免疫学检验技术-免疫增殖病及检验

教学目标知识目标掌握：免疫增殖病的概念，常见的单克隆丙种球蛋白病的临床免疫学特征、单克隆丙种球蛋白病的检测方法；熟悉：免疫增殖病的免疫损伤机制；了解：免疫增殖病的分类。能力目标学会Ig定量检测和分类鉴定方法；免疫电泳技术的原理和方法。思政素质目标责任心、耐心、质控意识、生物安全意识、诚信观念。免疫增殖病的概念和分类单克隆丙种球蛋白病的概念常见的单克隆丙种球蛋白病本周蛋白、M蛋白的概念单克隆丙种球蛋白病的检测本章要点概述一单克隆丙种球蛋白病的临床免疫学特征二单克隆丙种球蛋白病的检测方法三目录免疫增殖病（immunoproliferativedisease）是免疫系统异常增生而引起的疾病。免疫增殖病的重要临床表现包括免疫球蛋白数量和功能的异常，因此通过异常免疫球蛋白的检测，可以为该类疾病的诊断提供重要依据，检测异常免疫球蛋白已经成为临床免疫检验的重要检测内容。前言一、免疫增殖病的概念免疫器官、免疫组织或免疫细胞异常增生所致的一组疾病。

包括良性增生和恶性增生两类。

主要表现为免疫球蛋白异常（质和量）和免疫功能异常。概述一良性增生多见于多克隆增殖性疾病，由产生各种免疫球蛋白的B细胞全面增殖所致。包括慢性肝病/肝硬化、结缔组织病、慢性感染、恶性肿瘤、获得性免疫缺陷症及淋巴母细胞性淋巴结病等。恶性增生主要指单克隆增殖性疾病，是一个B细胞在某一分裂阶段发生突变，然后急剧分化、增殖，并大量表达某种单一的免疫球蛋白。二、免疫增殖性疾病的分类免疫增殖病的分类增殖细胞疾病T细胞急性淋巴细胞白血病（20％）淋巴母细胞瘤部分非霍奇金淋巴瘤Sezary综合征蕈样霉菌病B细胞慢性淋巴细胞白血病原发性巨球蛋白血症多发性骨髓瘤重链病和轻链病Burkitt淋巴瘤其他多数淋巴细胞瘤传染性单核细胞增多症免疫增殖病的分类增殖细胞疾病裸细胞急性淋巴细胞白血病（80％）部分非霍奇金淋巴瘤组织-单核细胞急性单核细胞白血病急性组织细胞增多症其他（分类不统一）毛细胞白血病其他霍奇金病免疫增殖病的分类因单克隆免疫球蛋白异常增多也可继发于某些疾病和表现为良性增多，某些淋巴系统的增殖性疾病也可分泌单克隆免疫球蛋白，故单克隆免疫球蛋白增多病又可分为三类:1.原发性恶性单克隆丙种球蛋白病

包括多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白血症、孤立性浆细胞瘤、淀粉

样变性、重链病、轻链病、恶性淋巴瘤和慢性淋巴细胞白血病等。2.继发性单克隆丙种球蛋白病

包括非淋巴网状系统肿瘤、单核细胞白血病、风湿性疾病、慢性炎症、冷球蛋白血症、原发性巨球蛋白血症性紫癜、丘疹性粘蛋白沉积症和家族性脾性贫血等。3.原发性良性单克隆丙种球蛋白病

包括一过性单克隆丙种球蛋白增多病和持续性单克隆丙种球蛋白增多病等。

三、免疫球蛋白病的概念由于B细胞或浆细胞异常增殖所引起的免疫球蛋白的异常增加，从而导致机体病理损伤的免疫增殖病。

分类单克隆免疫球蛋白病（单一克隆、恶性）多克隆免疫球蛋白病（全面、良性或继发）

突出特点：患者血清存在异常增多的单克隆免疫球蛋白

M蛋白（monoclonalprotein）：单克隆免疫球蛋白理化性质十分均一，但是多无免疫活性，可以是IgG、IgM、IgA、IgE或IgD，也可以是κ或λ轻链中的任何一型。

本周蛋白（Bence-Joneprotein）：M蛋白的轻链分子量较小，容易从尿中排出，最早由Bence-Jones测知。单克隆丙种球蛋白病的临床免疫学特征二一、多发性骨髓瘤(MM)多发性骨髓瘤（multiplemyeloma,MM）是浆细胞异常增生的恶性肿瘤，也称浆细胞瘤，因其引起骨破坏而得名。患者常伴有贫血、肾功损害和免疫功能障碍。近年发病有增高趋势，男性多发，男女比约为2:1，平均发病年龄是46.5岁。临床表现：骨痛贫血感染高黏血症表现肾功能损害

患者骨破坏所致头颅肿物及眼球突出特点：

血清中有大量单克隆M蛋白或尿中有大量本周蛋白免疫球蛋白含量明显降低骨髓发现大量浆细胞或组织活检证实有浆细胞瘤原发性的溶骨性损害或广泛骨质疏松类型发生率（%）本周蛋白尿阳性（%）临床特点IgG50～6050～70典型症状IgA20～2550～70高黏综合征较多见IgD1～290骨髓外病变多见，溶骨病变多见，44%淀粉样变IgE0.01少见

非分泌型1～5无溶骨病变较少，神经系统损害较多见

不同类型的多发性骨髓瘤特点

二、原发性巨球蛋白血症原发性巨球蛋白血症（macroglobulinemia）是以分泌IgM的浆细胞恶性增殖为病理基础的疾病，好发于老年男性。主要表现骨髓外浸润，以淋巴结、肝和脾肿大等为主要体征并伴有血黏滞过高综合征。实验室检查：

