自身抗体风湿病中的应用

自身抗体风湿病中的应用第1页，课件共60页，创作于2023年2月狼疮细胞（1948，Hargrave)第2页，课件共60页，创作于2023年2月一、概述自身抗体的定义：以自身组织成分为靶抗原而出现的相应抗体第3页，课件共60页，创作于2023年2月风湿免疫病自身抗体抗核抗体谱抗磷脂抗体类风湿关节炎抗体肌炎抗体血管炎抗体自身免疫性肝病抗体第4页，课件共60页，创作于2023年2月自身抗体在自身免疫病中的意义1、是自身免疫病的标记2、有助于弥漫性结缔组织病（CTD）的诊断和鉴别诊断3、判断疾病的活动性4、预测疾病的预后第5页，课件共60页，创作于2023年2月二、自身抗体的检测方法

1、间接免疫荧光法（IFT）2、ELISA3、免疫印迹法4、放射免疫法5、免疫双扩散第6页，课件共60页，创作于2023年2月第7页，课件共60页，创作于2023年2月抗核抗体（核仁型,Mi-2、PM-SCL、RNAPolymeraseI）第8页，课件共60页，创作于2023年2月抗核抗体（核膜型,dsDNA）第9页，课件共60页，创作于2023年2月抗核抗体（均质型,Histone-DNA）第10页，课件共60页，创作于2023年2月第11页，课件共60页，创作于2023年2月三、常见的自身免疫性疾病的抗体第12页，课件共60页，创作于2023年2月ANA谱及其临床意义定义：是一种对细胞内脱氧核糖核酸(DNA),核糖核酸(RNA),蛋白或这些物质的分子复合物的自身抗体，因此ANA应称为抗核抗体谱。第13页，课件共60页，创作于2023年2月间接免疫荧光法（IFT）: HEp-2细胞灵长类肝脏冰冻组织切片

1、完整的抗原谱(细胞核、细胞浆)

2、ANA检测的金标准，具有最高的敏感性和特异性

3、质量控制容易

4、除ANA外，还可获得一些对临床医生有用的其他信息(如ANCA)ANA的检测方法第14页，课件共60页，创作于2023年2月ANA的检测方法ELISA:用高度纯化的抗原来筛查ANAs

1、抗原谱比IIF窄

2、对所用的靶抗原具有很高的敏感性和特异性

3、操作简便、快速第15页，课件共60页，创作于2023年2月ANA分类——抗DNA抗体抗DNA抗体：ssDNA/dsDNA抗原：单链DNA，变性的DNA(嘌呤和嘧啶碱基)

双链DNA，天然DNA(脱氧核糖核酸骨架)相关疾病：ssDNAdsDNA

SLE80.8%30%

Sjögren‘s综合征40.0%硬皮病 44.0%

类风湿性关节炎12.3%健康献血员 6.8%

第16页，课件共60页，创作于2023年2月ANA分类——抗非组蛋白抗体

抗ENA抗体：此组抗体不含组蛋白，可以溶于盐水而被提取检测方法：免疫印迹法第17页，课件共60页，创作于2023年2月抗ENA抗体抗Sm抗体抗原: 与U1-、U2-、U4-、U5-或U6-nRNA

相关的6种不同的蛋白分子

(核心蛋白B、B´、D、E、F、G)

相关疾病:SLE:

5%-30%

第18页，课件共60页，创作于2023年2月抗ENA抗体抗核糖体蛋白抗体靶抗原: 由3个蛋白质分子组成的核糖体60S亚单位：

P0、P1、P2(38、16、15kD)在碳末端具有相同的免疫反应性表位

相关疾病:SLE: 5%-15%

第19页，课件共60页，创作于2023年2月抗ENA抗体抗SS-A抗体靶抗原: 与Y1、Y3、Y4或Y5型RNA相关的2种蛋白分子(52kDa和60kDa)

相关疾病:干燥综合征: 40%-95%

SLE: 34.7%第20页，课件共60页，创作于2023年2月抗ENA抗体抗SS-B抗体靶抗原: 与小分子RNA(U6-RNA、tRNA前体)结合的磷蛋白(48kDa)相关疾病: 干燥综合征：40%-95%

SLE:10%-20%

第21页，课件共60页，创作于2023年2月抗ENA抗体抗U1-nRNP抗体靶抗原: 三种与U1-nRNA相关的蛋白

(70KD、A和C蛋白)

相关疾病: MCTD: 95%-100%

SLE: 15%-40%

第22页，课件共60页，创作于2023年2月抗ENA抗体抗Scl-70抗体靶抗原:DNA拓扑异构酶I(100kDa)相关疾病:硬皮病:79.7%

(25%-75%)

第23页，课件共60页，创作于2023年2月抗ENA抗体抗J0-1抗体靶抗原: 组氨酰-tRNA合成酶(50kDa)，

细胞浆磷蛋白 相关疾病:多肌炎/皮肌炎:25%-35%

伴有肺间质纤维化的多肌炎: 70%

第24页，课件共60页，创作于2023年2月ANA分类——抗非组蛋白抗体2、抗着丝点抗体

靶抗原:着丝点中的4种蛋白分子：A-(17kDa)、B-(80kDa)、C-(140B-(80kDa)、C-(140kDa)、D-蛋白(50kDa)

