扩增活化的自体淋巴细胞技术

EAAL扩增活化的自体淋巴细胞治疗(zhìliáo)肿瘤技术简介

IntroductionofEAALTherapy第一页，共七十三页。整理课件肿瘤(zhǒngliú)免疫治疗的机制MechanismsofCancerImmunotherapy通过调动机体自身的免疫系统，达到控制肿瘤生长，杀伤肿瘤细胞的目的。前提：肿瘤细胞有别于正常细胞肿瘤抗原肿瘤特异性T细胞免疫应答肿瘤特异性抗体(kàngtǐ)免疫应答天然免疫对肿瘤细胞的杀伤作用第二页，共七十三页。整理课件如何达到有效(yǒuxiào)的免疫治疗效果有足够可以识别肿瘤抗原的杀伤性T细胞机体的免疫环境有利于上述细胞发挥抗肿瘤功能Th1/Th2Treg这些(zhèxiē)T细胞可以到达肿瘤组织局部T细胞归巢在肿瘤局部，这些T细胞可以发挥有效的杀伤功能肿瘤基质及肿瘤组织微环境第三页，共七十三页。整理课件肿瘤(zhǒngliú)疫苗过继(guòjì)细胞免疫治疗肿瘤(zhǒngliú)的免疫治疗方法

ApprochesofCancerImmunotherapy第四页，共七十三页。整理课件细胞(xìbāo)免疫治疗

CellularImmunotherapy包括肿瘤在内的多种慢性病的最重要的生物治疗方法(fāngfǎ)之一肿瘤的细胞免疫治疗：非特异性※LAK细胞※CIK细胞※EAAL细胞特异性※Provenge,树突状细胞

※肿瘤特异性T细胞

-其它慢性病的细胞免疫治疗：※慢性病毒感染性疾病乙肝、丙肝艾滋病※慢性寄生虫感染(gǎnrǎn)※糖尿病※多发性硬化症※系统性红斑狼疮第五页，共七十三页。整理课件扩增活化(huóhuà)的自体淋巴细胞（EAAL）的定义自体免疫细胞治疗技术CD3+T淋巴细胞为主（95.91%±0.24%），含少量NK细胞体外扩增活化肿瘤杀伤功能改进的LAK和CIK治疗：细胞培养效率和肿瘤杀伤能力显著增强EAAL是ExpandedActivatedAutologousLymphocytes（扩增活化的自体淋巴细胞）的简称。其定义是通过采取机体自身20-100ml静脉血，分离获得0.8-3x107外周血单个核细胞，经过体外无血清培养基培养，获得以CD3细胞为主的，包含(bāohán)CD8+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞、CD3+CD56+NKT细胞、NK细胞，细胞数量在3x109以上的活化的混合淋巴细胞，这些细胞在体外具有明确肿瘤杀伤功能。

第六页，共七十三页。整理课件EAAL技术(jìshù)特点使用无血清淋巴细胞培养基进行细胞培养，保证没有潜在(qiánzài)的病源微生物感染不需使用(shǐyòng)单采机，对患者免疫系统没有破坏作用细胞扩增的高效性和高活性:扩增效率约为2001000倍独特的细胞培养工艺，少量外周血即可满足多次细胞回输的要求可与化疗联合，完全满足多个化疗疗程对细胞治疗次数和细胞治疗数目的要求，从而产生较好的协同治疗肿瘤效果。可进行多次、高频治疗，达到最好的治疗效果第七页，共七十三页。整理课件EAAL技术的临床-实验室操作(cāozuò)流程外周血20-100ml扩增及活化(huóhuà)回输100ml/次，1-8次培养(péiyǎng)及扩增14-35天收集诱导的杀伤细胞第八页，共七十三页。整理课件EAAL的作用机制(jīzhì)研究第九页，共七十三页。整理课件自体肿瘤(zhǒngliú)细胞的体外杀伤效应（IFN-γ）第十页，共七十三页。整理课件培养后的淋巴细胞与顺铂以不同序贯方式联合(liánhé)对PLA-801D细胞的抑制率Groupinhibitedrates(%)QDDPEAALDDP+EAAL淋巴细胞作用前10h顺铂淋巴细胞作用前8h顺铂淋巴细胞作用前4h顺铂淋巴细胞作用同时顺铂淋巴细胞作用后4h顺铂淋巴细胞作用后8h顺铂淋巴细胞作用后10h顺铂46±1.741.7±3.035.8±1.327.1±2.418.5±1.316.7±2.214.0±0.916.6±0.416.6±0.416.6±0.416.6±0.416.6±0.416.6±0.416.6±0.488.1±0.64*88.9±0.16*96.7±1.99*55.8±0.33*73.6±0.67*66.2±0.12*53.2±0.14*1.6021.7322.0801.4242.2972.1691.885(注：联合作用(zuòyòng)组、单顺铂组和单淋巴细胞作用(zuòyòng)组抑制率进行单因素方差分析,P<0.01*)

