第3章消毒与灭菌备课讲稿课件

第3章消毒与灭菌灭菌(sterilization)：杀灭或去除物体上所有微生物的方法，包括芽胞。消毒(disinfection)：指杀死物体上病原微生物的方法，芽胞或非病原微生物可能仍存活。用于消毒的药品称为消毒剂(disinfectant)。防腐(antisepsis)：体外防止或抑制细菌生长繁殖的方法。细菌一般不死亡。用于防腐的药品称为防腐剂(antiseptics)。第一节常用术语和概念7/25/20232抑菌(bacteriostasis):抑制细菌和真菌的生长繁殖的方法。常用的抑菌剂（bacteriostat）是一些抗生素，能可逆性抑制细菌的繁殖，但不直接杀死细菌无菌(asepsis):指没有活菌的意思。

无菌操作(antiseptictechnique)：指防止细菌进入人体或其他物品的操作技术。清洁和净化：减少微生物数量或活性的方法。7/25/20233

第二节消毒灭菌方式

一、物理消毒灭菌法

热力灭菌法干热灭菌法湿热灭菌法光线与射线过滤除菌超声波消毒法干燥与低温抑菌法7/25/20234干热灭菌法：使微生物脱水干燥和大分子变性死亡焚烧烧灼干烤：通常加温160～180℃保持2h红外线灭菌7/25/20235湿热灭菌法在同一温度下湿热的杀菌效果比干热好，因为：温热灭菌时菌体蛋白质易变性；湿热穿透力大；湿热蒸汽有潜热存在。7/25/20236巴氏消毒法（pasteurization）61.1～62.8℃30min71.7℃15～30秒杀死液体中的病原菌或某些特定微生物。消毒牛奶、酒类等食品。7/25/20237煮沸消毒法煮沸100℃经5min可杀死一切细菌的繁殖体，一般消毒以煮沸10min为宜。芽胞需1~2小时才能杀死。用于一般外科器械、胶管和注射器、饮水和食具的消毒。7/25/20238流通蒸汽灭菌法细菌繁殖体需15-30min才能杀死，但芽胞不会被全部杀死。间歇灭菌法本法是利用反复多次的流通蒸汽灭菌，以达到灭菌的目的。只适用于不耐热（100℃以内）的营养物质如某些培养基的灭菌。7/25/20239高压蒸汽法Autoclaving压力：1.05kg/cm2温度：121.3℃时间：15～30min效果杀死一切微生物，包括芽胞耐高热、不怕潮湿的物品7/25/202310光线与射线日光和紫外线杀菌波长：240～280nm，最适：260nm杀菌机制：破坏核酸结构用于物体表面和空气消毒电离射线和微波γ射线、高能量的电子束（阴极射线）不升高温度且穿透力强适于忌热物品的灭菌或消毒7/25/202311滤过除菌（filter）常用不能加热灭菌的血清或液体不能除去病毒、支原体和Ｌ型细菌常用的除菌滤器蔡氏（Seitz）滤器玻璃滤器薄膜滤器7/25/202312超声波消毒法：杀菌不彻底，主要用于破碎细菌，提取菌体组分。腌制干燥与低温抑菌法：主要用于保存食品、保存菌种。真空干燥法7/25/202313

二、化学消毒灭菌法类别作用机制常用种类酚类蛋白变性，细胞膜损伤石炭酸醇类蛋白变性乙醇氧化剂氧化、蛋白沉淀高锰酸钾、过氧乙酸、碘酒重金属盐氧化、蛋白酶变性红汞、硫柳汞表面活性剂蛋白变性，细胞膜损伤新洁而灭染料干扰氧化、抑制繁殖龙胆紫酸碱类破坏膜、壁，蛋白凝固醋酸、生石灰烷化剂蛋白质、核酸烷基化环氧乙烷7/25/202314

消毒剂的作用机理

使细胞膜通透性受损；使菌体蛋白变性和凝固，失去生物活性，导致细菌死亡；破坏或改变蛋白质与核酸功能基团，使菌体酶蛋白失去酶的活性。7/25/202315二、化学消毒灭菌法（一）高效消毒剂（high-leveldisinfectants）

