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文档简介
生物化学第二章核酸化学第1页,课件共101页,创作于2023年2月本章内容概述DNARNA核酸的性质第2页,课件共101页,创作于2023年2月第一节核酸的发展历史及研究现状
第3页,课件共101页,创作于2023年2月核酸化学研究史(1)1869年Miescher,博士论文工作中测定淋巴细胞蛋白质组成时,发现了不溶于稀酸和盐溶液的沉淀物,并在所有细胞的核里都找到了此物质,故命名"核质(Nuclein)"1879年Kossel经过10年的努力,搞清楚核质中有四种不同的组成部分:A,T,C和G;核酸研究史1第4页,课件共101页,创作于2023年2月核酸化学研究史(2)1889年Altman建议将“核质”改名为“核酸”,因为已经认识到“核质”乃“核酸”与蛋白质的复合体。1909年Levene发现酵母的核酸含有核糖1930年Levene发现动物细胞的核酸含有一种特殊的核糖--脱氧核糖,得出了一个错误概念:植物核酸含核糖,动物核酸含脱氧核糖。这个错误概念一直延续到1938年,这时方清楚RNA和DNA的区别。Levene还提出了核酸的“磷酸-核糖(碱基)-磷酸"的骨架结构,解决了DNA分子的线性问题,还在1935年提出"四核苷酸",认为这四种碱基的含量是一样的。核酸研究史2第5页,课件共101页,创作于2023年2月核酸化学研究史(3)1950年Chargaff,E和Hotchkiss,R.D.采用纸层析法仔细分析了DNA的组成成分,得知[A]=[T],[G]=[C],[A+G]=[C+T]1953年Watson,Crick根据DNA的X射线图谱的研究结果,提出了DNA的双螺旋模型(Doublehelix)。几星期后提出了半保留式复制模型。1957年Meselsnhe&Stahl用密度梯度超离心法,证实半保留复制假说。核酸研究史3第6页,课件共101页,创作于2023年2月核酸化学研究史(4)1958年Kornberg得到高纯度的DNApolymerase,这种酶需要一个模板DNA。1960年Cairns索性将复制中的细菌DNA的电镜照片拍了下来。1970年发现第一个DNA限制性内切酶。1972年DNA重组技术的建立。1978年双脱氧DNA测序法的建立。1990年人类基因组计划实施。核酸研究史4第7页,课件共101页,创作于2023年2月第二节概述核酸(nucleicacid)是由碱基(嘌呤和嘧啶)、戊糖和磷酸组成的高分子物质,是生物体的基本组成成分。二、种类及分布
DNA(脱氧核糖核酸)
RNA(核糖核酸)一、概念第8页,课件共101页,创作于2023年2月分布:
DNA:主要在细胞核中,是染色体的主要成分。此外在线粒体、叶绿体、
质粒及细胞膜上.RNA:细胞核——核仁;
细胞质——核糖体及上清液中。第9页,课件共101页,创作于2023年2月三、核酸的组成
核酸是一种线形多聚核苷酸(polynucleotide),其基本结构单位是核苷酸(nucleotide)。戊糖碱基磷酸核苷核苷酸核酸
第10页,课件共101页,创作于2023年2月核苷酸的基
本结构第11页,课件共101页,创作于2023年2月腺苷酸第12页,课件共101页,创作于2023年2月(一)核酸中的戊糖D-核糖(D-ribose)D-脱氧核糖(D-deoxyribose)核酸据此分类:脱氧核糖——DNA;核糖——RNA;核酸中的戊糖均为
β-D-型一、核苷酸第13页,课件共101页,创作于2023年2月(二)碱基尿嘧啶胸腺嘧啶胞嘧啶核酸中的碱基分两类:1、嘧啶碱(pyrimidine):是嘧啶的衍生物。第14页,课件共101页,创作于2023年2月一、核苷酸2、嘌呤碱(purine):由嘌呤衍生而来。第15页,课件共101页,创作于2023年2月腺嘌呤鸟嘌呤尿嘧啶胞嘧啶胸腺嘧啶第16页,课件共101页,创作于2023年2月在生理pH下,在生物体内,碱基多以亚氨基、酮式存在。第17页,课件共101页,创作于2023年2月3、稀有碱基:
一些修饰碱基,因含量甚少而称之。大多为甲基化碱基,多在tRNA中。一、核苷酸第18页,课件共101页,创作于2023年2月(三)核苷:
(nucleoside)
核苷:戊糖与碱基缩合而成,并以糖苷键相连接。糖苷键:
二者的连接是C-N键,称N-糖苷键。一、核苷酸第19页,课件共101页,创作于2023年2月核苷的表示:核苷:A、G、C、U脱氧核苷:dA,dG,dC,dT修饰核苷:如5-甲基胞嘧啶:m5dC。第20页,课件共101页,创作于2023年2月(四)核苷酸(nucleotide,nt)1、种类:1)按酯化位点:可在核糖的2’-,3’-,5’-;2)按核糖类型:
核苷酸、脱氧核苷酸一、核苷酸核苷中戊糖的羟基被磷酸酯化,即为核苷酸。第21页,课件共101页,创作于2023年2月2、结构:第22页,课件共101页,创作于2023年2月3、表示:与一个磷酸结合——MP:(d)AMP、(d)GMP、(d)CMP、(d)TMP、UMP与二个磷酸结合——DP:如:ADP与三个磷酸结合——TP:如:ATP
一、核苷酸第23页,课件共101页,创作于2023年2月4、特殊核苷酸:1)环核苷酸:
核糖3’-,5’-成环。
cAMP、cGMP
功能:第二信使,激素、一些药物、神经递质通过其发挥生理作用。一、核苷酸第24页,课件共101页,创作于2023年2月2)核苷多磷酸和寡核苷多磷酸:
如:pppAppp(枯草杆菌)
A5’ppppA5’(哺乳动物)对代谢起调控作用。第25页,课件共101页,创作于2023年2月一、核苷酸的连接方式1、3’-,5’磷酸二酯键将核苷酸连接成核酸大分子。一、核苷酸第三节核酸的结构第26页,课件共101页,创作于2023年2月3’-,5’磷酸二酯键第27页,课件共101页,创作于2023年2月二、核酸的一级结构:
多核苷酸链中各核苷酸残基的排列顺序称~。第28页,课件共101页,创作于2023年2月1)一级结构表示方法如下:A、磷酸(P)的位置
在左:表示与5’-OH结合;在右:与3’-OH结合如:pApCpTpGB、箭头表示核酸酶的水解部位:
pApCpTpG,即C的3’-OH游离。C、一般将碱基缩写用连字符连起表示,如:A-C-G-U一、核苷酸第29页,课件共101页,创作于2023年2月2)读向:
碱基序列从左到右表示5’——3’,由3’-,5’磷酸二酯键连接。若两链反向平行,则需注明每条链的走向。如:
5’A-T-G-C-C-T-G-A3’
3’T-A-C-G-G-A-C-T5’一、核苷酸第30页,课件共101页,创作于2023年2月
由数量庞大的4种脱氧核苷酸通过3’-,5’磷酸二酯键连接成的直线形或环形多聚体。第31页,课件共101页,创作于2023年2月三、DNA的双螺旋二级结构1、双螺旋结构模型建立的依据:1)根据DNA碱基组成的定量分析提出chargaff碱基配对原则:A=T,G=C2)根据对DNA纤维和晶体的x-衍射分析。3)电位滴定证明。二、DNA第32页,课件共101页,创作于2023年2月Watson-Crick的DNA双螺旋2.0nm结构特征第33页,课件共101页,创作于2023年2月第34页,课件共101页,创作于2023年2月DNA中的四种碱基及它们间的氢键胞嘧啶胸腺嘧啶鸟嘌啉腺嘌啉TCAG第35页,课件共101页,创作于2023年2月双螺旋中的碱基对(basepair,bp)第36页,课件共101页,创作于2023年2月2,双螺旋结构的特点:(Watson-Crick模型)1)形成:两条链反向平行;右手螺旋。二、DNA第37页,课件共101页,创作于2023年2月2)结构:A、核糖-磷酸以3’-,5’磷酸二酯键连接成骨架;碱基在内;B、大沟、小沟。二、DNA第38页,课件共101页,创作于2023年2月3)尺寸:二、DNAA、直径:2nm;B、碱基距离:0.34nm;C、螺距:3.4nm;D、一周10个核苷酸。第39页,课件共101页,创作于2023年2月4)双螺旋的稳定性:A、依靠碱基堆积力B、氢键C、离子键D、范德华力第40页,课件共101页,创作于2023年2月3、二级结构的构象类型:二、DNAB-DNAA-DNAZ-DNA第41页,课件共101页,创作于2023年2月DNA二级结构多态性A-DNAB-DNAZ-DNA类型螺旋方向螺旋直径螺距(nm)每转碱基碱基对间碱基对与
(nm)对数目直距离(nm)水平面倾角A右2.32.8110.25520°B右2.03.4100.340°Z左1.84.5120.377°第42页,课件共101页,创作于2023年2月B-DNA与A-DNA第43页,课件共101页,创作于2023年2月几种DNA钠盐的特点:B-DNA:生理状态下多为此种;92%相对湿度A-DNA:右手螺旋;75%相对湿度;生理状态下多见dsRNA、DNA-RNAZ-DNA:人工合成、左手螺旋;嘧啶、嘌呤交替;有m5dC
