毛细管电泳法检测鲜肉中抗生素残留

毛细管区带电泳方法检测鲜肉中抗菌药物残留实验目的：1、通过毛细管区带电泳实验，初步掌握毛细管电泳系统的简单操作。2、了解毛细管电泳分析方法的确立与编辑。实验原理：高效毛细管电泳是指离子或带电粒子以毛细管为分离室,以高压直流电场为驱动力,依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的液相分离分析技术。当固体（毛细管壁）与液体接触时，固体表面由于某种原因带-种电荷，则因静电引力使其周围液体带有相反电荷，在液-固界面形成双电层，二者之间存在电位差。当毛细管内液体两端被施加电压时，就会发生液体相对于毛细管壁的移动，即液体会以某一固定的速度流动，整体移动着的液体叫电渗流。由于电渗流的存在，毛细管电泳过程中各种电性离子在毛细管柱中的迁移速度为：v+=v电渗流+v+ef，阳离子运动方向与电渗流一致；v_=v电渗流-匕f，阴离子运动方向与电渗流相反；V=v ，中性粒子运动方向与电渗流一致0电渗流在一般情况下（毛细管表面带负电），电渗流的方向是由正极到负极。由于电渗流可以比阴离子的淌度大一个数量级，它可以将阴离子推向阴极。所以，阴离子，中性离子以及阳离子可以向同一方向“迁移”面在一次分析中得到分离。三、 仪器及试剂仪器：AngilentHP3DCE型高效毛细管电泳仪；未涂层熔硅弹性石英毛细管柱75pm（i.d）X60cm（有效长度为56cm）（河北永年光纤厂）；PHS-3C型pH计；KQ250B型（250W,40KHz）超声波清洗器；自动移液枪；微量加样器。塑料样品瓶若干个，分别用存放标准样品、缓冲溶液、NaOH、超纯水和废液，做好标号；0.22pm纤维素滤膜。标样：准确称取环丙沙星、氧氟沙星、恩诺沙星标准品，用30mmol/LTris-HCl缓冲液（PH8.3）溶解，配成80〃g/mL的标准溶液，密封置于4°C冰箱保存。缓冲溶液（buffer）：配置30mmol/LTris-HCl缓冲溶液，用HCl和NaOH调节pH为8.3，置4°C冰箱储存，备用。0.1mol/LNaOH溶液，超纯水。四、 实验步骤开机：在实验教师的指导下，打开仪器和配套的工作站，仪器初始化。2.实验准备工作：（1）、灌装样品瓶（冲洗液、缓冲液和样品），（2）、样品瓶脱气，（3）、样品瓶放入样品盘方法编辑前处理：依次用1mol/LNaOH溶液冲洗10min，水冲洗5min，缓冲液冲洗5min检测波长：280nm；压力进样（30mbar）；进样时间：8s；分离电压:18kV；温度：18°C。检测开始5.完成实验以后，用0.1mol/LNaOH冲洗毛细管10min,纯水冲洗5min。6.打印报告，清理实验台。五、 数据处理根据电泳图确定样品的迁移时间和峰面积。六、 注意事项冲洗毛细管时禁止在毛细管上加电压；不允许更改讲义上给定的工作电压，也不建议改变进样时间。NaOH、超纯水、样品和缓冲溶液等之间的切换是自动的，在实验过程中要随时注意是否放在样品盘正确位置。冲洗毛细管对于实验结果的可靠性和重现性至关重要，务必认真完成每一次冲洗，不允许缩短冲洗时间或者不冲洗。做完实验以后一定要用水冲洗毛细管，否则可能会导致毛细管堵塞，严重影响实验结