主要的靶抗原是着丝点蛋白B

相关疾病:硬皮病:18%

局限型(CREST综合征): 80%-95%

第25页，课件共60页，创作于2023年2月ANA分类——抗组蛋白抗体抗原:组蛋白H1,H2A,H2B,H3,H4

(主要的靶抗原为H1和H2B)

相关疾病:药物诱导性LE:100%（标志性抗体）SLE:40%-80%

在其他风湿病中很少见第26页，课件共60页，创作于2023年2月ANA分类——抗核仁抗体靶抗原: 核仁内的RNA多聚酶、原纤维和To/Th抗原

相关疾病：SSc4%第27页，课件共60页，创作于2023年2月SLE患者特异性自身抗体靶抗原 阳性率(%)ssDNA 70-95dsDNA 30-90组蛋白 40-80U1-nRNP 15-40Sm 5-30SS-A 20-60SS-B 10-20核糖体P蛋白 5-15增殖性细胞核抗原I(PCNA)3心磷脂，2-糖蛋白120-40Ku5-10抗核小体抗体90

第28页，课件共60页，创作于2023年2月多肌炎和皮肌炎抗体谱靶抗原 阳性率(%)ssDNA 40-50Jo-1 25-35PM-Scl(重叠综合征) 8Mi-2 5Ku(与硬皮病的重叠综合征) 1-7PL-7、PL-12、OJ、EJ、KJ 2-3第29页，课件共60页，创作于2023年2月原发性干燥综合征抗体谱靶抗原 阳性率(%)SS-A 40-95SS-B 40-95ssDNA 40-95第30页，课件共60页，创作于2023年2月进行性系统性硬化症抗体谱靶抗原阳性率(%)着丝点 80-95Scl-70 25-75ssDNA 30-60原纤维蛋白 5-10RNA多聚酶 4PM-Scl(重叠综合征) 3NOR-90(核仁形成区) 少见Ku(与多肌炎的重叠综合征) 1-7第31页，课件共60页，创作于2023年2月可出现ANA的感染、药物疟疾血吸虫结核麻风沙门氏菌克雷伯菌EB病毒HIV肯定的药物肼苯哒嗪普鲁卡因酰胺异烟肼可能的药物(近80种）米诺环素SASPEtanercept,Infliximab第32页，课件共60页，创作于2023年2月可出现ANA的肝病慢性活动性肝炎原发性胆汁性肝硬化自身免疫肝炎自身免疫胆管炎可出现ANA的肺病特发性肺纤维化石棉导致的纤维化原发性肺动脉高压可出现ANA的肿瘤白血病黑色素瘤实体瘤（卵巢瘤、乳腺癌、肺癌、肾癌）淋巴瘤可出现ANA的血液病特发性血小板减少性紫癜自身免疫性溶血性贫血可出现ANA的内分泌病1型糖尿病Grave病Hashimoto甲状腺炎第33页，课件共60页，创作于2023年2月RA自身抗体谱及临床意义RF 60％RA中出现，量与RA活动性及严重性呈正相关。亦在其它CTD出现 抗CCP 在50％RA中出现（聚角蛋白微丝蛋白）特异性较高AKA（抗角蛋白抗体） 在40％RA阳性APF（抗核周因子） 在52％RA阳性抗RA33 RA阳性率为35％抗Sa 在部分RA阳性第34页，课件共60页，创作于2023年2月类风湿因子（RF)抗原：变性的IgGFc段意义RA阳性率70%，阳性预测值24%。滴度与疾病活动平行其他风湿病可阳性感染、非感染疾病、正常人可阳性第35页，课件共60页，创作于2023年2月非风湿病中的RF状态RF频率（%）年龄（>60）5-25%感染细菌性心内膜炎25-50乙型或丙型肝炎20-75结核8梅毒13寄生虫病20-90麻风5-58病毒感染15-65肺病结节病3-33肺间质纤维化10-50矽肺30-50石棉肺30各种各样疾病原发性胆汁性肝硬化45-70恶性肿瘤5-25多次免疫接种后10-15第36页，课件共60页，创作于2023年2月抗核周因子-(APF)靶抗原位于人颊粘膜细胞的核周颗粒中间接免疫荧光法检测对RA诊断的特异性高达90%以上APF阳性与病情相关，往往提示预后欠佳（尤其对RF阴性的患者）第37页，课件共60页，创作于2023年2月抗角蛋白抗体-（AKA）取6周龄雄性Wistar大鼠的中1/3食道切片为底物间接免疫荧光法以典型的角质层板层状、线状沉积的荧光为阳性对RA诊断的敏感性44.13%、特异性89%与RA的病情严重程度相关,提示预后不良第38页，课件共60页，创作于2023年2月第39页，课件共60页，创作于2023年2月抗Sa抗

