抗原量呈正相关。二、火箭免疫电泳技术火箭免疫电泳图①②③④为标准抗原；⑤⑥为标本-+凝胶免疫电泳技术三、免疫电泳技术凝胶免疫电泳技术三、免疫电泳技术凝胶免疫电泳技术四、免疫固定电泳技术凝胶免疫电泳技术四、免疫固定电泳技术SPGAMκ

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