1.含氯消毒剂；2.过氧化物消毒剂；3.醛类消毒剂；4.环氧乙烷（二）中效消毒剂（intermediate-leveldisinfectants）

1.含碘消毒剂；2.醇类消毒剂（三）低效消毒剂（low-leveldisinfectants）

1.季铵盐类；2.氯已定；3.高锰酸钾7/25/202316固体二氧化氯消毒剂7/25/202317第三节消毒灭菌的运用（一）高危器械物品用时需进入无菌组织的物品。所有这些物品都应该灭菌。（二）中危器械物品用时不进入无菌组织但接触黏膜的器械。采用消毒即可。（三）低危器械物品只接触未损伤皮肤但不进入无菌组织和不接触黏膜的物品。一般用后清洗、消毒即可。（四）快速周转的医疗器械

一、医疗器械物品的消毒灭菌7/25/202318（二）室内空气消毒灭菌

1.物理消毒法

①紫外线照射（1.5W/m3，1h）最常用；②滤过除菌：空气通过孔径小于0.2μm的高效过滤装置以除去细菌和带菌尘埃。

2．化学消毒法包括化学消毒剂喷雾和熏蒸：①过氧乙酸喷雾、熏蒸；②过氧化氢喷雾；③二氧化氯溶液喷洒；④中草药点燃烟熏。（三）手和皮肤的消毒

用肥皂和流动水经常并正确洗手病原微生物污染时应用消毒剂消毒。7/25/202319（四）黏膜的消毒

（五）病人排泄物与分泌物的消毒灭菌

（六）病人污染物品的消毒

（七）饮水的消毒

（八）环境的消毒

7/25/202320酚类作用机制常用消毒剂用途蛋白质变性损伤细胞膜灭活酶类3%—5%石炭酸2%来苏0.01%—0.05%洗必泰地面、器具表面消毒;皮肤消毒术前洗手7/25/202321醇类作用机制常用消毒剂用途蛋白质变性凝固干扰细胞代谢70%—75%乙醇50%—70%异丙醇皮肤消毒体温计消毒7/25/202322重金属盐类作用机制常用消毒剂用途氧化作用蛋白质变性凝固灭活酶类0.05%—0.1%升汞2%红汞0.1%硫柳汞1%硝酸银1%—5%蛋白银非金属器皿的消毒皮肤、粘膜、小创伤消毒皮肤消毒、手术部位消毒新生儿滴眼，预防淋球菌感染7/25/202323作用机制常用消毒剂用途氧化作用蛋白质沉淀0.1%高锰酸钾3%过氧化氢0.2%过氧乙酸2%碘伏0.5ppm氯10%—20%漂白粉皮肤、尿道消毒、水果消毒创口、皮肤、粘膜消毒器材消毒皮肤消毒饮用水消毒地面、厕所、排泄物消毒氧化剂7/25/202324表面活性剂作用机制常用消毒剂用途损伤细胞膜灭活酶类蛋白质沉淀0.1%新洁尔灭0.1%杜灭芬外科手术洗手，皮肤粘膜消毒，浸泡手术器械皮肤创伤冲洗，金属器械、棉织品、塑料、橡皮类消毒7/25/202325烷化剂作用机制常用消毒剂用途菌体蛋白、核酸烷基化10%甲醛0.05%环氧乙烷2%戊二醛浸泡消毒，空气消毒手术器械、敷料消毒精密仪器、内窥镜消毒7/25/202326染料作用机制常用消毒剂用途对核酸有亲和力，影响繁殖以及干扰氧化过程2%龙胆紫浅表创伤消毒7/25/202327酸碱类作用机制常用消毒剂用途破化细胞膜、细胞壁和凝固蛋白醋酸熏蒸1:4生石灰空气消毒地面、排泄物消毒7/25/202328第四节影响消毒灭菌效果的因素消毒剂性质、浓度和作用时间75%ethanol温度和酸碱度：温度升高效率增强Anthraxspore—2%戊二醛20oC:104/ml/15min56oC:104/ml/1min细菌种类和数量结核杆菌、芽胞被消毒物的性质7/25/202329消毒剂选择原则效果好毒力低便宜7/25/202330小结概念：消毒灭菌无菌抑菌防腐物理灭菌的方法与应用湿热法的种类和应用消毒剂的作用原理和应用7/25/202331消毒与灭菌灭菌消毒防腐抑菌无菌热力灭菌法高压蒸汽灭菌法化学消毒剂的种类和作用机制7/25/202332问题什么是消毒、灭菌、无菌、抑菌、防腐？物理灭菌有哪些方法？湿热灭菌有哪些方法？分别应用何处？高压蒸汽灭菌法原理、应用？消毒剂作用原理是什么？使用消毒剂有何注意事项？7/25/202333

