热力灭菌基础

TOC\o"1-5"\h\z热对活细胞的作用 1影响灭菌效果的因素 2\o"CurrentDocument"物理/化学条件 2相对湿度 3曝热时间 3热力灭菌的对数规则 3灭菌机理 3\o"CurrentDocument"对数规则的数学模式 3灭菌工艺有关参数及其相关性 4D值一微生物耐热参数 4\o"CurrentDocument"Z值一灭菌温度系数 6F值一TC灭菌时间 8TF值一标准灭菌时间 90\o"CurrentDocument"灭菌率L 9无菌标准的数学模式 11D值测定法 12不生长分数法 12存活曲线法 13\o"CurrentDocument"对数规则在非湿热灭菌领域的应用 14干热灭菌 15干热去热原 15第五篇热力灭菌基础与无菌保证中国药典200（版在通则附录河11中收载了灭菌法，为我国制药业采用国际标准增添了新的篇章，也为灭菌的半定量控制纳入了定量控制轨道确立了法定依据。和欧美的药典一样，我国药典收载的灭菌法中包括了湿热灭菌法、干热灭菌法、滤过灭菌法、辐射灭菌法及环氧乙烷灭菌法。本篇只讨论热力灭菌的动力基础、无菌保证及常用灭菌设备三个方面，为读者理解热力灭菌原理、理解无菌保证要求、选用灭菌设备、制订验证方案、实施验证等方面提供必要的基础资料。第一章热力灭菌基础热对活细胞的作用热力灭菌是研究最深、使用最广的灭菌方式。当温度超过细胞最佳生理活动的温度范围时，随着温度的升高，细胞代谢减缓，细胞的生长及繁殖最终停止。每种细胞的生理活动的温度均有一上限，一旦温度超过它的上限，起生命作用的蛋白质、酶及核酸会被永久性破坏，从而导致细胞发生不可逆转的死亡。从微观上看，不具备真正核膜结构的原核细胞（如细菌和蓝绿藻）耐热性最强。某些嗜热性细菌甚至可在80C以上的高温中存活。但是，绝大多数生长态菌在80〜100C下即可被迅速杀灭。具备核膜结构的真核微生物，如真菌和原生动物，在60〜80°C下就可被迅速杀灭。多数病毒的耐热较差，只有乙肝病毒（HBV）例外，它要在75C下至少曝热3分钟才能被灭活。还有一些其它类型的生物体也具有较强的耐热性。例如，痉挛性假麻痹症*的蛋白侵袭子（prion）病原体，它既不属细胞型微生物也不属病毒，需要在132C下加热一小时才可完全杀灭；而在细菌中，需氧菌中的芽抱杆菌属（Bacillu）和厌氧菌中的梭状芽抱杆菌属（Clostridium，也具有较强的耐热性。这些细菌的细胞能产生内源性抱子（芽抱）或胞间休眠体，一旦形成这种状态，它们对热、干燥及化学消毒剂的耐受性增强。要想杀灭这类芽抱，使之下降一个数量级（对数单位），干热灭菌的温度必须达到100〜170C，湿热灭菌的温度在80〜129C之间。如以干热灭菌及湿热灭菌的灭菌率L（lethality）来计算，芽抱被杀灭困难的程度比其生长态时增大了104〜105倍。细菌芽抱的耐热性与多种因素有关，有些因素尚没被人们完全认识。芽抱形成时，细菌停止生化反应，并将遗传物质包藏在芽抱中。此过程中发生了一系列生理变化：细胞质大量脱水，体积变小，在变小的原生质体周围形成了一层厚壳，此过程中，还生成了一种特殊化学物质一吡啶二羧酸或DPA（吡啶-2,6-二羧酸）。在芽抱形成阶段，吡啶二羧酸钙能与脱氧核糖核酸（DNA）以及细胞内的酶形成复合物，从而对休眠状态的芽抱起保护作用。处于休眠状态的芽抱可以存活很多年，在适宜的条件下，它们在数分钟内即可恢复到生长状态。*Creutzfekldt-Jakob，克罗伊茨费尔特-雅各布综合症，一种罕见的、有传染性的致命性脑病。影响灭菌效果的因素2.1物理/化学条件在细菌形成芽抱过程中的多种环境因素会影响抱子的耐热性。例如，温度较高并有二价阳离子（如Ca2+、FeeMg2+、Mm+）存在时，芽抱的耐热性增强；与此相反，当pH值超出6.0〜8.0的范围时，或在高浓度的盐水或磷酸盐中形成芽抱时，其耐热性下降。自然界中芽抱的耐热性与环境条件相关，如溶液浓度、水份（相对平衡湿度a）、pH值、对芽抱有损伤作用的物理因素以及对芽抱有抑制作用的化学品等，它们均会影响芽抱的耐热性。