仪器讲稿第二章液相

第三章高效液相色谱分析（HPLC）§3.1高效液相色谱的特点一、定义：液相色谱法是指流动相为液体的色谱技术。高效液相色谱是20世纪70年代急剧发展起来的一项高效、快速的分离技术。（液相色谱+气相色谱理论+高压泵、高效固定相+高灵敏检测器）。二、特点1.高压:可达150～350×105Pa2.高速:例，分离20种氨基酸，经典色谱法要20多小时，用HPLC只需1小时.3.高效：3万塔板/米（GC2000塔板/米）4.高灵敏度：紫外检测器10-9g；荧光检测器10-11g三、应用范围

气相色谱仅能分析在操作温度下能气化而不分解的物质。对高沸点化合物、非挥发性物质、热不稳定化合物、离子型化合物及高聚物的分离、分析较为困难。致使其应用受到一定程度的限制，据统计只有大约20%的有机物能用气相色谱分析；而液相色谱则不受样品挥发度和热稳定性的限制，它非常适合分子量较大、难气化、不易挥发或对热敏感的物质、离子型化合物及高聚物的分离分析，大约占有机物的70-80%。。因此，高效液相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，不受试样挥发性的限制。§3.2影响色谱峰扩展及色谱分离的因素

与GC比较65/1；基本概念及理论基础与GC一致；主要区别：流动相不同.液相色谱中对色谱峰扩展及色谱分离影响的因素：一、柱内展宽1.涡流扩散项：He=2λdp

λ:填充不均匀因子；dp填充粒度直径高效液相色谱法的固定相是高效填料，其颗粒直径比气相色谱法更小；且装柱多采用匀浆法装柱，填充很均匀，λ变得很小，所以He值比较小。2熟.纵洋向欧扩粥散喉项6季5姓/答-赴1：Hd=颗CdDm/滩u；当棕试堵样添分比子贫在墨色伪谱俩柱闷内何被鲁流垒动浴相奶带伐向壤前底时缺，事由波于纤分艘子忠本兽身巷运祖动振所错引钩起躺的戚纵租向男扩交散摔同誓样准引扮致梁色胆谱市峰烤的娘扩粉展浴。统由付于岁分咸子心在惹液他体映中破的嫂扩御散拘系工数D涌m比笛在秒气蔽体膏中般小4内-绞5个报数成量制级殊，在L追C中边可宫忽弱略,间G斤C中桃重润要德。3、传小质聋阻柳力热项组逮分遇分生子里在投固抬定臣相归与皇流映动槐相窝之骑间君传则质谈缓白慢棋引牺起解局馆部扯不弦平鸽衡参，艰从牙而煌引塘起捎峰看扩汪展托。（1）市固居定贷相盗传惹质伙阻澡力鞭项距（溪主统要衬发躁生东在主液序－困液付分冶配楼色融谱辞中唉）当近流桥动邀相良中赤的傅试罩样绩分幻玉子库扩泡散阅进戏入蛾到扔涂指渍哑在暗载穷体贺表斗面罪的想固共定搂液说内逢进驼行测质第量售交司换夜时敏，隐由摧于瓣渗极入壁固臂定窗液驼膜同的贞深茄度怒不轨同用，幼其蠢返迷回怀到多流净动盗相贪中售的肆时疯间谁也江不荐同劳，欧因勇而尿引吧起哪峰扣扩迁展革。采怪取巴措件施住：1）铲液-液准分己配越色志谱孕：亲薄构的队固嫁定没相描层他；蒙吸唉附柜、尚排竟阻回、抗离教子撤交企换子色述谱棵：友小盈的且颗响粒喷填卷料版。2）畜采竞用爬扩配散华系热数律大悔的英液忆相御固阿定须相惯。3）肠减蓄小档流努动僚相养的牢流株速赔，额改拿善化传溜质拢。（2）奖流岂动提相彩传蹦质列阻拳力呼项(二单种薄形绕式:在谈流丧动匪的垫流柔动题相托中捉的颂传驾质润和兄滞筋留坡的词流培动胳相坏中痕的陶传跌质)i勒.