;与基因表达调控有关;此外,还发现有C、D、E等型。第44页,课件共101页,创作于2023年2月H-DNA:三条链局部螺旋第45页,课件共101页,创作于2023年2月四、DNA的三级结构DNA双螺旋进一步扭曲即成三级结构。天然DNA有双链DNA(dsDNA),有的病毒为单链DNA(ssDNA)在dsDNA中:
线形分子(大多数)
环状分子(dcDNA):质粒、线粒体、叶绿体、病毒、细菌二、DNA第46页,课件共101页,创作于2023年2月1、超螺旋结构特点:可将长链压缩在一较小体内;密度大;凝胶电泳中移动速度快。二、DNA第47页,课件共101页,创作于2023年2月第48页,课件共101页,创作于2023年2月正螺旋和负螺旋DNA双螺旋为右旋螺旋。细胞中的环状DNA一般呈负超螺旋,即右旋螺旋不足导致部分碱基不形成配对,分子通过整体拓扑学上的右旋来补足右旋螺旋的不足,在数学上呈1:1,即分子整体右旋一圈来补双螺旋上的一圈不足。正超螺旋为双螺旋旋转过度,通过分子整体的左旋来解去过度的螺旋。正超螺旋
左旋负超螺旋
右旋第49页,课件共101页,创作于2023年2月2、核小体中的
扭曲方式在真核细胞染色质中,DNA双螺旋分子盘绕在组蛋白上形成核小体。许多核小体由DNA连成念珠状结构,再盘绕压缩成高层次的结构———染色体。二、DNA第50页,课件共101页,创作于2023年2月五、DNA的功能1、DNA一级结构的特点基因:是含特定遗传信息的核苷酸序列
(DNA或RNA)是遗传物质的最小功能单位。若干bp多个基因pr+DNA染色体二、DNA第51页,课件共101页,创作于2023年2月1)原核生物基因组:
基因在同一染色体上。
A、除调节序列和信号序列外,多为结构基因;B、功能相关的基因常连在一起,并转录在同一mRNA中。二、DNA第52页,课件共101页,创作于2023年2月C、基因有重叠;
同一核苷酸顺序中包含多种生物信息。第53页,课件共101页,创作于2023年2月2)真核生物基因组:
一般基因分布在若干染色体上。
A、有重复序列;B、有断裂基因:即有内含子。
内含子(intron):DNA分子中不编码的序列。
外显子(exons):DNA分子中可表达的序列。二、DNA第54页,课件共101页,创作于2023年2月启动子外显子内含子转录终止子真核生物的基因结构第55页,课件共101页,创作于2023年2月内含子与外显子第56页,课件共101页,创作于2023年2月2、DNA是遗传信息的载体
半保留复制保证了亲代性状传到子代,保证了亲代与子代的相似性。二、DNA第57页,课件共101页,创作于2023年2月3、DNA是变异的物质基础变异是生物进化的基础。变异的发生:1)DNA复制时出错;2)理化因素等引起碱基变化或缺失,使DNA碱基序列改变,从而发生性状变异。二、DNA第58页,课件共101页,创作于2023年2月六、RNA(一)RNA的结构组成:4种核苷酸,有稀有碱基;连接:同DNA形成:一般以DNA为模板合成,有例外。结构:单链线形分子,局部区域有双螺旋。第59页,课件共101页,创作于2023年2月(二)RNA的类型三种:
信使RNA(messengerRNA,mRNA)
核糖体RNA(ribosomelRNA,rRNA)
转运RNA(transferRNA,tRNA)三、RNA第60页,课件共101页,创作于2023年2月此外,在真核细胞中还有少量:核内小RNA(snRNA):
参与核糖体的组成。不均一RNA(hnRNA):
mRNA的前体。反义RNA(asRNA):可与mRNA部分或全部序列互补;抑制DNA复制、转录;抑制mRNA翻译。第61页,课件共101页,创作于2023年2月1、tRNA
约占全部RNA的15%;由70-90个核苷酸组成许多种类;沉降系数4S。三、RNA第62页,课件共101页,创作于2023年2月1)tRNA结构:一级结构多已清楚,含较多稀有碱基;二级结构为三叶草有:aa臂、二氢嘧啶环、反密码环、可变环、
TΨC
环三、RNA第63页,课件共101页,创作于2023年2月tRNA三级结构为倒L型第64页,课件共101页,创作于2023年2月A、在pr合成中转运aa;B、在pr合成的起始、DNA反转录合成及其它代谢调节中起作用。2)tRNA功能:第65页,课件共101页,创作于2023年2月2、mRNA和hnRNA1)合成:以DNA为模板(核内)
合成
hnRNA(含内含子和外显子)加工成熟的mRNA