体

新鲜胎盘提取免疫印迹法分子量为50和/或55KD部位出现条带者为阳性敏感性36.7%、特异性91.6%HLA-DR4相关是慢性、严重RA的早期标记RA的滑液中也有高浓度的抗Sa抗检出，提示在滑膜可能发生原位免疫反应第40页，课件共60页，创作于2023年2月抗RA33/36抗体

从Hela细胞或Ehrilich瘤细胞核中提取免疫印迹法分子量33或36KD区带出现阳性者为阳性敏感性35.8%、特异性99.6%第41页，课件共60页，创作于2023年2月抗环瓜氨酸多肽(CCP)抗体

1998年证实抗filaggrin相关抗体识别的主要抗原决定簇成分是瓜氨酸2000年合成环瓜氨酸肽（CCP），并将抗CCP抗体用于RA检测ELISA法检测对RA诊断高度敏感和特异阳性者骨破坏较阴性者严重对RA的早期诊断和预后评估都很有意义第42页，课件共60页，创作于2023年2月抗肽酰基精氨酸脱亚氨酶(PADI4)抗体RA抗PADI4抗体阳性率为47%,抗PADI4抗体对RA诊断的敏感性为43%,特异性为92%。RF阴性患者PADI4抗体阳性50%;AKA阴性的患者PADI4抗体阳性43%;抗CCP抗体阴性的患者抗PADI4抗体阳性60%。第43页，课件共60页，创作于2023年2月抗突变型瓜氨酸化波形蛋白(MCV)抗体136例RA患者抗MCV抗体敏感性和特异性分别为95.6%和80.8%。抗MCV抗体与抗CCP抗体、AKA和RF的重叠阳性率分别为91.9%、52.8%和76.5%。第44页，课件共60页，创作于2023年2月血管炎相关抗体cANCA靶抗原：PR-3(蛋白酶3〕pANCA靶抗原：MPO(髓过氧化酶)弹性蛋白酶乳铁蛋白

Wegener肉芽肿其量指示病情活动其它血管炎及炎性肠病第45页，课件共60页，创作于2023年2月抗丝氨酸蛋白酶（PR3)抗体抗原：丝氨酸蛋白酶（PR3）意义主要出现在Wegner肉芽肿和显微镜下多动脉炎在Wegner肉芽肿、显微镜下多动脉炎cANCA持续高滴度或滴度升高常与疾病复发相关(2/3)。第46页，课件共60页，创作于2023年2月针对蛋白酶3的cANCA的意义疾病频率（%）Wegener’s肉芽肿90显微镜下多动脉炎50结节性多动脉炎5-10变应性肉芽肿性血管炎10过敏性血管炎Rare光敏性紫癜RareIgA肾病Rare感染后肾小球肾炎Rare系统性红斑狼疮Rare川崎病+对照±第47页，课件共60页，创作于2023年2月抗髓过氧化物酶（MPO）抗体抗原：髓过氧化物酶（MPO）意义可出现于多种血管炎性疾病。也可见于SLE、药物等第48页，课件共60页，创作于2023年2月针对MPO的pANCA的意义疾病频率（%）显微镜下多动脉炎50-70特发性坏死性肾小球肾炎50-85变应性肉芽肿性血管炎70-85Goodpasture综合征10-30Wegener肉芽肿5-10结节性多动脉炎+多血管炎重叠+系统性红斑狼疮+肼苯哒嗪诱导的肾炎+川崎病+第49页，课件共60页，创作于2023年2月cANCA(胞浆型,丝氨酸蛋白酶)第50页，课件共60页，创作于2023年2月pANCA(核周型）1、髓过氧化物酶2、弹力酶3、组织蛋白酶G4、乳铁蛋白5、溶酶体6、细菌增透蛋白7、Azurocidin8、……第51页，课件共60页，创作于2023年2月原发性胆汁性肝硬化抗体谱靶抗原 阳性率(%)AMAM2 85-95AMAM4 40-60AMAM9 35Sp-100(核点) 30肌动蛋白 10-20第52页，课件共60页，创作于2023年2月AMAM2靶抗原:由3种不同的乙酰基转移酶组成的多酶复合物：

-丙酮酸脱氢酶(74kDa)

-2-酮酸脱氢酶(50kDa)

-2-酮戊二酸脱氢酶(50kDa)

与丙酮酸脱氢酶复合物相关的蛋白X(52kDa)

相关疾病: PBC: 85%-95% 第53页，课件共60页，创作于2023年2月自身免疫性肝炎抗体谱

靶抗原 阳性率(%)肝特异性蛋白(LSP) 50-100肝细胞膜抗原(LMA) 35-100唾液酸糖蛋白受体 80-90肌动蛋白 40-90ANA 30-40核膜 ?SLA/LP 15-30肝肾微粒体(LKM-1) 7LC-1 ?第54页，课件共60页，创作于2023年2月抗磷脂抗体(APA)APA定义：是一大类针对各种负电荷磷脂一蛋白复合