流剩动婚的裙流收动往相炕中轮的岛传趋质铺阻葵力朵项Hm当指流泉动劫相和流柔经炒色捕谱速柱谣内件的石填境充品物筑时登，攻靠昨近酿填够充摸物考颗摄粒暗表团面泉的捏流蚊速筑较无慢偶，哲而永流叛路掠通俊道重中屠心染的锻流抢速骗则双较讯快淡，移滴动衫速处度竿不激一伪样从属而顺引催起鲜峰肯形右变务宽执。i俩i企.滞扒留侄的确流康动夏相轰中魔的侧传勿质孙阻姥力驾项Hs析m由柜于赢固乞定恰相辫的快多淡孔哈性棕能殖使懒流窗动半相蚕滞章留括在窑其莫微符孔锦内损，拾微珠孔猾内观的斩流揉动垫相花称本为崖滞乖留隆区仆流温动榆相意（啦静铸止仅状班态俭，好不先流尚动删）躲。醒当脚流驱动舌相租中魔的催试卡样腰分陕子问与述固剖定饼相阿进估行第质甲量笔交叫换幻玉时猛，睡必祝须月先搅从娱流押动北相围扩怕散映进魄入柱到喂滞敏留榨区暮。包如季果输固膝定嫩相挠中移微委孔血既炼小身又助深哈，平则竟滞宅留蛮就县越塌严绩重让，愤传拉质盐就露越兼慢广，啄对注峰汗扩崇展校影或响蛛也辩越邮大抄。由统于钱柱范内纺色京谱趋峰倚扩娱展趁所叼引据起踩的腐塔角板键高众度拖的忧变胁化问可甜归车纳宗为孩：H葱=宣A收+注B铜/详u瘦+岁C赴u由互于B划/端u这虏一现项帝可登以钳忽嘱略共不半计啦，潮影撕响兄柱宗效堪的堤主灭要功因夫素滩是虑传旷质名阻撇力免项，络高追效次液炕相岗色衔谱复的六方戚程米可缝写茎成楚：H刑=吨A患+耕C东u提博高备柱具效搜的扒方肝法：趣（1）璃减瞒小彻固首定吧相崇的籍颗琴直哑径羞，社可这明那显野提备高勒柱趴效连；介（2）凤降诵低轧流搞动饺相恼粘走度并或竿提佛高停柱汇温寄，风可烧增别大D发m；夸（3）筋在胡一侦定贞范稻围跳内申减枪小诸流粪速萍，漠有则利号于汁于络减股小H；嘱（4）熟提宣高掉装叶柱铺技肾术铸，矮提狱高是柱嫂内灾填苦充泪料街的茂均亭匀赶性漂而捏减山小A项棋。1智.固霉定份相释与回装鲁柱幕方变法肢的卵选史择止：选澡粒色径烤小滔的俘、许分航布帆均蜜匀屑的恋球闻形截固鱼定间相（d殊p鸟≤润1辫0摧μ丙m没,绑5岗μ自m目彼前汁应请用膨最右广垄泛哗）首顿选计化恳学轨键魄合唐相黄，蔬匀仆浆字法旗装认柱2草.流啄动德相痕及丧其斧流店速赴的全选赠择映：选湖粘或度唇小甜、料低果流让速咸的黄流然动丈相—脾—甲诵醇认，约1话m丛l乏/际m汁i甩n3届.柱秆温仰的变选只择遍：选愉室沾温2忆5℃左雪右H扩P暖L如C法才中蹈分些离咏条车件笛的喂选崖择H固P椅L职C与G雨C的H炕-衡u曲羽线多见飞图3炼-撞1：（1）扭两惯者成曲硬线骡形少状恨相剖似损，封都蛇有标一充个H最猫小欢值床；（2）H借P间L璃C的H最赛小爽值疮比G测C的恩最锁小筋值勿小鸽一想个鼓数侵量扎级宏以尽上竖，哪柱层效谊更扎高娘；（3）H辰P乓L喝C的妖最立佳旅流尘速u比G啊C的职最您佳驰流王速u也充小樱一僚个所数币量采级醉以雕上恒。二苏、至柱徐外恼展政宽鬼：帅指们色盯谱闯柱志外鹅各些种殖因驳素理引番起扒的梦峰椅扩烦展.a警.柱课前辨展准宽日：细主仔要术由身进辨样险所孝引抱起副；进棒样还方侨式材：岸将叨试趣样迷注此入利色允谱肥柱弱的忽顶社端培滤粥塞宅上厦或呆注拼入托进营样肿器厚的下液悄流睡中廉。由价于终进刮样嫂器创的题死抚体岭积枪以清及答进瓦样橡时授的诞液我流旁扰票动厉引川起今色笛谱绿峰嫁不画对漠称裁和穿展析宽兽。解肠决酱：斥试泳样哲注怎入陶柱耕顶垮端肾中垒心硬点荐或慢填旬料吹中量心1~巨2流m坟m处甲。b枯.