偶联美罗华单抗的Fe-3O-4磁性纳米探针构建及对恶性淋巴瘤的靶向诊疗研究

偶联美罗华单抗的磁性纳米探针构建及对恶性淋巴瘤的靶向诊疗研究磁性纳米颗粒代表了一类应用于临床磁共振成像的无创型显像试剂,临床上可用作被动靶向造影剂,而且磁性纳米氧化铁颗粒偶联特定靶向分子可用于细胞分子成像和靶向治疗。根据不同的应用需求,合理构建磁性氧化铁纳米探针,深入研究其体内外生物学效应,尤其在单细胞水平进行更深入和直接的操控已经成为目前的研究热点之一。通过不同的修饰分子改善磁性纳米颗粒的生物相容性,合理地设计并偶联相关生物分子,迅速有效地靶向目标细胞或组织,对细胞进行标记定位的同时诱导细胞凋亡,达到诊疗一体化的目的。在治疗细胞淋巴瘤时 分子是理想的靶抗原。美罗华单抗是首个被美国批准用于治疗难治性非霍奇金淋巴瘤的单克隆抗体其治疗效果在数十年的临床实验中已经得到验证。但仍然有半数的病人对美罗华治疗无应答。目前,还没有成熟的理论机制可以完全解释美罗华单抗的耐药机制。如何进一步增强美罗华抗体的治疗效果成为研发热点。本论文选用美罗华单抗作为靶向分子偶联于磁性四氧化三铁纳米颗粒表面构建磁性纳米探针研究其对阳性和阴性细胞的作用期望其为淋巴瘤的临床诊断和治疗提供一定的指导。主要工作包括以下几个方面:1通.过化学共沉淀方法,成功合成了油酸修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒（ ）配体交换得到 二—基丁二酸（ ）修饰的 四氧化三铁纳米颗粒（ ）。通过 偶联成功在磁性纳米颗粒表面偶联了一个美罗华抗体 。通过细胞表面 抗原检测纳米探针靶向 阳性细胞磁共振细胞电镜等实验验证了纳米探针对 阳性细胞的靶向效果。作用机制包括诱导 聚集至脂阀区偶联在纳米颗粒表面的单抗在颗粒间的偶极相互作用下可能增强了诱导 聚集的作用与美罗华单抗的单独作用相比纳米探针具有更强的诱导 聚集作用并且这种诱导聚集作用在磁场下进一步被放大。 聚集引起细胞内钙离子增加抑制凋亡蛋白 下调促凋亡蛋白上调线粒体膜电位（△屮）降低增加促使细胞凋亡。通过高温热解法得到核粒径为 和 的磁性四氧化三铁纳米颗粒 修饰后纳米颗粒（ ）水溶液稳定性及生物相容性良好。化的密度分别为 个和个。通过 偶联在（）纳米颗粒表面平均偶联了两个抗体在 （ >纳米颗粒表面分别平均偶联了两个、五个和八个美罗华抗体,形成多价纳米探针（）。多价探针具有明显的促 阳性 细胞的凋亡作用并且随抗体数的增加细胞凋亡呈增加的趋势。细胞内钙离子增加引起细胞内 超载胞内钙稳态失衡细胞凋亡启动。与 纳米探针通过颗粒间偶极相互作用诱导 聚集促细胞凋亡方式不同单个多价纳米探针可能可通过偶联多个 抗原诱导其聚集促使下游信号通路变化促使细胞调亡。在补体存在的情况下,多价纳米探针比美罗华单抗能够促使更多的淋巴瘤细胞凋亡。在 小鼠皮下注射 （人源）细胞构建淋巴瘤体内磁性纳米颗粒、模型。分别经尾静脉注入磁性纳米颗粒、磁性纳米探针（针对淋巴瘤细胞）、 探针（针对肿瘤新生血管aP）（剂量 ）进行 磁共振成像。结果表明纳米探针组 具有长时靶向肿瘤区域的累积效果并且纳米探针 在时仍然累积于肿瘤区域说明此探针具有良好的体内靶向效果为临床淋巴瘤分子成像提供了实验依据。4.对磁性纳米探针在荷淋巴瘤小鼠上的治疗效应进行了初步研究。在 小鼠皮下注射（人源）细胞构建淋巴瘤体内模型根据肿瘤体积随机分为四组,对