基因工程的基本操作法则

提取目的基因1目的基因与运载体结合23将目的基因导入受体细胞4目的基因的检测与表达一原核细胞的基因结构一原核细胞的基因结构非编码区编码区非编码区启动子终止子与RNA聚合酶结合位点1.编码区：能转录相应的信使RNA，能编码蛋白质的序列。2.非编码区：调控遗传信息表达的核苷酸序列(启动子、终止子），不编码蛋白质。一真核细胞的基因结构一真核细胞的基因结构非编码区编码区非编码区启动子终止子与RNA聚合酶结合位点1.编码区：外显子：能编码蛋白质的序列内含子：不能编码蛋白质的序列2.非编码区：调控遗传信息表达的核苷酸序列(启动子、终止子），不编码蛋白质。外显子内含子步骤一：目的基因的获取步骤一：目的基因的获取目的基因是人们所需要转移或改造的基因，获取目的基因是实施基因工程的第一步。如苏云金芽孢杆菌的抗虫基因，还有植物的抗病（抗病毒、抗细菌）基因、种子贮藏蛋白的基因，以及人的胰岛素基因、干扰素基因等。步骤一：目的基因的获取目的基因的提取方法步骤一：目的基因的获取目的基因的提取方法直接分离基因人工合成基因步骤一：目的基因的获取目的基因的提取方法直接分离基因人工合成基因鸟枪法步骤一：目的基因的获取目的基因的提取方法直接分离基因人工合成基因鸟枪法从基因文库中获取步骤一：目的基因的获取目的基因的提取方法直接分离基因人工合成基因鸟枪法从基因文库中获取基因组文库cDNA文库步骤一：目的基因的获取目的基因的提取方法直接分离基因人工合成基因鸟枪法从基因文库中获取cDNA文库反转录法合成DNA基因组文库步骤一：目的基因的获取目的基因的提取方法直接分离基因人工合成基因鸟枪法从基因文库中获取cDNA文库反转录法合成DNA根据已知的氨基酸序列合成DNA基因组文库步骤一：目的基因的获取目的基因的提取方法1.鸟枪法（散弹射击法）步骤一：目的基因的获取目的基因的提取方法1.鸟枪法（散弹射击法）用限制酶将供体细胞中的DNA切成许多片段，从中找出含有目的基因。多用于原核生物。步骤一：目的基因的获取目的基因的提取方法2.人工合成基因法（多用于真核生物）目的基因的mRNA单链DNA(cDNA)步骤一：目的基因的获取目的基因的提取方法2.人工合成基因法（多用于真核生物）①反转录法：以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。目的基因的mRNA步骤一：目的基因的获取目的基因的提取方法2.人工合成基因法（多用于真核生物）①反转录法：以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。目的基因的mRNA单链DNA(cDNA)反转录步骤一：目的基因的获取目的基因的提取方法2.人工合成基因法（多用于真核生物）②根据已知的氨基酸序列合成DNA法：根据已知蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的信使RNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测出它的结构基因的核苷酸序列，再通过化学方法，以单核苷酸为原料合成目的基因。步骤一：目的基因的获取目的基因的提取方法2.人工合成基因法（多用于真核生物）②根据已知的氨基酸序列合成DNA法：蛋白质的氨基酸序列结构基因的核苷酸序列推测推测mRNA的核苷酸序列目的基因化学合成步骤一：目的基因的获取优点缺点鸟枪法反转录法根据已知氨基酸合成DNA法上述三种目的基因提取的方法有何优缺点？步骤一：目的基因的获取优点缺点鸟枪法反转录法根据已知氨基酸合成DNA法上述三种目的基因提取的方法有何优缺点？操作简便广泛使用步骤一：目的基因的获取优点缺点鸟枪法反转录法根据已知氨基酸合成DNA法上述三种目的基因提取的方法有何优缺点？操作简便广泛使用工作量大，盲目，分离出来的有时并非一个基因步骤一：目的基因的获取优点缺点鸟枪法反转录法根据已知氨基酸合成DNA法上述三种目的基因提取的方法有何优缺点？操作简便广泛使用专一性强工作量大，盲目，分离出来的有时并非一个基因步骤一：目的基因的获取优点缺点鸟枪法反转录法根据已知氨基酸合成DNA法上述三种目的基因提取的方法有何优缺点？操作简便广泛使用专一性强工作量大，盲目，分离出来的有时并非一个基因操作过程麻烦，mRNA很不稳定，要求的技术条件较高步骤一：目的基因的获取优点缺点鸟枪法反转录法根据已知氨基酸合成DNA法上述三种目的基因提取的方法有何优缺点？