柱昆后行展直宽迎：畅主邮要亦由踏接棉管托、谣检巧测望器瓦流昂通绍池倘体草积添所翼引舌起.解撒决辰：圈连识接箩管敲的态体大积表、赞检首测狡器理的饼死福体果积踪蝶应祖尽恒可等能激小.§瓶3露.准3高探效西液壁相描色充谱宵的逝主贤要迹类模型合及景其提分猜离扶原穗理类辱型：思液-液疫色眯谱亿；升液-固弓色舍谱挨；宿离跑子盼交言换乏色闸谱煮；的离辽子却对岔色勺谱顽；著离苹子框色腰谱茎；足空杜间射排渔阻蓬色酬谱一.液-液渠分背配喊色净谱值法酬及握化悔合疑键态合怖相香色翁谱1哄.特驴点：a肉.流热动衬相场和愤固宏定矛相奋都重是复液地体b窗.两守相侧应胀互婶不么相陵溶僻，鞭有烤明舌显别的技分券界室面2脱.分晃离趴机毫制鹿：慨试昨样朵组团分俱溶守于扒流呼动渠相趟后,在剩固害定凝相厨和养流肠动茂相漠之勉间慰的刻相汽对溶负解记度货存垃在蹄差追异，俱溶党质盟在日两盗相顷间杏进悼行尤分偷配植。K吼=敲cs/腥cm=掌k炕Vm/莫Vs分旷离粗的头顺拉序决罪定号于才分朗配将系妻数茄的栏大西小请，望分俭配仔系辟数诱大弊的月组伍分录保宣留衔值列大.而与且混流县动级相舅的惠种粪类网对讽分轮配圾系景数羽有蔑较壤大抢的镜影芹响.3舰.解红决女固甜定斜液哗流趋失旗问扣题弟方怕法慕：1拨)采须用产正查或挺反钻相嘴色嚼谱a扇.正滥相浴液-液衔色像谱哄法：斯流嫩动暂相融的敲极占性小逝于固荷定红液俊的滚极趴性卵（骨流多疏父固城亲稀；锣适俭用房诚于翅分州离辟极身性恋物漠质勾）b德.反辫相砌液-液抗色卖谱庙法：健流错动庙相虏的年极踢性大爱于固姻定文液卧的朗极渐性姻（瞧流双亲县固殖疏烈；全适教用攻于页分萍离息非兆极牙性锻物疾质病）2岔)采亭用丙化诱学呈键舱合秤固倍定戒相化牵学耽键布合闹固准定罩相：炕将塑固满定利相久上翻的世各节种照不砖同寻有喂机望基械团虏通赢过盖化文学秒反畏应割共繁价猛键革合蒸到良硅俭胶柔（竿担浓体荐）炼表副面饼的鸭游疯离坟羟弊基栋上校，万形范成颈化详学凝键客合屯固须定术相.目旷前明反汤相摆键澡合卡相枯色皇谱元法狼，翠已处成寻为托高热效嫁液哗相下色快谱搞中筋应镜用惯最锁广塞泛传的蜂一查个桃分帐支华。二.液-固煤色赢谱显法职（倦或诱液-固记吸绸附赞色风谱国法敞）1挂.特斜点：傍流割动备相错为略液崇体捉，访固全定舰相饼为窜吸始附珠剂搅。2臂.分瓜离蔬机搁制蛇：佩根注据鞋物驶质泼吸破附馒作汗用胁的弯不孝同危来拉进液行跃分员离时。迁吸敌附支作侮用照大社即森分曲配例系粪数鸦大唇的仔组抄分弱，挥吸隙附逗剂毙对货它音的蚊吸届附柔力件强向，谜保搂留烫值能就胡大,出棕峰捡晚伍，践后奋出受来.3叼.作喂用：a乎.适驶用膊分践离府相躬对塞分册子漏质适量欣中呀等隙油尿性趣试凳样泻。b凯.对屿具串有诉不糟同即官牢能研团悬的担化情合息物依和挤异怜构惧体溉有笑较监高移的挡选岂择斩性泄。缺蛛点：底由径于腰非志线永性霉等跟温锈吸品附裕常吩引睛起今峰孔的甘拖肉尾趁现汪象.三肝、宰离俘子爹对趴色采谱弟法1朗.特策点：章离壮子械对痛色辰谱犯法拥对徒各吨种槐强厦极券性栽的誉有插机尤酸针或糕有判机友碱滑的距分怨离则，的分早离尾效箭能恐高扫，崖分症析取速绸度乌快蜜，饼操仪作炮简躲便.2辛.分除离趣机证制：牢将插一颤种吼或滋多桃种乳与土溶城质栏电鸽荷调相迟反惜的钳离港子退（冠称迷为女对改离婚子喘或咳反轻离宝子经）史加因到晨流圣动渴相累或柱固止定姑相犬中屯，而使火其为与瓜溶哀质洽离馋子应结镰合掠形无成筋疏被水膀型手离蛋子令对浇化潜合急物椒，弦从年而张控鼓制康溶欧质躲离墨子窜的第保妄留销行疮为泽。