真核细胞型微生物培训课件

第一节真菌（Fungus）概述真核细胞型微生物（具有细胞壁和典型细胞核，细胞结构比较完整，不含叶绿素，无根、茎、叶的分化）广泛存在自然界，少数为单细胞（酵母）

，多数为多细胞（霉菌和蕈菌

）多数对人类有益，仅少数致病，也多为条件致病，称为病原性真菌。比细菌大几倍至几十倍，用普通光学显微镜放大100-500倍就可看清。1真核细胞型微生物7/24/2023

真菌细菌细胞真核细胞原核细胞细胞核有，还有核仁、核膜拟核，无核仁、核膜细胞器有只有核糖体细胞壁无肽聚糖，有葡聚糖和几丁质有肽聚糖对青霉素或头孢菌素敏感不敏感敏感细胞膜含固醇、麦角固醇不含固醇大小，复杂程度比细菌大几倍至几十倍，结构复杂小，简单2真核细胞型微生物7/24/2023

真菌不是植物真菌不含叶绿素，以吸收为营养方式，寄生或腐生，无根、茎、叶的分化。3真核细胞型微生物7/24/2023具有典型的细胞结构，分单细胞和多细胞两大类。1、单细胞真菌：圆形或卵圆形。酵母型真菌：由母细胞以芽生方式繁殖，如新生隐球菌；类酵母型真菌：芽生方式繁殖，有假菌丝（芽管延长不脱落），如白假丝酵母菌。生物学性状形态与结构4真核细胞型微生物7/24/2023单细胞真菌形态新生隐球菌新生隐球菌5真核细胞型微生物7/24/2023酵母菌出芽繁殖芽生孢子成熟后脱落成独立个体6真核细胞型微生物7/24/20232、多细胞真菌：菌丝与孢子交织成团----丝状菌（霉菌,mold）。各种丝状菌的菌丝和孢子形态不同，是鉴别真菌的重要标志。7真核细胞型微生物7/24/2023多细胞真菌形态sporehypha8真核细胞型微生物7/24/2023Penicillium9真核细胞型微生物7/24/2023（1）菌丝hypha有隔菌丝多数致病性真菌无隔菌丝营养菌丝气中菌丝生殖菌丝在环境适宜情况下由孢子长出芽管，逐渐延长呈丝状，称菌丝，菌丝交织成团称菌丝体。菌丝形态多样，故菌丝形态有助于菌种鉴别10真核细胞型微生物7/24/202311真核细胞型微生物7/24/2023（2）孢子（spore)：是真菌的繁殖器官。由生殖菌丝产生而成，一条菌丝可长出多个孢子。在适宜条件下，孢子可发芽伸出芽管形成菌丝。无性孢子：菌丝上的细胞分化而成，并不发生细胞融合。大多数病原性球菌属之。有性孢子：由同一菌体或不同菌体上的二个细胞融合形成。

孢子的形态多样，可作为鉴别及分类的依据。12真核细胞型微生物7/24/2023大分生孢子大小、细胞数和颜色是鉴定的重要依据小分生孢子真菌都能产生，诊断意义不大芽生孢子假菌丝

厚膜孢子关节孢子

分生孢子叶状孢子由菌丝内细胞直接形成孢子囊孢子由菌丝末端膨大成孢子囊，内含许多孢子，如毛霉，根霉分生孢子由菌丝末端的细胞分裂形成，单个、成簇或链状排列13真核细胞型微生物7/24/2023真菌孢子一条菌丝可产生多个孢子抵抗力较强，煮沸时间短不死抵抗力不强，60-70°C短时间即死是一种繁殖方式不是繁殖方式一个细菌只产生一个芽胞1、2、3、细菌芽胞14真核细胞型微生物7/24/2023犬小孢子菌之大分生孢子15真核细胞型微生物7/24/2023培养与繁殖特点：营养要求不高最适PH(4.0-6.0)

高湿度和氧最适温度：22-28℃，深部真菌为37℃。培养基：沙保弱(Sabouraud)培养基，生长缓慢，1-4周才出现典型菌落繁殖方式：单细胞---出芽多细胞---孢子菌落：单细胞--酵母型菌落、