操作简便广泛使用专一性强专一性最强工作量大，盲目，分离出来的有时并非一个基因操作过程麻烦，mRNA很不稳定，要求的技术条件较高步骤一：目的基因的获取优点缺点鸟枪法反转录法根据已知氨基酸合成DNA法上述三种目的基因提取的方法有何优缺点？操作简便广泛使用专一性强专一性最强工作量大，盲目，分离出来的有时并非一个基因操作过程麻烦，mRNA很不稳定，要求的技术条件较高仅限于合成核苷酸对较少的简单基因步骤一：目的基因的获取目的基因的提取方法3.从基因文库中获取目的基因：步骤一：目的基因的获取目的基因的提取方法3.从基因文库中获取目的基因：步骤一：目的基因的获取目的基因的提取方法3.从基因文库中获取目的基因：将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，称为基因文库(genelibrary)步骤一：目的基因的获取目的基因的提取方法3.从基因文库中获取目的基因：将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，称为基因文库(genelibrary)步骤一：目的基因的获取目的基因的提取方法3.从基因文库中获取目的基因：将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，称为基因文库(genelibrary)基因文库中包含了一种生物所有的基因，这种基因文库叫做基因组文库。步骤一：目的基因的获取目的基因的提取方法3.从基因文库中获取目的基因：步骤一：目的基因的获取目的基因的提取方法3.从基因文库中获取目的基因：基因文库中包含了一种生物的一部分基因，这种基因文库叫做部分基因文库。（如：cDNA文库）mRNAcDNA反转录酶基因重组cDNA文库(cDNAlibrary)cDNA(complementaryDNA，互补DNA)：是由生物的某一特定器官或特定发育时期细胞内的mRNA经体外反转录后形成的互补DNA片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群就叫这种生物的cDNA文库哪些新技术能大大简化基因工程的操作技术？哪些新技术能大大简化基因工程的操作技术？①DNA序列自动测序仪：②PCR技术：哪些新技术能大大简化基因工程的操作技术？①DNA序列自动测序仪：对提取出来的基因进行核苷酸序列分析。②PCR技术：哪些新技术能大大简化基因工程的操作技术？①DNA序列自动测序仪：对提取出来的基因进行核苷酸序列分析。②PCR技术：使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增。利用PCR扩增目的基因1.过程利用PCR扩增目的基因1.过程高温变性解旋为单链利用PCR扩增目的基因1.过程高温变性解旋为单链低温退火引物与单链互补结合利用PCR扩增目的基因1.过程高温变性解旋为单链低温退火引物与单链互补结合适温延伸在Taq酶的作用下合成与模板互补的DNA双链利用PCR扩增目的基因1.过程高温变性解旋为单链低温退火引物与单链互补结合适温延伸在Taq酶的作用下合成与模板互补的DNA双链重复循环利用PCR技术扩增目的基因①概念：聚合酶链式反应体外特定DNA片段PCR全称为_______________，是一项在生物____复制___________的核酸合成技术利用PCR技术扩增目的基因①概念：聚合酶链式反应体外特定DNA片段PCR全称为_______________，是一项在生物____复制___________的核酸合成技术②前提条件一段已知目的基因的核苷酸序列利用PCR技术扩增目的基因①概念：聚合酶链式反应体外特定DNA片段PCR全称为_______________，是一项在生物____复制___________的核酸合成技术②前提条件一段已知目的基因的核苷酸序列一对互补的引物利用PCR技术扩增目的基因①概念：聚合酶链式反应体外特定DNA片段PCR全称为_______________，是一项在生物____复制___________的核酸合成技术②前提条件一段已知目的基因的核苷酸序列四种脱氧核苷酸一对互补的引物DNA聚合酶（Taq酶）（热稳定）利用PCR技术扩增目的基因①概念：聚合酶链式反应体外特定DNA片段PCR全称为_______________