入细胞质蛋白质合成三、RNA第66页,课件共101页,创作于2023年2月RNA转录自DNA第67页,课件共101页,创作于2023年2月合成mRNA第68页,课件共101页,创作于2023年2月切除内含子第69页,课件共101页,创作于2023年2月2)mRNA结构特点:3‘末端有polyA结构:与mRNA从核入质有关,与mRNA半寿期有关。5‘末端有帽子结构:G被甲基化,此可能与pro合成的起始有关。第70页,课件共101页,创作于2023年2月3)功能:是蛋白质合成的模板mRNAtRNA核糖体第71页,课件共101页,创作于2023年2月3、rRNA1)占RNA总量的80%,是构成核糖体的骨架。2)核糖体功能:
pr合成的部位.3)结构:分大、小亚基一、二级结构多已确定,但功能不清。三、RNA第72页,课件共101页,创作于2023年2月原核细胞:70S核糖体;真核细胞:80S核糖体;第73页,课件共101页,创作于2023年2月4、RNA的功能1)在DNA复制、转录、翻译中起重要调控作用;
a.遗传密码的中间担体(mRNA)b.mRNA剪接等加工的活性成份(snRNA)c.核糖体的骨架结构及与mRNA的识别(rRNA)d.活化氨基酸的担体(tRNA)2)有催化作用;3)可作为遗传物质(如逆转录病毒)。三、RNA第74页,课件共101页,创作于2023年2月第75页,课件共101页,创作于2023年2月第四节、核酸的性质一、一般理化性质1、两性电解质:2、溶解性:微溶于水,不溶于一般有机试剂(乙醇沉淀核酸),钠盐易溶于水。3、粘度高:一般DNA比RNA粘度高。4、水解性:可被酸、碱或酶水解,DNA比
RNA对稀碱稳定。第76页,课件共101页,创作于2023年2月5、颜色反应:1)核糖与浓盐酸和苔酚蓝共热呈绿色,在
670nm处可测RNA;2)2-脱氧核糖与酸和二苯胺共热呈蓝紫色,在595nm处可测DNA。二种反应可作定性试验,定量试验灵敏度低、准确性差,但快、简便。四、核酸的性质第77页,课件共101页,创作于2023年2月二、紫外吸收性质
碱基具共轭双键强烈吸收260-290nm波段紫外光,最大吸收峰在260nm附近。应用:1、不同核苷酸有不同吸收特性,可用紫外分光光度计进行定性、定量测定。
1OD相当于:50μg/mlDNA40μg/mlRNA20μg/mlNt(核苷酸)四、核酸的性质第78页,课件共101页,创作于2023年2月2、确定所提取的核酸是否纯品。
1)DNA:≈1.8纯品
OD260/OD290
>1.8RNA污染<1.8pro污染
2)RNA:
OD260/OD290≈2.0纯品四、核酸的性质第79页,课件共101页,创作于2023年2月3、紫外可使相邻TT间形成共价结合的胸腺嘧啶二聚体,引起基因突变。A=TC=GT=AT=A紫外A=TC=GTATA第80页,课件共101页,创作于2023年2月三、核酸结构的稳定性1、碱基堆积力:双螺旋内部碱基形成的疏水区;2、碱基间的氢键:3、磷酸基与介质中阳离子形成的离子键4、范德华力。四、核酸的性质第81页,课件共101页,创作于2023年2月四、核酸的变性1、变性的概念1)现象:双螺旋DNA和具双螺旋区的RNA氢键断裂,空间结构被破坏,形成单链无规则线团状的过程。四、核酸的性质第82页,课件共101页,创作于2023年2月2)结果:A、增色效应:
260nm紫外吸收增加;
B、粘度下降、浮力密度上升;
C、生物学性能部分或全部丧失。3)引起变性的因素:温度、pH、尿素、甲醛等。第83页,课件共101页,创作于2023年2月2、热变性与TmTm:在热变性中,紫外吸收增加的中点值所对应的温度,称该DNA的熔解温度(meltingtemperature,Tm);又称热解链温度。四、核酸的性质第84页,课件共101页,创作于2023年2月3、影响Tm的因素:1)DNA的均一性;2)G-C含量:Tm与G-C含量成正比。3)介质中的离子强度:离子强度低,Tm低,熔解温度范围窄。第85页,课件共101页,创作于2023年2月DNA分子的Tm与GC含量的关系第86页,课件共101页,创作于2023年2月盐浓度对DNA变性的影响第87页,课件共101页,创作于2023年2月五、核酸的复性概念:变性DNA在适当条件下(缓慢降温),可使两条彼此分开的链重新缔合成双螺旋结构的过程。
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