第五节生物安全及无菌操作基本技术7/25/202334生物安全biosafety生物安全biosafety

避免危险生物因子造成实验室人员暴露，向实验室外扩散并导致危害的综合措施。7/25/202335生物实验室实验室分区laboratoryarea按照生物因污染概率的大小，实验室可以进行合理分区。危害程度分级：根据生物因子对个体和群体的危害程度将其分为4级7/25/202336生物危害程度Ⅰ级（低个体危害，低群体危害）不会导致健康工作者和动物致病的细菌、真菌、病毒和寄生虫等生物因子。Ⅱ级（中等个体危害，有限群体危害）能引起人或动物发病，但一般情况下对健康工作者、群体、家畜或环境不会引起严重危害的病原体。实验室感染不导致严重疾病，具备有效治疗和预防措施，并且传播风险有限。Ⅱ级7/25/202337生物危害程度Ⅲ级(高个体危害，低群体危害)能引起人或动物严重疾病，或造成严重经济损失，但通常不能因偶然接触而在个体间传播，或能用抗生素抗寄生虫药治疗的病原体。Ⅳ级（高个体危害，高群体危害）能引起人或动物非常严重的疾病，一般不能治愈，容易直接、间接或因偶然接触在人与人，或动物与人，或人与动物，或动物与动物之间传播的病原体。Ⅳ级Ⅲ级7/25/202338实验室生物安全实验室及其人员生物安全管理，按国务院令(第424号)《病原微生物实验室生物安全管理条例》于2004年11月起施行。病原微生物，是指能够使人或者动物致病的微生物。实验活动，是指实验室从事与病原微生物菌（毒）种、样本有关的研究、教学、检测、诊断等活动。

7/25/202339生物安全水平分级生物安全防护水平（biosafetylevel，BSL）分为4级，以表示实验室的相应生物安全防护水平。BSL－1：防护水平最低,普通建筑物即可，每个实验室应设洗手池。BSL-2：实验室的门有可视窗。在实验室工作区域外还应当有供长期使用的存储空间。在实验室内使用专门的工作服；应戴乳胶手套。配备高压蒸汽灭菌器，在实验室内配备生物安全柜。BSL-27/25/202340BSL－1实验室防护水平最低,普通建筑物即可。7/25/202341生物安全水平分级BSL—3实验室：自成隔离区（有出入控制）或为独立建筑物。BSL—4防护水平最高。实验室应建造在独立的建筑物内或建筑物中独立的完全隔离区域内，该建筑物应远离城区。7/25/202342生物安全柜生物安全柜（Biologicalsafetycabinets，BSCs）是为操作具有感染性的实验材料时，用来保护操作者本人、实验室环境以及实验材料，使其避免暴露于上述操作过程中可能产生的感染性气溶胶和溅出物而设计的。使用生物安全柜可以减少由于气溶胶暴露所造成的实验室感染以及培养物交叉污染。同时也能保护环境。7/25/202343

一、二级实验室不得从事高致病性病原微生物实验活动。三级、四级实验室从事高致病性病原微生物实验活动。

从事高致病性病原微生物相关实验活动应当有２名以上的工作人员共同进行。在同一个实验室的同一个独立安全区域内，只能同时从事一种高致病性病原微生物的相关实验活动。应有健全安全保卫制度。

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实验室工作人员应掌握实验室技术规范、操作规程、生物安全防护知识和实际操作技能。应有符合要求的防护用品，应建立健康档案；进行预防接种。实验室应有科学、严格的管理制度，定期对实验室设施设备、材料等进行检查、维护和更新，应对废水、废气以及其他废物进行合理处置，防止环境污染。7/25/202345生物安全7/25/202346三、实验室感染的控制以及监督和法律责任

实验室感染控制工作包括定期检查实验室的生物安全防护、病原微生物菌（毒）种和样本保存与使用、安全操作、实验室排放的废水和废气以及其他废物处置等实施情况。

实验室发生高致病性病原微生物泄