，是一项在生物____复制___________的核酸合成技术②前提条件一段已知目的基因的核苷酸序列四种脱氧核苷酸一对互补的引物DNA聚合酶（Taq酶）（热稳定）利用PCR技术扩增目的基因①概念：聚合酶链式反应体外特定DNA片段PCR全称为_______________，是一项在生物____复制___________的核酸合成技术②前提条件不同温度条件及能量ATP④方式：以_______方式扩增，即____（n为扩增循环的次数）一段已知目的基因的核苷酸序列四种脱氧核苷酸一对互补的引物DNA聚合酶（Taq酶）（热稳定）利用PCR技术扩增目的基因①概念：聚合酶链式反应体外特定DNA片段PCR全称为_______________，是一项在生物____复制___________的核酸合成技术②前提条件不同温度条件及能量ATP④方式：以_______方式扩增，即____（n为扩增循环的次数）一段已知目的基因的核苷酸序列四种脱氧核苷酸一对互补的引物DNA聚合酶（Taq酶）（热稳定）指数2n利用PCR技术扩增目的基因①概念：聚合酶链式反应体外特定DNA片段PCR全称为_______________，是一项在生物____复制___________的核酸合成技术②前提条件不同温度条件及能量ATP④方式：以_______方式扩增，即____（n为扩增循环的次数）一段已知目的基因的核苷酸序列四种脱氧核苷酸一对互补的引物DNA聚合酶（Taq酶）（热稳定）指数2n⑤结果：使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增利用PCR技术扩增目的基因①概念：聚合酶链式反应体外特定DNA片段PCR全称为_______________，是一项在生物____复制___________的核酸合成技术②前提条件不同温度条件及能量ATP利用PCR技术扩增目的基因思考：PCR技术与DNA复制有什么区别和联系？PCR技术与DNA复制的异同PCR技术DNA复制过程DNA变性（90～95℃）→退火（复性55~60℃）→子链延伸（70~75℃）→重复循环DNA复制起始，RNA引物形成→DNA片段生成→RNA引物水解→完整的DNA分子形成相同点原则条件不同点解旋方式场所引物酶结果PCR技术与DNA复制的异同PCR技术DNA复制过程DNA变性（90～95℃）→退火（复性55~60℃）→子链延伸（70~75℃）→重复循环DNA复制起始，RNA引物形成→DNA片段生成→RNA引物水解→完整的DNA分子形成相同点原则条件不同点解旋方式场所引物酶结果遵循碱基互补配对原则PCR技术与DNA复制的异同PCR技术DNA复制过程DNA变性（90～95℃）→退火（复性55~60℃）→子链延伸（70~75℃）→重复循环DNA复制起始，RNA引物形成→DNA片段生成→RNA引物水解→完整的DNA分子形成相同点原则条件不同点解旋方式场所引物酶结果遵循碱基互补配对原则模板、原料、能量、酶、引物、温度等PCR技术与DNA复制的异同PCR技术DNA复制过程DNA变性（90～95℃）→退火（复性55~60℃）→子链延伸（70~75℃）→重复循环DNA复制起始，RNA引物形成→DNA片段生成→RNA引物水解→完整的DNA分子形成相同点原则条件不同点解旋方式场所引物酶结果遵循碱基互补配对原则模板、原料、能量、酶、引物、温度等氢键在高温下断裂，双链全部解开PCR技术与DNA复制的异同PCR技术DNA复制过程DNA变性（90～95℃）→退火（复性55~60℃）→子链延伸（70~75℃）→重复循环DNA复制起始，RNA引物形成→DNA片段生成→RNA引物水解→完整的DNA分子形成相同点原则条件不同点解旋方式场所引物酶结果遵循碱基互补配对原则模板、原料、能量、酶、引物、温度等氢键在高温下断裂，双链全部解开解旋酶催化氢键逐步断裂，边解旋边复制PCR技术与DNA复制的异同PCR技术DNA复制过程DNA变性（90～95℃）→退火（复性55~60℃）→子链延伸（70~75℃）→重复循环DNA复制起始，RNA引物形成→DNA片段生成→RNA引物水解→完整的DNA分子形成相同点原则条件不同点解旋方式场所引物酶结果遵循碱基互补配对原则模板、原料、能量、酶、引物、温度等氢键在高温下断裂，双链全部解开解旋酶催化氢键逐步断裂，边解旋边复制体外PCR技术与DNA复制的异同PCR技术DNA复制过程DNA变性（90