类酵母型菌落（假菌丝），如念珠菌多细胞--丝状菌落染色：小培养和乳酚棉蓝染色观察菌丝和孢子的结构和排列16真核细胞型微生物7/24/2023酵母型菌落：单细胞真菌的菌落形式，菌落湿润，柔软而致密，形态与一般菌落相似。如隐球菌。丝状菌落：多细胞真菌的菌落形式，由许多疏松的菌丝体构成，菌落呈棉絮状，绒毛状或粉末状。类酵母型菌落：部分单细胞真菌在出芽繁殖后，芽管延长不与母细胞脱离，形成假菌丝，假菌丝由菌落向下生长，伸入培养基。如假丝酵母菌。17真核细胞型微生物7/24/2023酵母型菌落18真核细胞型微生物7/24/2023C.albicans菌落(类酵母型)19真核细胞型微生物7/24/2023曲霉属20真核细胞型微生物7/24/2023青霉菌落21真核细胞型微生物7/24/2023抵抗力对干燥、日光、紫外线及一般消毒剂抵抗力强对热敏感，60℃1小时菌丝、孢子均被杀死对2%石碳酸、0.1%升汞、2.5%碘酊或10%甲醛敏感对常用于抗细菌感染的抗生素不敏感。对灰黄霉素、解霉菌素、二性霉素B、制霉菌素、咪康唑、克霉唑、酮康唑、氟康唑和伊曲康唑敏感22真核细胞型微生物7/24/2023真菌的毒力

37℃生长粘附因子酵母相－菌丝相转换侵袭性酶类如蛋白酶、磷脂酶荚膜（隐球菌）

致病性和免疫性23真核细胞型微生物7/24/2023致病性感染：

浅部真菌感染，如皮肤癣真菌病，这些真菌有嗜角质性，在皮肤局部大量繁殖后，通过机械刺激和代谢产物的作用，引起局部炎症和病变。深部感染真菌遭吞噬细胞吞噬后，不被杀死而能在细胞内繁殖，引起组织慢性肉芽肿性炎症和组织坏死溃疡形成。

条件致病性感染：

内源性真菌感染,机体免疫力低下时发生，如白假丝酵母菌、曲霉、毛霉等引起。

24真核细胞型微生物7/24/2023超敏反应：敏感患者吸如孢子或菌丝,引起超敏反应如荨麻疹、哮喘、变应性鼻炎等。

真菌性中毒：

粮食受潮霉变，摄入真菌或其产生的毒素后可引起急、慢性中毒称为真菌中毒症（mycotoxicosis)。主要有：黄曲霉毒素和镰刀菌毒素地区性、季节性、无传染性25真核细胞型微生物7/24/2023免疫性

1.天然免疫免疫力与机体免疫状态有关皮肤粘膜屏障作用（皮脂腺分泌不饱和脂肪酸）正常菌群的拮抗作用如白色念珠菌吞噬细胞的作用：中性粒细胞和巨噬细胞在抗真菌感染中起重要作用，真菌的孢子或酵母相的真菌易被其吞噬。近年来发现tuftsin（促癣吞噬肽）可增强中性粒细胞的吞噬和杀菌作用26真核细胞型微生物7/24/2023免疫性

2.获得性免疫真菌感染的痊愈与细胞免疫有关细胞免疫，Th1细胞产生IFN-IL-2等激活巨噬细胞，Th1细胞还可诱发迟发型超敏反应，控制真菌感染的扩散特异性抗体可通过中和作用抑制真菌吸附，通过调理作用增强吞噬细胞的吞噬，但抗体与补体对真菌的溶菌作用不明显，可能与其胞壁较厚有关27真核细胞型微生物7/24/2023微生物学检查法标本浅部感染真菌毛发、皮屑、指甲深部感染真菌痰、血液、脑脊液等直接镜检：浅部标本---KOH处理后镜检，通常不染色假丝酵母菌---革兰染色（芽生孢子、假菌丝）隐球菌---墨汁负染（厚荚膜）其他多细胞真菌----特殊染色如乳酚棉兰染色，镜检

28真核细胞型微生物7/24/2023分离培养

常用于直接镜检不能确定有无及种类，常用沙氏培养基，培养方法常用试管法和小培养。菌落特征是鉴定的重要依据。组织病理学检查血清学检查浅部感染真菌不作血清学检查，深部感染真菌可检测其特异性抗原皮试

如皮肤癣菌素、孢子丝菌素假丝酵母菌抗原，类似于PPD皮试29真核细胞型微生物7/24/2023防治原则皮肤癣菌的传播主要靠孢子深部感染真菌大多是一些条件致病菌，预防的关键是提高机体抵抗力局部感染治疗：外用药有酮康唑、咪康唑和克霉唑系统感染治疗：口服有两性霉素B、伊曲康唑及咪唑类抗真菌药等