包藏在晶体或有机物内的芽抱，其耐热性通常明显高于一般非包藏态的芽抱。因此，在某一温度条件下，将泥土包藏性芽抱和从泥土分离并培养得到的芽抱同时灭菌时，要想获得相同的灭菌效果，同一灭菌温度下，前者所需的灭菌时间比后者要高出十多倍。由于被灭菌品受到了泥土中芽抱的污染，如在运输处理中被未经过滤空气微粒所致的污染，或者由人员或其它物品接触遭受污染时，要将芽抱完全杀灭会很困难，正因为如此，GMP要求采取一切必要的措施防止污染。2.2相对湿度在热力灭菌中，水对杀灭细菌芽抱起着重要作用。与水相关的灭菌方式只有两种：湿热和干热。湿度达到饱和［相对湿度（RH）为100%（或a=1.0）］时的灭菌方式称为湿热灭w菌；相对湿度低于100%条件下的灭菌方式统称干热灭菌。实验数据表明，温度在90〜125°C之间，相对湿度在20〜50%时，细菌芽抱较难杀灭；当相对湿度高于50%或低于20%时，则较易杀灭。这对选择灭菌条件具有指导意义。2.3曝热时间灭菌过程中，原核细胞的死亡（被杀灭）遵循一级反应的规则。温度与某一时间芽抱存活对数间的关系，在许多情况下呈线性。这就是说，在特定的灭菌温度下，任一时间抱子死亡仅与这个时间抱子的浓度相关，而使抱子数下降一个对数单位所需时间并不受抱子原始浓度的影响。本篇第二章中将对此作专门讨论。热力灭菌的对数规则3.1灭菌机理组成细胞的蛋白质分子的功能取决于它的特殊结构，在一定高温条件下受热时白质分子内氢键发生断裂影响了分子空间构型的重排，从而导致微生物的死亡。对这一课题进行的大量的研究表明，细菌抱子，尤其是芽抱杆菌和梭状芽抱具有耐热性。耐热抱子的破坏取决于在水份条件下抱子的水合作用以及核酸和蛋白质的变性。因此，蒸汽灭菌中使用饱和蒸汽是至关重要的。饱和蒸汽的穿透性比干热空气及过热蒸汽的穿透性要强得多。蒸汽冷凝时放出的潜热卡/克）传给被灭菌品，使之升温并使被灭菌品所带的微生物尤其是表面微生物发生水合作用，从而加速了他们的死亡。3.2对数规则的数学模式长期以来，人们进行了大量的探索及研究工作，以解决蒸汽灭菌无定量标准的难题。研究的对象主要是耐热抱子，因为生长态菌在灭菌过程中很容易被杀灭。研究的课题是在蒸汽灭菌过程中，微生物的死亡被杀灭）所遵循的规律。研究的结果表明，将活的微生物看作反应物，并将杀灭后的微生物看作生成物，抱子的死亡基本符合质量作用定律。因为这一研究以阿伦尼乌斯一级反应为基础，故被认为是经典理论。湿热灭菌的对数规则始^921年Bigeowg表的论玄-用对数规则阐述灭菌工艺过程，Rahn等人对此进行了详细的研窕，使对数规则更系统化了。按照他们的理论，灭菌时微生物的死亡遵循对数规则，灭菌过程可以用阿伦尼乌斯rrhenius的一级反应式来描述。根据质量作用定律，在恒定温度及保持其它条件不变的情况!单位时间内被杀灭的微生物数正比于时原有0的数目，即：dN/dUK（N—Nk） （2）0式中：N0为t=0时，存活的微生物数；

Nk为t时被杀灭的微生物数；N为t时存活的微生物数。如果把普通座标换成半对数座标，则可得到一直线，见图.4将(2)积分得到：LgNt=LgNj-(K/2.303)t ⑶图5.1微生物存活数与灭菌时间关系图 图5.2微生物存活数对数与灭菌时间的关系3.3灭菌工艺有关参数及其相关性3.3.1D值--生物耐热参数系指一定温度下将微生物杀灭0城使之下降一个对数单位所需的时「盼)。D值的大小直观地反映了微生物的热耐受性，中国药典附录灭菌法中耐热参数的提法由此而定。有的学者曾将。值译作九成杀灭时间，内涵并无差异。按。的定义，将t=D，Nt=1/10N代入⑶式并化简：0(K/2.303)=lgN)-lgNt=lgN/Nt=lg10=1・.・D=-2.303/K艮股。是直线方程(3)斜率的负倒数』值越大，该温度下微生物的耐热性就越强，在灭菌中就越难杀灭。对某一种微生物而言，在其他条件保持不变的情况下,随灭菌温度的变化而变化。