～95℃）→退火（复性55~60℃）→子链延伸（70~75℃）→重复循环DNA复制起始，RNA引物形成→DNA片段生成→RNA引物水解→完整的DNA分子形成相同点原则条件不同点解旋方式场所引物酶结果遵循碱基互补配对原则模板、原料、能量、酶、引物、温度等氢键在高温下断裂，双链全部解开解旋酶催化氢键逐步断裂，边解旋边复制体外主要在细胞核中PCR技术与DNA复制的异同PCR技术DNA复制过程DNA变性（90～95℃）→退火（复性55~60℃）→子链延伸（70~75℃）→重复循环DNA复制起始，RNA引物形成→DNA片段生成→RNA引物水解→完整的DNA分子形成相同点原则条件不同点解旋方式场所引物酶结果遵循碱基互补配对原则模板、原料、能量、酶、引物、温度等氢键在高温下断裂，双链全部解开解旋酶催化氢键逐步断裂，边解旋边复制体外主要在细胞核中DNAPCR技术与DNA复制的异同PCR技术DNA复制过程DNA变性（90～95℃）→退火（复性55~60℃）→子链延伸（70~75℃）→重复循环DNA复制起始，RNA引物形成→DNA片段生成→RNA引物水解→完整的DNA分子形成相同点原则条件不同点解旋方式场所引物酶结果遵循碱基互补配对原则模板、原料、能量、酶、引物、温度等氢键在高温下断裂，双链全部解开解旋酶催化氢键逐步断裂，边解旋边复制体外主要在细胞核中DNARNAPCR技术与DNA复制的异同PCR技术DNA复制过程DNA变性（90～95℃）→退火（复性55~60℃）→子链延伸（70~75℃）→重复循环DNA复制起始，RNA引物形成→DNA片段生成→RNA引物水解→完整的DNA分子形成相同点原则条件不同点解旋方式场所引物酶结果遵循碱基互补配对原则模板、原料、能量、酶、引物、温度等氢键在高温下断裂，双链全部解开解旋酶催化氢键逐步断裂，边解旋边复制体外主要在细胞核中DNARNA热稳定DNA聚合酶（Taq酶）PCR技术与DNA复制的异同PCR技术DNA复制过程DNA变性（90～95℃）→退火（复性55~60℃）→子链延伸（70~75℃）→重复循环DNA复制起始，RNA引物形成→DNA片段生成→RNA引物水解→完整的DNA分子形成相同点原则条件不同点解旋方式场所引物酶结果遵循碱基互补配对原则模板、原料、能量、酶、引物、温度等氢键在高温下断裂，双链全部解开解旋酶催化氢键逐步断裂，边解旋边复制体外主要在细胞核中DNARNA热稳定DNA聚合酶（Taq酶）解旋酶、DNA聚合酶、DNA连接酶等PCR技术与DNA复制的异同PCR技术DNA复制过程DNA变性（90～95℃）→退火（复性55~60℃）→子链延伸（70~75℃）→重复循环DNA复制起始，RNA引物形成→DNA片段生成→RNA引物水解→完整的DNA分子形成相同点原则条件不同点解旋方式场所引物酶结果遵循碱基互补配对原则模板、原料、能量、酶、引物、温度等氢键在高温下断裂，双链全部解开解旋酶催化氢键逐步断裂，边解旋边复制体外主要在细胞核中DNARNA热稳定DNA聚合酶（Taq酶）解旋酶、DNA聚合酶、DNA连接酶等在短时间内形成大量的DNA片段PCR技术与DNA复制的异同PCR技术DNA复制过程DNA变性（90～95℃）→退火（复性55~60℃）→子链延伸（70~75℃）→重复循环DNA复制起始，RNA引物形成→DNA片段生成→RNA引物水解→完整的DNA分子形成相同点原则条件不同点解旋方式场所引物酶结果遵循碱基互补配对原则模板、原料、能量、酶、引物、温度等氢键在高温下断裂，双链全部解开解旋酶催化氢键逐步断裂，边解旋边复制体外主要在细胞核中DNARNA热稳定DNA聚合酶（Taq酶）解旋酶、DNA聚合酶、DNA连接酶等在短时间内形成大量的DNA片段形成完整的DNA分子步骤二：基因表达载体的构建步骤二：基因表达载体的构建①用一定的限制酶切割质粒，使其出现一个切口，露出黏性末端。步骤二：基因表达载体的构建①用一定的限制酶切割质粒，使其出现一个切口，露出黏性末端。②用同一种限制酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端。步骤二：基因表达载体的构建①用一定的限制酶切割质粒，使其出现一个切口，露出黏性末端。②用同一种限制酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端。