30真核细胞型微生物7/24/2023第二节常见的病原性真菌

31真核细胞型微生物7/24/2023一、皮肤癣真菌（Dermatophytes）引起皮肤浅部感染嗜角质蛋白，侵犯部位：角化的表皮，毛发，指（趾）甲病理变化：由真菌增殖及代谢产物刺激宿主引起32真核细胞型微生物7/24/2023一种皮肤癣菌可在不同部位引起病变

相同部位的病变也可由不同的皮肤癣菌引起

指（趾）甲皮肤毛发毛癣菌+++表皮癣菌属++-小孢子癣菌属-+

+

33真核细胞型微生物7/24/2023

脚癣灰指甲34真核细胞型微生物7/24/2023临床意义皮肤癣菌易侵犯人体皮肤、指甲、毛发的角蛋白组织并生长繁殖致病，是因为其能产生角质溶解酶。皮肤癣菌是接触传染，只要反复接触患者均有可能被感染。在同一病人有不同的临床表现，如毛癣菌属可引起发癣、体癣、甲癣；而相同部位的病可由不同皮肤癣菌引起，如甲癣(俗称灰指甲)可由毛癣菌属和表皮癣菌属引起。35真核细胞型微生物7/24/2023微生物检验1．标本采集采集新发生的皮肤损害边缘皮屑；指甲近尖端下面甲屑；拔取无光泽病发，黄癣采集黄癣痂。将标本盛于清洁纸袋，鳞屑要用黑纸包好。36真核细胞型微生物7/24/20232．直接显微镜检查皮屑标本用10％KOH液制成湿片，指甲用25％KOH或25％NaOH含5％甘油处理。镜检可见透明、有隔，常有分支的菌丝及成链的关节孢子，三个癣菌属难以鉴别。毛癣菌属感染病发有发外型和发内型孢子，而小孢子菌属只有发外型孢子。37真核细胞型微生物7/24/20233．分离培养与鉴定皮屑、甲屑和病发标本，先用70％乙醇或在青、链霉素混合液内处理5min，再用生理盐水洗3次，然后接种沙氏琼脂斜面，25℃培养，每周观察菌落形态及颜色，直至第四周。挑取菌落镜检菌丝和孢子，也可作棉兰染色后镜检或作小培养后镜检。必要时作其他鉴定如毛发穿孔试验、脲酶试验和特殊营养需要试验等来鉴定皮肤癣菌。38真核细胞型微生物7/24/2023毛发穿孔试验是将头发发剪成lcm长，置于已加入25ml蒸馏水和2—3滴10％酵母浸膏液的平皿内，高压灭菌。将待检皮肤真菌接种于平皿内，置25℃孵育四周，每周检查一次，每次取数根毛发置载玻片上，经乳酚棉蓝染色后，置低倍镜下观察。若毛发有裂口或陷凹者为阳性，否则为阴性。39真核细胞型微生物7/24/20234．药物敏感试验皮肤癣菌对灰黄霉素、伊曲康唑等药物敏感。40真核细胞型微生物7/24/2023防治方法：预防主要靠注意清洁卫生，避免接触，保持鞋袜干燥等；治疗采用抗真菌药，灰黄霉素，制霉菌素等目前尚无有效疫苗预防皮肤癣病。41真核细胞型微生物7/24/2023

二、白色念珠菌是假丝酵母菌属中最常见的病原菌。念珠菌病是最常见条件致病性真菌。42真核细胞型微生物7/24/2023生物学性状1、形态与结构：圆形或卵圆形，革兰氏阳性，但染色均；在组织内形成芽生孢子和假菌丝；培养后可形成厚膜孢子。2、培养特性：在普通琼脂培养基、血平板及沙保弱琼脂培养基上均生长良好；37℃培养2~3天后可出现典型的类酵母菌落。在玉米粉琼脂培养基上可形成假菌丝，并产生厚膜孢子。43真核细胞型微生物7/24/2023致病性皮肤粘膜念珠菌病：鹅口疮，口角糜烂等

内脏念珠菌病：念珠菌性肠炎、肺炎及脑膜炎泌尿生殖道念珠菌病：女性，阴道炎、尿道炎男性，龟头包皮炎等44真核细胞型微生物7/24/2023

微生物学检查：直接镜检假菌丝和厚膜孢子可帮助诊断45真核细胞型微生物7/24/20231、除去危险因素如潮湿、停止长期应用抗生素等；2、鹅口疮及皮肤黏膜念珠菌病治疗可局部涂敷制霉菌素、龙胆紫、酮康唑等；3、深部感染可用两性霉素B治疗或与口服氟胞嘧啶合用；4、目前尚未建立起有效的预防措施。防治原则46真核细胞型微生物7/24/2023三、新生隐球菌在自然界分布广泛；