图5.3D直定义图灭菌温度升高时，直线方程3）的斜率变大，即使微生物杀灭0%所需的时间就短。图5.4直与灭菌温度关系图USP24I攵载的生物指示剂嗜热脂肪杆菌B.Stearothermophili的）孢子在121°C下的0值在1.5-3分钟之间。不同温度下，不同的微生物在不同的环境条件下具有各不相同的，这可以从表4.1.2汇总的数据看出。表5.1.2不同灭菌温度下的值[4]

微生物名称温度。C介质D值(分)嗜热脂肪杆菌105葡萄糖87.8嗜热脂肪杆菌110葡萄糖32.0嗜热脂肪杆菌115葡萄糖11.7嗜热脂肪杆菌121葡萄糖2.4嗜热脂肪杆菌121葡萄糖乳酸林格氏液2.1嗜热脂肪杆菌121注射用水3.0梭状芽抱杆菌105葡萄糖1.3梭状芽抱杆菌105注射用水13.7梭状芽抱杆菌105注射用水2.1Z值一灭菌温度系数Z值系指使某一种微生物的值变化一个对数单位，灭菌温度应升高或下降的度数。在灭菌温度不大的变化范围内，温度和D的对数值之间可设定为线性函数。于是有:TOC\o"1-5"\h\zlgD=lgD+S(T-T) (4)2 1 2 1式中：S为Slop为方程(4)的斜率；D及D分别为T和T度下的)值。1 2 1 2不难看出，Z是直线方程(4)斜率的负倒数，即：Z=(T-T)/(lgD-lgD)1 2 2 1图5.5Z值定义图不同的微生物抱子，在不同的溶液中有各不相同值。

同种抱子诙值在不同溶液中亦有差异。表1.:列举了嗜热脂肪杆菌在不同溶液中的值。表5.1.3嗜热脂肪杆菌在不同溶液中的值[5]溶液Z值葡萄糖水溶液10.3注射用水8.4葡萄糖乳酸林格氏液11.3pH7W酸盐缓冲液7.6平均9.4在没有特定要求时，Z值通常都取10,以简化计算。Z值被用于定量地描述抱子对灭菌温度变化的敏感程度值越大，抱子对温度变化的敏感性越弱，此时，企图通过升高灭菌温度的方式来加速杀灭微生物的收效就不明显。这可通过下表及按表所作的囹.1.8来理解。不同2值下，D121=1.5的抱子在不同温度下的值表灭菌温度°CZ=7CZ=10CZ=12CD/mimlgDD/mimlgDD/mimlgD105300.002.47760.001.78832.611.51311057.691.76118.991.27812.401.09311510.971.0335.970.7764.750.6761202.080.3181.890.2761.820.2601211.500.1761.500.1761.500.176按表中数据，可得值与灭菌温度关系图。图5.6Z值与灭菌温度关系图如果Z=10°C，贝1]110^下的0值为18.99分。Z=7°C时，直线的斜率增大，此时值升到57.67分钟。当Z=12C时，情况正相反,0值降至12.38分钟。当灭菌温度上升时，这三种微生物抱子相应）值变化幅度随值的增大而减少的趋势是显而易见的。3.3.3F值--TC灭菌时间TF值指^c灭菌值系指一个给定值下,灭菌程序在温度tc下的等效灭菌时间。TFt=DT^AlgN （5）式中次为在^下微生物的）值；T△lgN为TC下灭菌程序使微生物数下降的对数单位数。如果△=]，则Ft=Dt，当药液灭菌前微生物总数为。时，则在也将其全部杀灭至0所需的时间^^T=DT^lgNoo因此可以把F理解为TC灭菌值，即灭菌程序赋予被灭菌品彼下的灭菌时间S12.9）。低于121C灭菌的T程序在企业并不少见，特别是小容量注射剂，有些品种只能05C灭菌30分钟，当人们诚为10530分钟时，应当包括了升温及降温对杀灭微生物所起的热效应，因此灭菌程序的保温时间实际不足30分钟。由于。值随灭菌温度的变化而变化，所以不同温度下达到相同灭菌效果时值将随）值变T化而变化。灭菌温度高时，所需的C灭菌时间就短；灭菌温度较低时，则所需TC灭菌时间就长。3.3.4F值一标准灭菌时间0在FDA的大容量注射^GMP草案中，Fo系灭菌过程赋予一个产品21°C下的等效灭菌时间。