EAL联合化疗(huàliáo)的体外杀伤效果第十一页，共七十三页。整理课件EAL细胞的肿瘤(zhǒngliú)抗原特异性分析Donor

A2-01A2-02A2-03CancerAntigenNY-ESO-1BC(%)0.170.860.32AC(%)1.122.572.3Multiple6.592.997.19MAGE-1BC(%)0.390.070.1AC(%)0.251.150.51Multiple0.6416.435.10MAGE-3BC(%)0.450.060.07AC(%)0.280.360.36Multiple0.626.005.14MAGE-10BC(%)0.520.150.23AC(%)0.250.220.48Multiple0.481.472.09P53BC(%)0.631.130.78AC(%)5.2712.248.7Multiple8.3710.8311.15HIVBC(%)0.590.20.22AC(%)0.240.250.31Multiple0.411.251.41FLUBC(%)1.060.60.66AC(%)4.4411.7610.01Multiple4.1919.6015.17第十二页，共七十三页。整理课件EAAL在裸鼠体内(tǐnèi)

对HepG2形成肿瘤的抑制作用裸鼠注射(zhùshè)EAAL细胞的剂量分组组别注射渠道注射剂量(细胞数/只)注射液量(ml)每组裸鼠数量(个体号)每组肿瘤平均体积（mm3）每组肿瘤平均重量（g）G1阴性对照组微静脉00.310(1M01–1M10)1444.690.96G2低剂量组微静脉1.7×1050.310(2M11–2M20)1236.450.82G3中剂量组微静脉5×1050.310(3M21–

3M30)979.910.73G4高剂量组微静脉15×1050.310(4M31–

4M40)941.390.72G5阳性对照组腹腔2mg/kg10ml/kg10(4M41–

4M50)847.920.64p<0.05第十三页，共七十三页。整理课件G1G2G3G4G5第十四页，共七十三页。整理课件EAAL对患者体内免疫环境的改变(gǎibiàn)作用CD8+杀伤性T淋巴细胞比例上升NK细胞比例上升CD4/CD8T淋巴细胞比值下降分泌的IFN-γ细胞比例上升IFN-γ的分泌量上升经EAAL治疗(zhìliáo)后，患者体内杀伤性淋巴细胞数量和比例显著增加第十五页，共七十三页。整理课件EAAL为CD8+T细胞(xìbāo)为主细胞表面分子培养前的百分比（均值）培养后的百分比（均值）CD365.083.7CD433.210.6CD822.863.0CD4/CD81.90.2CD3+CD56+5.411.7CD3-CD16+12.611.8CD4+CD25+3.31.7第十六页，共七十三页。整理课件IL-2IFN-gIL-4IL-5TNF-ab-actin015(mg/ml)PHAABFigure5.Cytokinegeneexpressionbyexvivo-expandedTcells.ExpandedCyTcellswerere-stimulatedwithPHA(1and5mg/ml)for4hrandtotalRNAwasextractedfromthecellsandthegeneexpressionlevelsofIL-2,IFN-g,IL-4,IL-5,andTNF-awereanalyzedbyRT-PCR(A).Bandareaswereanalyzedusinganimageanalysissystems(Multi-Analyst,Bio-Rad,CA),anddatawerepresentedasratiosvs.b-actin,whichservedasaninternalcontrol(B).Representativeimagefromsample#4wasshown.EAAL细胞(xìbāo)分泌Th1类细胞因子第十七页，共七十三页。整理课件第十八页，共七十三页。整理课件PREPOST第十九页，共七十三页。整理课件第二十页，共七十三页。整理课件第二十一页，共七十三页。整理课件ThesubsetsofIFN-gamma+lymphocytes第二十二页，共七十三页。整理课件第二十三页，共七十三页。整理课件ThechangeoftheratioofIFN-gamma+cells第二十四页，共七十三页。整理课件EAAL的疗效(liáoxiào)单独(dāndú)使用手术后预防复发稳定肿瘤改善生活质量与化疗/靶向治疗联合协同作用改善化疗和靶向治疗副作用延长患者的总生存期第二十五页，共七十三页。整理课件術後复