X+水牌相+脸Y－水衰相↔X+Y－有惭机相试夹样晒离需子X＋进模入亩柱撑内美以婶后扎，其与职对聚离缩慧子Y－生势成餐疏平水牛性颂离判子逐对X＋Y－，冬后桥者族在临疏心水立性恩固舰定惑相牙表左面距分话配舅或虫吸姨附并。3栏.离仔子衡对宣色扒谱提法足分拨类正旧相姿离冈子骨对帽色般谱狱法(极器性林固营定皂相卵，固非邻常洒性子流小动楚相命）反恩相交离泻子骡对重色狡谱尝法疑（员非胞极救性霉固弟定阔相核，辅极葛性租流烂动穗相v如盼含子有费对航离急子Y－困的奔甲匀醇说－偏水诱（漫或命乙番腈婆－搭水疲）四溶忆液穿）胳。可下见滩保膛留梨值要随KX省Y和[宝Y-]水娃相的廉增井大孩而色增帝大单。4除.应弦用：霉解兆决泊了杠以牵往科难味分馆离伶混适合抚物确的块分锁离证问俗题.如深酸称、仔碱镜和邀离删子压、眼非屯离躬子耕的消混乏合追物斯，胁特市别羞是天一恩些宜生贼化泻试宽样今如加核峡酸遥、寨核蛙苷男、谱儿创茶诱酚眼胺惹、鼻生迁物遍碱羽及倍药乘物徐的咸分霜离斥了扑。还垂可铃借蚕助支离脆子崖对督的昨生这成妖给鸭试伤样估引敢入衡紫焦外芒吸默收覆或邮发油荧期光晌的易基杨团妹，稻提船高腔检泊测晌的踏灵哥敏赖度纱。四.离异子汁交垮换安色敏谱丧法1功.分躺离乎机浊制7初0甘/站2；池离锻子碍交强换抽树再脂次上承可孟电卧离具的盟离锡子卖与葛流译动楚相漫中钓具咏有票相衔同骆电押荷寇的伤溶伤质陈离疏子盛进蓝行游可哪逆颜交殿换贿，喂依夹据春这命些岭离唯子葛对饱交慢换寻剂婚具班有窗不龄同买的荷亲森和姨力层而砍将购它退们甩分任离潮。3怒.耐a雄.分只配狭系哀数D愈芬大仓，柱表胸示歉溶坑质搅的驰离墙子舱与士离级子耀交运换们剂舅的功相锯互件作色用甜愈津强持。b基.亲吹合哥力损高恒的餐，症在决柱维中蹈保揭留搂值诊就城愈炕大.4涉.应掩用：a欣.凡介在认溶案剂办中事能愚够母解棕离葵的寇物宵质推。b保.已追成盐功果地锈分枝离皇氨贴基狐酸伴、听核膊酸撇、葬蛋撒白番质荡等.五丽、桶离鸣子逮色踢谱便法1多.构贡成退：固苦定懂相:离煎子挎交出换讯树幻玉脂流放动碰相:电讲解桨质稠溶惰液检有测鸭器:电箩导瓣检闷测隙器主秆配践件边：庆抑通制丧柱井（劲抑墙制荡流宣动焰相回中铃强阶电权解诞质制背那景萝离凯子景的啊干哄扰昨）奇。2喊.流叉程饱图产：f栏i舞g涝3余-稼2双震柱凑型殿原或理垦：泰离码子笛交境换桑原钢理(以嗓分辱离训阴嚼离险子逗为宁例辅）候。1悲)分能离誉柱辨：录离嚼子如交车换(阴江离治子劳交责换纱剂嚷）R咱—炉O怀H－＋+钳N菠a+B窃r-(待美测)→R宇—股B迫r-+值N昌a+O铜H-（宪交组换鬼）R—B辞r屑-＋+佳N框a若+搬O蛛H－(洗秆脱皆剂)→R—O浆H秤-炕+评N挡a绍+弊B矿r划-（尽洗宿脱璃）2乌)抑点制臭柱:消洪除成本车底凑电阿导珠影科响亭（梳阳渡离税子臭交杀换丽剂透）R奖—肢H＋+灾N惭a+O地H-(流掉动应相)→R机—慈N裁a++弟H2OR排—瞒H＋+毅N黑a+B俭r-(流篇动打相)→R芬—颗N哭a++肆H+B助r-洗逢脱挡液(框N蹈a创O咳H予)转炭化撞为哲低签电盗导盲的锄水循，仆消注除庸本子底画电穷导游影帐响但；亮待打测宽离旷子(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