BP199对F的定义是：将!2况及Z=10C作为参照标准仃。系指被灭菌品在灭菌过程中获得参0照标准条件下相同灭菌效果的曝热时间因此，应当把21C理解为标准灭菌温度,F。则是标准灭菌时间，要是没有标准，对灭菌程序作量化的比较就无从谈起。3.3.5灭菌率LL指在某一温度TC)下灭菌一分钟所获得的标准灭菌时间没有单位。现讨论标准灭菌时间F。与和TC灭菌时间之间的关系。T从⑷式已知TOC\o"1-5"\h\zZ=(T-T)/(lgD-lgD)1 2 2 14T2=121C, T1=T代入上式Z=(T-121)/(lgD-IgD) (6)121TlgD12-lgD=lg(D2/DT)=(T-121)/ZD121/Dt=10(t-121)/z (7)从3.3节⑸式FT=DT^AlgNF0=D121^AlgN (8)Ft=Dt^AlgN (9)达到同样灭菌效果时，⑻(9^^lgN等值。F0/Ft=D]21/Dt=10(T-121)/Z灭菌率L=10(T-121)/Z=F0/Ft (10)上式中通常取=10C

表4.1.例举了Z=10°C时不同温度下的灭菌率值比较110°C和121°C的灭菌率可以得出结论：--110C灭菌12.6分钟和121C灭菌1分钟等效。—灭菌时间相等时，110C灭菌效果只有!21^下灭菌效果的.9%。表4.1.4=10C时，不同温度下的灭菌率和21C下灭菌1分钟时所相当的^灭菌时间温度TC灭菌率L=Fo/FT=D12/dt121C下灭菌1分钟时所相当的TC灭菌时间F=F/L1211.00 T 0 1.001200.7941.2591180.5011.9951160.3163.1621140.1995.0121120.1267.9431100.07912.600说明116C下灭菌1分钟对芽抱杀灭效果只有标准灭菌状态下的32%；110C下1分钟，仅为标准灭菌状态下的7.9%。121C下灭菌!分钟相当于110CT灭菌!2.6分钟；112灯下灭菌\943分；114C下灭菌5.012分钟。4L86图5.8温度和灭菌率之间的关系21004L86图5.8温度和灭菌率之间的关系2100T/C110 120 1305.10温度和灭菌率之间的关系不同温度，不同值下的灭菌率（Lethalrate见附表4.1低温度和灭菌率之间的关系可以用图8来说明。温度低于100C时，灭菌率/氐得几乎可忽略不计，随着灭菌温度的上升L值变大。在超过121C时，L值随温度上升急剧增加。根据这一原理，当被灭菌品为手术刀、不锈钢器具时，通常采用高温灭菌法，温度可超过21°C，以缩短灭菌时间；对药物产品而言，过高的温度容易造成产品降解或稳定性方面问题，一般不采用超MC的灭菌温度。3.3.6无菌标准的数学模式我国及欧、美药典都把无菌保证值不得大于百万分之一作为最终灭菌产品无菌保证的要求[7]，在文字说明中，常用terilityAssuranceLevel(SM1)06的提法，但在F计算时，则使用0以下定义：TOC\o"1-5"\h\zSAL无菌保证值=lg(微生物存活几率 (11)药典对最终灭菌的要求赋予对数规则以新的内涵，它的数学模式也因此发生了变化。设湿热灭菌产品微生物存活概率为，产品灭菌前初始污染菌数为0,污染菌的耐热参数为t，这些参数与灭菌时间F之间存在如下关系式： ° TTlgP=lgN°—FT/DT (12)化简得：FT/DT=lgN0—lgPFt=(lgN°—lgP)DT 把P=10-6代入Ft=Dt*lgN0+6*Dt (13)6*Dt=Ft—Dt*lgN0 (14)如果所选用的灭菌温度为121.1C，那么，(14)式中TC灭菌时间用F来表示，微生物0耐热参数应使用D⑵，从(14)可得到以下药典无菌保证通用表示式：F0N6*D121+D121*lgN0或 (F0—D121*lgN0)/D121A6 (15)从(15)可以看出F从二个方面对产品的无菌保证作出贡献一是将抱子杀灭至仇(图04.1.11A)二是为产品提供无菌保证值图4.1.1中B)，使抱子存活的概率再下降个对数单位，FDA将SAL称为最低安全系数aminimumsafetyfactor)，一只说明了它的安全性，二则表明它是最终灭菌产品无菌保证的最低要求。