③将切下的目的基因片段插入质粒的切口处，再加入适量DNA连接酶，形成了一个重组DNA分子（重组质粒）步骤二：基因表达载体的构建①用一定的限制酶切割质粒，使其出现一个切口，露出黏性末端。②用同一种限制酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端。③将切下的目的基因片段插入质粒的切口处，再加入适量DNA连接酶，形成了一个重组DNA分子（重组质粒）目的基因与运载体的结合过程，实际上是不同来源的基因重组的过程。思考：作为基因工程表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？为什么？思考：作为基因工程表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？为什么？复制原点目的基因启动子终止子标记基因等思考：作为基因工程表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？为什么？1.基因表达载体的组成复制原点目的基因启动子终止子标记基因等思考：作为基因工程表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？为什么？1.基因表达载体的组成复制原点目的基因启动子终止子标记基因等2.构建过程想一想：其中任意两个DNA片段连接形成的的产物有几种？思考：作为基因工程表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？为什么？1.基因表达载体的组成复制原点目的基因启动子终止子标记基因等2.构建过程思考：作为基因工程表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？为什么？1.基因表达载体的组成复制原点目的基因启动子终止子标记基因等2.构建过程注意①载体与表达载体的区别：二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构②用到的工具酶：既用到限制酶切割载体，又用到DNA连接酶将目的基因和载体拼接，两种酶作用的化学键都是磷酸二酯键③启动子、终止子对于目的基因表达必不可少④目的基因不能单独进入受体细胞，必需以表达载体的方式携带进去。步骤三：目的基因导入受体细胞步骤三：目的基因导入受体细胞常用的受体细胞：步骤三：目的基因导入受体细胞常用的受体细胞：有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。步骤三：目的基因导入受体细胞常用的受体细胞：有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。将目的基因导入受体细胞的原理步骤三：目的基因导入受体细胞常用的受体细胞：有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。将目的基因导入受体细胞的原理借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。步骤三：目的基因导入受体细胞①直接导入法有电击、显微注射、直接吸收、基因枪等方法。⑴电击法：借助电击仪高压脉冲把目的基因打入宿主细胞。⑵显微注射法：利用微量注射器在显微镜下直接把目的基因注入宿主细胞。⑶直接吸收法：把目的基因和宿主细胞混在一起，让其吸收。⑷基因枪法：在金属微粒上涂一层目的基因，然后发射到宿主细胞中。步骤三：目的基因导入受体细胞②间接导入法常用载体是质粒、λ噬菌体、科斯质粒。⑴质粒是细菌染色体DNA以外的环状双链DNA分子，它能自我复制，也可整合到细胞染色体DNA中与其一起表达。质粒通常还含有标记基因，这可以从细胞的表型特征来识别。⑵λ噬菌体是一种细菌病毒，其环状双链DNA可以作为目的基因的载体。⑶科斯质粒是一种杂种质粒，含有质粒和λ噬菌体的部分顺序，很适合用作真核生物基因的载体。步骤三：目的基因导入受体细胞1.将目的基因导入植物细胞①农杆菌转化法：步骤三：目的基因导入受体细胞1.将目的基因导入植物细胞①农杆菌转化法：步骤三：目的基因导入受体细胞1.将目的基因导入植物细胞①农杆菌转化法：表达载体导入农杆菌，再让农杆菌感染植物细胞步骤三：目的基因导入受体细胞1.将目的基因导入植物细胞②基因枪法步骤三：目的基因导入受体细胞1.