血清中患者血清IgM水平往往超过300mg/dl血清分离不出或呈胶冻状，电泳时血清有时难以泳动，集中于原点是该病的电泳特征骨髓象可见淋巴细胞、浆细胞和介乎两者之间的浆细胞样淋巴细胞明显增多有些IgM分子具有冷球蛋白的特征有约40％的病人可出现本周蛋白尿三、良性单克隆丙种球蛋白病良性单克隆丙种球蛋白病（benignmonoclonalgammopathy）是指血清中出现高水平免疫球蛋白，但并无浆细胞恶性增殖的疾病。一般无临床症状，往往因其它疾病就诊时发现血中有M蛋白，但其并不呈进行性增加，在少部分正常老年人群中也可出现上述情况。

三、恶性与良性单克隆丙种球蛋白病的鉴别诊断恶性与良性单克隆丙种球蛋白病的鉴别

四、冷球蛋白血症

冷球蛋白（cryoglobulin）：指温度低于30℃时易自发形成沉淀，加温后又可溶解的免疫球蛋白

冷球蛋白血症：当血中含有冷球蛋白时称为冷球蛋白血症特点：

多见于某些原发性疾病，例如感染、自身免疫病和某些免疫增殖病患者常有因冷球蛋白沉淀所引起的高血黏度、红细胞凝集、血栓形成等病理表现。常见症状有雷诺现象（即寒冷性肢端紫绀）、皮肤紫癜、坏死、溃疡、寒冷性荨麻疹、关节痛、肾损害、神经系统病变（如感觉麻木、运动障碍等）以及肝、脾等器官损害。五、淀粉样变性

淀粉样变性（amyloidosis）是组织器官中有淀粉样物质沉积的一种病理现象。该病比较少见，常可累及各种不同的组织和器官，但以小动脉、肾小球、肝、脾和肾上腺最为常见。

血清蛋白区带电泳免疫球蛋白定量检测免疫球蛋白的分类鉴定本周蛋白检测冷球蛋白检测单克隆丙种球蛋白病的检测方法三一、血清蛋白区带电泳血清区带电泳是测定M蛋白的一种定性实验，常采用醋酸纤维素膜和琼脂糖电泳两种方法。

M蛋白在电泳时出现于～区代中，不同类型的M蛋白的电泳后所处位置。二、免疫球蛋白定量检测免疫球蛋白定量测定较常用的方法有单向扩散法与免疫比浊法，前者较为简便，后者更为准确迅速。恶性单克隆丙种球蛋白病常呈现某一类丙种球蛋白的显著增高。在良性丙种球蛋白病的血清标本中，M蛋白的升高幅度一般不象恶性丙种球蛋白病那么高三、免疫球蛋白的分类鉴定

免疫电泳免疫选择电泳免疫固定电泳免疫电泳：

免疫电泳是将琼脂糖电泳和免疫双向扩散相结合的一项技术。血清标本先行区带电泳分成区带，继而用特定的抗血清进行免疫扩散，阳性样本的M蛋白将在适当的部位形成异常沉淀弧，根据抗血清的种类、电泳位置及沉淀弧的形状可以对M蛋白作出判定。正常及某些患者免疫电泳图谱

上孔中为血清，下孔中为尿液，槽中为抗血清，箭头所指为骨髓瘤蛋白a：抗正常人血清；b：抗IgG血清；c：抗IgA血清；d：抗IgM血清e：抗κ血清；f：抗λ血清A：IgA/λ型骨髓瘤；B：IgG/κ型骨髓瘤；C：IgG重链病免疫选择电泳：

制备含抗κ或λ血清的薄层琼脂板，打孔并加入待测标本进行火箭电泳，待形成相应的火箭样沉淀峰后，于孔的两侧各挖一槽，加入抗某类免疫球蛋白血清或另一型抗轻链血清，温育扩散后，根据沉淀弧形成的情况，进行分析鉴定。免疫选择电泳图谱示意图

琼脂中含抗κ及抗λ抗血清，示例孔中为血清标本，槽中为抗IgA重链抗血清A：正常人；B：α重链病；C：IgA骨髓瘤免疫固定电泳：

免疫固定电泳是血清区带电泳与免疫沉淀反应相结合的定性实验。与免疫电泳比较免疫固定电泳具有更高的灵敏性，M蛋白在免疫固定电泳中显示狭窄而界限明确的区带，而多克隆增殖或正常血清球蛋白区带则比较弥散。IgG/λ型多发性骨髓瘤的免疫固定电泳图谱四、本周蛋白检测3.直接定量分析尿液透析浓缩50倍后进行2.免疫固定电泳1.本周蛋白定性检查(筛查)溶解(+)90℃沉淀标本50℃~60℃五、冷球蛋白检测冷球蛋白是血清中的一种特殊蛋白质，在4℃时自发沉淀，加温至37℃时又可溶解，故常利用这种可逆性冷沉淀的特性对其进行测定。取患者外周血，分离出血清置4℃冰箱中，一般在24h～72h出现沉淀，若1周仍不出现沉淀者方可判断为阴性。如形成沉淀，再置37℃温育使其复溶，也可将冷沉淀物离心洗涤后做定性与定量分析异常免疫球蛋白检测的应用原则

凡检出无法解释的免疫球蛋白异常增高，都应建议做进一步的检查。初筛实验：区带电泳分析、免疫球蛋白定量检测或尿本-周蛋白定性。