90%90%W御图5.9理想灭菌过程示意图3.4D值测定法3.4.1不生长分数法在注射剂协会及药品生产企业协会〈干热灭菌及去热原验证＞(专题技术报告3)对D值的测定已有详细阐述。不生长分数法又称阴性分数法，D值测试需专用特殊设备，如生物指示剂耐热性测定仪(BIERvessel)，它在灭菌过程中形成矩形脉冲曲线，即升温及降温极快，能保持恒定的温度，曝热过程容易计时。此测定法的假设条件是：微生物存活数从N到灭菌终点始终与曝热时间呈线性关系(对数规则)。实验的具体方法有二种。一种称0最可能数测定法(Mostprobablenumbermethod)，仅需一次加热就可估算出D值。将一组样品(至少10个样本)置于设定灭菌温度下，加热到设定时间后，取出并分别作无菌检查。该方法检测灵敏度高于平板计数法。当灭菌温度T为121°C时，可用下式计算D值：Dt=F/lgN0—lg(2.303lgn/q) (16)其中，n指样品总数q指曝热处理后的无菌样品数。另一种方法实验时每组至少需要10个样品，将其置于预定温度下，设置不同的曝热时间，但曝热的时间间隔相同，热处理后，将样品取出，放入无菌液体培养基中，于适宜温度下培养。培养结束时，记录每组样品中没有微生物生长的样品数，并按表1进行排列。表4.1.5：阴性分数法估算D值［每组中无微生物生长样品数(f)/每组样品数(n)］表121C下的曝热时间(分钟)357911131517f/n0/100/101/103/105/107/1010/1010/10f(阴性样品麴_0135710_选择从全部生长(0/10)的最长曝热时间到显示完全不生长(10/10)的最短曝热时间之间的数据计算D值。从表中可知，本次试验中的两个时间分别是5分钟和15分钟。抱子完全杀灭(存活抱子数小于1)时间(T)可用下式计算：T=Tk—d/2—(d/10xf) (17)其中，二指阴性分数范围的下限(全部样品不长菌所需的最短曝热时间)d指曝热时间间隔由表1数据计算，得到T=15—1—(2/10x26)=8.8分钟然后，按下式计算D值：

D=T/(lgN0+0.2507) (18)假设N0=105，则D=8.8/(5+0.2507)=1.7分钟3.4.2存活曲线法存活抱子的对数值N该法至少需要测试两个样品，并在设定温度下(如121°C)分别取二个不同的曝热时间。热处理样品及对照样品(未经热处理)中的微生物数可采用二种方法：平皿计数法，或经薄膜过滤并置于适当培养基表面培养的方法。在培养终点，对每个样品中的存活微生物(Ns)进行计数，再将实验数据的平均值取常用对数(Lg)，并对相应的曝热时间F0(以分钟为单位)作图，可得到图1所示的存活曲线。 °存活抱子的对数值N543210-1-2T=121C下的曝热时间(分钟)图5.10121C下抱子的存活曲线在存活曲线上，从微生物差值为一个对数单位的二个点分别作x轴和y轴的相平行线，在x轴上即可求得D值；也可用下式计算(11)：D121c="怎凡一®) (19)举例，D值测定中曝热时间为5分钟，而lgN为5，lgN为2，则0 SD121C=5/(5—2)=1.7分钟从图1中也可看出，D值为存活曲线斜率的负倒数(-1/k)。因此，D值可在存活曲线的直线段，用未加权最小二次方线性回归分析法按下式求得：Zuy—(Zu)(Zy)/nK= (20)Zu2—(Zu)2/n式中，F。为曝热时间的分钟数，y为曝热条件下存活菌落数的平均值，n指所得实验数据的组数。°3.5对数规则在非湿热灭菌领域的应用经典的对数理论问世以来，国外很多学者对灭菌过程中微生物死亡的规律进行了大量的实验工作，并对测定的结果进行了统计分析，结果表明，有的抱子在灭菌时，存活的对数值和灭以上图中，入指初期滞呆型曲线北指始末滞呆型曲线；密旨非均一性存活曲线。