将目的基因导入植物细胞②基因枪法③花粉管通道法步骤三：目的基因导入受体细胞1.将目的基因导入植物细胞②基因枪法③花粉管通道法步骤三：目的基因导入受体细胞2.将目的基因导入动物细胞步骤三：目的基因导入受体细胞2.将目的基因导入动物细胞步骤三：目的基因导入受体细胞大肠杆菌细胞最常用的转化方法是:首先用Ca2+处理细胞，以增大细菌细胞壁的通透性，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，这种细胞称为感受态细胞.第二步是将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合,在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程.第三步目的基因在受体细胞内，随其繁殖而复制，由于细菌繁殖的速度非常快，在很短的时间内就能获得大量的目的基因。步骤三：目的基因导入受体细胞大肠杆菌细胞最常用的转化方法是:步骤三：目的基因导入受体细胞大肠杆菌细胞最常用的转化方法是:①将细菌用CaCl2处理，以增大细菌细胞壁的通透性。步骤三：目的基因导入受体细胞大肠杆菌细胞最常用的转化方法是:①将细菌用CaCl2处理，以增大细菌细胞壁的通透性。②使含有目的基因的重组质粒进入受体细胞。步骤三：目的基因导入受体细胞大肠杆菌细胞最常用的转化方法是:①将细菌用CaCl2处理，以增大细菌细胞壁的通透性。②使含有目的基因的重组质粒进入受体细胞。③目的基因在受体细胞内，随其繁殖而复制，由于细菌繁殖的速度非常快，在很短的时间内就能获得大量的目的基因。步骤三：目的基因导入受体细胞受体细胞摄入DNA分子后就说明目的基因完成了表达吗？步骤三：目的基因导入受体细胞受体细胞摄入DNA分子后就说明目的基因完成了表达吗？不能，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达。步骤三：目的基因导入受体细胞受体细胞摄入DNA分子后就说明目的基因完成了表达吗？不能，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达。步骤三：目的基因导入受体细胞受体细胞摄入DNA分子后就说明目的基因完成了表达吗？不能，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达。若不能表达，要对抗虫基因再进行修饰。步骤四：目的基因的检测与鉴定步骤四：目的基因的检测与鉴定氨苄青霉素抗性基因四环素抗性基因步骤四：目的基因的检测与鉴定氨苄青霉素抗性基因四环素抗性基因前三步的处理十分繁锁，为保证目的基因得到有效利用，通常用大量的受体细胞来接受不多的目的基因。这样，处理的受体细胞中真正摄入了目的基因的很少，必须将它从中检测出来。无表达产物无表达产物有表达产物无表达产物细菌的检测，将每个受体细胞单独培养形成菌落，检测菌落中是否有目的基因的表达产物。淘汰无表达产物的菌落，保留有表达产物的进一步培养、研究。多细胞生物的检测，将每个受体细胞单独培养并诱导发育成完整个体，检测这些个体是否摄入目的基因，摄入的基因是否表达（是否表现出相应的性状）。淘汰无变化的个体，保留有相应变化的个体进一步培养、研究。例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。步骤四：目的基因的检测与鉴定1.分子水平的检测：分子杂交技术步骤四：目的基因的检测与鉴定①检测是否插入目的基因1.分子水平的检测：分子杂交技术步骤四：目的基因的检测与鉴定①检测是否插入目的基因②检测是否转录出mRNA1.分子水平的检测：分子杂交技术步骤四：目的基因的检测与鉴定①检测是否插入目的基因②检测是否转录出mRNADNA分子杂交技术1.分子水平的检测：分子杂交技术步骤四：目的基因的检测与鉴定①检测是否插入目的基因②检测是否转录出mRNA③检测目的基因是否翻译成蛋白质DNA分子杂交技术1.分子水平的检测：分子杂交技术步骤四：目的基因的检测与鉴定①检测是否插入目的基因②检测是否转录出mRNA③检测目的基因是否翻译成蛋白质DNA分子杂交技术1.分子水平的检测：分子杂交技术步骤四：目的基因的检测与鉴定①检测是否插入目的基因②检测是否转录出mRNA③检测目的基因是否翻译成蛋白质DNA分子杂交技术1.分子水平的检测：分子杂交技术抗体与蛋白质进行抗原－