特殊染色技术-病理性沉着物染色法（病理检验技术课件）

病理检验技术

特殊染色病理性沉着物钙盐钙在人体内大量存在,主要构成骨骼,作为支持人体的支架。它在分泌、运送、肌肉收缩、神经传导等也起重要作用。

钙在机体内以两种形式存在,一种是离子钙,存在血液循环内,即所谓血钙;另一种是结合钙,和蛋白、碳酸或磷酸结合而沉着在组织内。除骨骼和牙齿外,正常时钙渗透在所有组织和细胞中,一般不以固体状态出现在组织内。但在某些情况下,钙析出成固体并沉着于组织内,则为病理性钙盐沉着。沉着的钙盐主要是磷酸钙,其次为碳酸钙。

在HE染色中,钙盐和苏木精结合形成蓝紫色的色淀。钙盐在微量时,有时和细菌不易区别,但钙盐的颗粒粗细不一。用以证明钙盐的方法有两种,一种是

Von

kossa的硝酸银法,另一种是茜素红S法。硝酸银法(根据

Von

kossa)(-)试剂配制1.1%的硝酸银(

silver

nitrate)2.5%的硫代硫酸钠(

sodium

thiosulphate)(二)染色步骤1.组织固定于10%的缓冲中性甲醛液,常规脱水包埋。2.切片厚5um,常规脱蜡至水。3.蒸馏水洗1分钟。4.切片置入1%的硝酸银于强阳光处照射15~60分钟。5.蒸馏水洗1分钟。6.5%的硫代硫酸钠处理2分钟。7.流水冲洗5分钟。8.HE染色复染。9.常规脱水透明,中性树胶封固。(三)结果钙盐呈褐黑色至深黑色,细胞核呈蓝色,背景呈红色。病理检验技术

特殊染色病理性沉着物

尿酸盐尿酸钠多沉积在跖趾关节、膝关节及手指各关节的骨中，亦可沉积在关节的软组织、韧带和耳软骨等处,形成痛风结节(又称痛风石),在结节中大量的尿酸盐结晶体沉积。镜下见结晶体为针状,互相平行排列,周围有肉芽组织形异物性巨细胞反应。尿酸盐易溶于水而不溶于乙醇;在用甲醛固定的常规制片中,结晶体全部被溶解,只看到针状的空隙。因此,显示尿酸盐时,应采用乙醇固定,选用特殊的染方法。

六胺银法(根据

Gomori)（一）试剂配制1.5%的硝酸银(

silver

nitrate)2.3%的六次甲基四胺(

hexamethylenetetramine)3.六胺银贮备液5%的硝酸银

5ml3%的六次甲基四胺100ml将5%的硝酸银倾入3%的六次甲基四胺,即出现白色沉淀,此沉淀物在摇动中很快溶解,溶液变清。置于4℃的冰箱可保存约半年。4.5%的四硼酸钠(

sodium

tetraborat）5.六胺银工作液

六胺银贮备液10ml

蒸馏水

25ml5%的四硼酸钠

2ml将六胺银贮备液加入蒸馏水中混合,然后加入5%的四硼酸钠,待彻底混合后即可用，此液应于临用时配。6.0.1%的氯化金水溶液7.5%的硫代硫酸钠(

sodium

thiosulphate)8.0.5%的伊红液

伊红Y,水溶性(

eosin

y,

water

soluble)1g

蒸馏水

200ml

冰醋酸

1滴（二）染色步骤1.小块组织固定于无水乙醇中16小时(过夜),再经无水乙醇3次,每次约30分钟,滴甲苯2次,每次约15~20分钟,浸蜡包埋。2.切片厚5um,二甲苯脱蜡至无水乙醇。3.浸入预热的六胺银工作液(加盖)于58~60℃的恒温箱内作用30分钟,此时如有尿酸盐存在,切片即呈黑色。

4.蒸馏水稍洗。5.0.1%的氯化金处理1分钟。6流水稍洗。7.5%的硫代硫酸钠处理5分钟。8.流水冲洗5分钟。9.0.5%的伊红液浅染30秒。10.稍水洗。11.常规脱水透明,中性树胶封固。（三）结果尿酸盐结晶呈黑色,背景呈淡红色。（四）应用若指(趾)关节等肿大时疑为尿酸盐沉积所致的痛风结节,可用此染色协助确诊。病理检验技术

特殊染色病理性沉着物

纤维素纤维素(abrin)又称纤维蛋白,它是由存在于血液内的纤维蛋白原分子聚合形成的特殊蛋白质.正常的凝血过程分三步：第一步是一系列凝血酶原激活物的形成；第二步为凝血酶原激活物催化凝血酶原转变为凝血酶；第三步为凝血酶催化纤维蛋白原转变为纤维蛋白,从而使血液凝固形成冻胶状的血凝块。

组织内出现的纤维素,可以是血管壁破裂,血液成分直接溢出；也可以是由于血管壁损伤较重,血管壁通透性增高,使血浆内的纤维蛋白原分子通过,这多见于局部的炎症反应或过敏性反应的表现。纤维素嗜酸性,HE染色为红染的细丝,并互相连接成网状,也可相互融合。新鲜的纤维素有嗜苏丹反应,用类脂染色法染色呈弱阳性,陈旧的纤维素呈胶原染色反应。纤维素样变(fibrinoiddegeneration)是结缔组织中胶原纤维或小血管壁发生的一种变性,它具有纤维素的染色反应,所以称为纤维素样变。这种物质称为纤维素样物质。纤维素样变其形态在HE染色为边界不清的颗粒状或小条、小块状的无结构物质,折光性强,强嗜酸性,故被染为深红色,颇像纤维素,用纤维素染色有时也呈阳性反应。显示纤维素和纤维素样变的方法有Mallory磷钨酸苏木精法和改良的Gram-Weigert法,此两法把纤维素染成蓝紫色至蓝黑色。

Lendrum等介绍的马休黄猩红蓝法(MSB)把纤维素染成红色,颜色较鲜艳。磷钨酸苏木精法(根据

Mallory)（一）试剂配制1.0.5%的高锰酸钾(

potassium

permanganate)2.0.5%的硫酸(

sulphuric

acid)3.酸化高锰酸钾液0.5%的高锰酸钾1份0.5%的硫酸1份临用前混合后用,不能保存。4.2%的草酸(

oxalic

acid)磷钨酸苏木精法(根据

Mallory)5.磷钨酸苏木精液

苏木精0.1g

蒸馏水100ml

磷钨酸(

phosphotungstic

acid）2g取洁净三角烧瓶一只盛蒸馏水30ml,倾入苏木精,稍加温使苏木精完全溶解。另取三角烧瓶盛蒸馏水70ml,加入磷钨酸后轻轻摇动使其完全溶解。待苏木精液冷却后与磷钨酸液混合,加塞后置于光亮处,隔数天轻轻摇动一次,待3~6个月成熟后才使用。（二）染色步骤1.组织固定于10%甲醛液中,常规脱水包埋。2.切片厚4μm,常规脱蜡至水。3.高锰酸钾液氧化5分钟。4.稍水洗。5.2%的草酸漂白1~2分钟。6.流水冲洗2分钟,蒸馏水洗一次。7.磷钨酸苏木精液浸染(加盖)24~48小时。8.取出切片直接用95%的乙醇迅速洗