与此同时，有不少学者提出了一些新的理论来解释非线性原因，如多致命点理论，抱子耐热非专一性理论认为一个细胞一个以上的致命点灭活后，细胞才会死亡。抱子耐热非专一性理论认为抱子的耐热性在灭菌过程中是变化的。这些理论过于复杂，难以在实际工作中应用。于是，人们又从三个方面，即科学性，计算结果的安全性及使用的简便性对对数规则进行了再评价。经典的对数规则经受住了考验并在实践中获得了发展。昔日在蒸汽灭菌领域起家的对数规则，如今对干热灭菌、气体灭菌及辐射灭菌的适用性已众所周知。不管所采用的灭菌方法是热力学的、化学的还是辐射的，在一定的灭菌条件下，微生物的死亡均遵循对数规则值，即使微生物下降一个对数单位所需的时间或辐射剂量可从下式算或根据实验结果用作图法求得。D=U/（LgN—LgNu）0式中，U—系指给定灭菌条件下的灭菌时间或辐射剂量；N0--芽抱的初始数值nU--灭菌后存活的抱子数。经典理论的发展拓宽了它在灭菌领域的应用范围并为灭菌程序的设计和验证提供了方便条件。应当注意，在辐射灭菌法中，0系微生物耐辐射参数，意指使污染菌下降一个对数单位所需的剂量。3.5.1干热灭菌如前所述，干热灭菌是指在非饱和湿度下进行的热力学灭菌。因此，干热灭菌时的相对湿度范围可从99.9%至1%以下。干热灭菌的介质通常是被灭菌品所处湿度下的热空气，在灭菌过程中，通过强制方式将热空气对流。随着热空气将水分逐渐带走，被灭菌物品及芽抱跟着失水，从而导致灭菌率发生相应的变化。干热灭菌与湿热灭菌的动力学特征相似，但反应机理却有所不同。干热灭菌是使微生物氧化而不是蛋白质变性，因此，干热灭菌需要较高的温度条件。在制药工业中，干热灭菌被广泛用于热稳定性好、但又不能经受高压蒸汽灭菌的物品，如甘油、油类、凡士林、石蜡。此外，它还可用于某些粉状的药物组份如滑石粉、磺胺类药物以及玻璃和不锈钢设备的灭菌。在干热灭菌中，取】7此为参照温度，相应的灭菌时间以孔表示。尽管干热灭菌过程中抱子的耐热性会发生一些变化，但药典规定的无菌保证值已有了相当的安全性，因此，除Z取20°C外，灭菌率的计算式与湿热灭菌相同，。3.5.2干热去热原内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁外侧的脂多糖类物质ipopolysaccharides)其中磷脂多糖体是其活性中心，致热作用最强。磷脂多糖体是由多糖萄糖、半乳糖、庚糖、H-乙酰葡萄糖胺等糖组成通过KDO(2-Keto-3-deoxyoctona键而与磷脂A(LipidA结合组成一个单位结构，许多这样的单位结构组成长链的巨大分子。磷脂多糖体的化学组成因菌种不同而异，从大肠杆菌分离出来的磷脂多糖体中奄〜69%的糖，12〜13%的类脂化合物，7%的有机磷和其它一些成分。磷脂多糖体的分子量约新1Q〜5x16，也有人认为是7x105~〜7x16，分子量越大致热作用也越大。由于低剂量内毒素注入人体后便会导致发热反应，故而也称之为热原。任何旨在去除产品中所含的脂多糖的工艺过程均称为去热原工艺。干热法是最为有效的去热原方法之一。但是，去热原要求的温度很高，如170〜250C，甚至更高。在170C下去热原速度很慢，需约30分钟方能使纯内毒素下降1个对数单位，而在250C下达到同样效果仅需9秒钟。对干热去热原工艺进行验证时，通常直接向待去热原物品中加入已知量的内毒素，然后证明该工艺能使内毒素至少下降3个对数单位。在去热原计算中，L的计算式相同，参照温度取170C，Z取54C。

表4.1.5湿热灭菌中不同温度和值下的灭菌率(L)数据t/(dL值/(分)Z=7Z=8Z=9Z=10Z=11Z=121000.0010.0020.0060.0080.0120.0181010.0010.0030.0060.0100.0150.0221020.0020.0040.0080.0130.0190.0261030.0030.0060.0100.0160.0230.0321