组织学绪论-研究方法和技术（组织胚胎学课件）

光镜技术—石蜡切片术和HE染色光镜技术概述石蜡切片术HE染色目录CONTENT010203光镜技术概述01应用一般光学显微镜(简称光镜)观察是组织学研究的最基本方法组织学研究需要制备能使光线透过、微细结构清晰可辨的组织切片，石蜡切片术是最常用的经典技术放大倍数可达1500，分辨率约为0.2μm光镜下能被分辨的微细结构称光镜结构（LM）石蜡切片术基本步骤取材和固定脱水和包埋切片和染色封片02

HE染色最常用的染色方法是苏木精和伊红染色法，简称HE染色法原理：苏木精（Hematoxylin）--伊红（Eosin）碱性染料酸性染料将嗜碱性物质（本身酸性）染成蓝色将嗜酸性物质（本身碱性）染成红色细胞核中的染色质、细胞质中的核糖体细胞质、膜性结构（线粒体、溶酶体、滑面内质网）、细胞间质嗜碱性嗜酸性中性03脑垂体，H&E,x400特殊染色法镀银染色法醛复红染色法活体染色法小结组织学最常见的研究方法是采用光镜观察。石蜡切片术是光镜观察时标本制备最常用的经典技术。组织切片常用的染色法是苏木精—伊红染色法，称HE染色。凡组织结构具有被酸性染料着色的性质称嗜酸性，凡组织结构具有被碱性染料着色的性质称嗜碱性。组织学与胚胎学组织学与胚胎学光镜技术——显微镜的结构和使用显微镜的构造显微镜的使用方法使用的注意事项及保护目录CONTENT010203显微镜的构造01机械装置部分光学系统部分镜座、镜臂、目镜筒、载物台、标本夹、标本移动器、物镜转换器、粗调焦旋钮、微调焦旋钮、电源开关、亮度调节钮目镜、物镜（超低倍镜，低倍镜，高倍镜，油浸镜)、聚光器、光源显微镜的使用方法及维护拿取和放置对光低倍镜（10×）观察高倍镜（40×）观察显微镜复原和存放02拿取和放置一手握持镜臂，另一手托住镜座，将显微镜轻放在实验台上显微镜距实验台边缘约10cm，以免碰落损坏对光打开电源开关，上升聚光器，放大虹彩光圈转动物镜转换器，将低倍物镜正对载物台的通光孔观察目镜中视野亮度，转动亮度控制旋钮调节光源强弱，使整个视野均匀明亮又不刺眼调节目镜之间的距离，以适合自己的瞳距低倍镜(10×)观察取组织切片，将盖玻片朝上，置于载物台上，用标本夹固定利用标本移动器将组织标本推移到低倍物镜的正下方，聚光镜的正上方肉眼从镜侧注视，利用粗调焦螺旋上升载物台至最高位置从目镜观察，同时转动粗调焦螺旋使载物台慢慢下降，至物象清晰必要时，调节微调焦螺旋高倍镜(40×)观察需高倍镜观察的组织结构应先在低倍镜下找到，将物像调节清晰，并将其移至视野正中侧视目镜，转动物镜转换器使高倍物镜正对载物台通光孔一边从目镜观察，一边转动微调焦螺旋，至物象清晰可开大光圈，增加视野亮度显微镜复原和存放先转动物镜转换器使物镜头离开通光孔，再取出切片放回切片盒下降载物台，下降聚光器并关闭光圈将显微镜电光源的亮度调到最暗，再关闭电源盖上罩好显微镜防尘罩，将显微镜放在桌子的中央使用的注意事项及保护搬动显微镜慎拿轻放，显微镜部件不得拆卸或互相调换、若发现有故障，应立即报告老师进行处理。显微镜必须经常保持清洁。光学部分只能用擦镜纸轻轻拭擦，严禁用手或其它物品擦拭。更换标本片时，将物镜转离载物台，转换物镜时应转动物镜旋转器，切忌手持物镜转换。使用过程中，灯泡及其周围可产生高热，因此在灯亮或熄灭后30分钟内不要触摸，以免烫伤03小结1.光学显微镜的构造镜座、镜臂镜筒物镜转换器载物台粗调焦旋钮、微调焦旋钮目镜物镜聚光器光源{机械装置部分光学系统部分{{小结2.光学显微镜是精密的贵重仪器，是实验课的主要工具，必须正确而熟练地使用及妥善地保护3.光学显微镜观察切片的顺序：先用低倍物镜观察，然后用高倍物镜观察电镜技术目录CONTENT010203透射电镜扫描电镜电镜技术概述电镜技术概述01电镜基本原理电镜用电子束代替可见光用电磁透镜代替光学透镜用荧光屏使肉眼不可见的电子束成像电镜结构（EM）/超微结构电镜下才能分辨的微细结构透射电镜02电子束穿透样品、产生物像超薄切片（50～80nm）分辨率0.2nm，放大倍数从几千倍到几十万倍电子密度高（黑或深灰色）和电子密度低（浅灰色）淋巴细胞透射电镜图扫描电镜03不需要制备切片电子束在标本表面扫描分辨率2.5nm用于观察组织细胞表面结构，具有真实的立体感红细胞扫描电镜图小结透射电镜主要用于观察和研究细胞内部微细结构。扫描电镜用于观察细胞、组织和器官表面立体微细结构。组织化学术目录CONTENT010203一般组织化学术免疫组织化学术原位杂交术一般组织化学术01基本原理过碘酸希夫反应（PAS反应）在切片上加某种试剂，使之与组织中的待检物质发生化学反应，其最终产物为有色沉淀物或重金属沉淀，以便用显微镜观察。多糖过碘酸氧化多醛品红硫酸复合物紫红色沉淀（Schiff试剂）杯状细胞的黏原颗粒免疫组织化学术02基本原理根据抗原与抗体特异性结合的原理，检测组织中肽和蛋白质的技术。标记物有荧光素、辣根过氧化物酶、胶体金直接法间接法免疫荧光技术示成纤维细胞骨架免疫酶标技术示胰岛B细胞免疫胶体金技术示胰腺泡细胞淀粉酶原位杂交术03用带有标记物的已知碱基顺序的核酸探针，与细胞内待测的核酸按碱基配对的原则，进行特异性原位结合（即杂交），然后通过对标记物的显示和检测，而获知待测核酸的有无及相对量。基本原理主要用于检测基因的有无以及其转录水平的高低原位