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文档简介

荧光光度分析法测定维生素第1页，课件共13页，创作于2023年2月OBJECTIVE1学习和掌握荧光光度分析法测定VB2的基本原理和方法。2学习荧光分光光度计的使用方法。第2页，课件共13页，创作于2023年2月PRINCIPLE荧光：物质的分子经紫外光照射后，发射出的较原来吸收光的频率低、波长长的光。不同的荧光物质有各自的特征激发光波长和荧光波长，利用物质的荧光现象进行定性、定量分析的方法称为荧光分析法。第3页，课件共13页，创作于2023年2月对同一物质而言，若εbC＜1（＜0.05），即溶液的组成量度极稀时，荧光强度F与溶液的组成量度C有以下关系：

F=2.303ФI0εbC

Ф：荧光效率I0：入射光强度ε:荧光物质的摩尔吸光系数b：样品池的厚度

＜

I0和b当固定时，

F=K’C第4页，课件共13页，创作于2023年2月0FCC样品

F=K’C

F样品第5页，课件共13页，创作于2023年2月VB2的C（HAc）=0.1mol/L溶液在紫外光照射下，发出黄绿色荧光，可直接进行荧光测定。pH=2.9,λ激发370nm，467nmλ发射

527nmVB2，核黄素第6页，课件共13页，创作于2023年2月PROCEDURE1

维生素B2系列标准溶液的配制0.1mol/LHAc准确吸取VB2贮备液(125g/ml)

0.50ml定容50.0ml摇匀1.25g/mlVB2

操作液第7页，课件共13页，创作于2023年2月编号123456VB2

操作液(ml)0.002.004.006.008.0010.00用0.1mol/LHac稀释至(ml)25.00荧光强度F相对荧光强度F’第8页，课件共13页，创作于2023年2月2待测溶液的配制取样品溶液

5.00ml

0.1mol/LHAc定容25.0ml摇匀待测溶液第9页，课件共13页，创作于2023年2月3

标准曲线绘制1）仪器预热（激发光波长360nm，荧光波长510nm）。2）以系列标准液6号液为标准，调节荧光强度F为90左右。3）固定荧光测定条件不变。分别测定下列标准液1~6号液（由稀倒浓）的荧光强度F，并记录。4）以溶液组成量度C为横坐标，相对荧光强度F’，为纵坐标，绘制标准曲线。0F’C(g/ml)第10页，课件共13页，创作于2023年2月4样品测定1）在相同的荧光测定条件下，测定样品液的荧光强度F。2）从标准曲线上查出对应的组成量度，再乘以5，得试样中维生素B2的组成量度。C待测0F’C(g/ml)第11页，课件共13页，创作于2023年2月DATA

编号

1234567VB2

操作液(ml)0.002.004.006.008.0010.005.00样品用0.1mol/LHac稀释至(ml)25.00VB2标准溶液组成量度(g/ml)荧光强度F相对荧光强度F’实验结果：CV

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