发

期間免疫群（76例）（＊）対照群（74例）ｐ値（＊＊）5年以内复发45(59%)57(77%)0.012年以内复发25(33%)40(54%)0.005（LANCET2000;356;802-07）EAAL的疗效(liáoxiào)：降低肝癌手术后的复发率：随机对照临床实验结果第二十六页，共七十三页。整理课件一例晚期肝癌患者(huànzhě)实现6年带瘤生存

Hepatology(28),5,1436-7,1998.患者：62岁，男性，丙肝，肝癌ChildB级，约7厘米大小。已出现右门静脉肿瘤栓塞和右肾转移（T4N0M1,ⅣB期）该肿瘤已无法切除。该患者因此接受了质子照射治疗，治疗后肿瘤出现坏死并且体积缩小至原来的50%。EAAL治疗：放射治疗之后患者每1－2月应用一次过继性免疫治疗平均每次回输细胞1.4±0.5×10（10）绝大多数为T细胞标记阳性（95%±2%CD3+，90％±2%CD3+/HLA-DR+，61%±9%CD8+，39%±8%CD4+）且对Daudi细胞具有细胞毒活性的细胞。细胞回输在6年内共为53次完成（平均5-6周一次回输）累计回输细胞总数为7.3×10（11）结果：获得了6年无复发生存，整个(zhěnggè)过程没有出现治疗相关的不良反应。在长期观察中，该患者健康状况良好，未出现肝癌的复发，且肝功能好转。第二十七页，共七十三页。整理课件左眼睑细胞(xìbāo)鳞癌和结肠腺癌双原发

（JpnJClinOncol2000:30(6)267-271）患者：同时患有左眼睑细胞鳞癌和结肠腺癌，两者都已出现淋巴结转移。患者接受了左眼剜除术及左颈部改良根治性淋巴结清扫术和随后的跨结肠切除术和局部淋巴结清扫。治疗：EAAL过继性免疫治疗作为单一术后辅助治疗，而未接受可引起免疫抑制的化疗。共进行了150次回输（平均2周一次回输）平均每次回输细胞数为1.38×10（10）。结果(jiēguǒ)：至文章发表为止，术后6年内尚未发现复发和其它转移。第二十八页，共七十三页。整理课件EAAL治疗(zhìliáo)神经胶质母细胞瘤的效果Case

AgeSex

InitialtreatmentOpe.

Rad.

Chemo.TTP＊Follow＊＊

1.37FTotal

60Gy

ACNU

10ｙ10ｍAlive

2.17FTotal

60Gy

ACNU

10ｙ2ｍAlive

3.49MTotal

60Gy

ACNU

24m

3ｙ9ｍDead

4.56MTotal

60Gy

ACNU

8m

4ｙ0ｍDead

5.40MTotal

60Gy

ACNU

2ｙ6ｍAlive＊TTP再発までの期間。＊＊2003年12月現在。＊5例中5例が3年以上の生存(shēngcún)。2例が10年以上生存。

2006年2月現在、5例中3例が5年以上の生存であることから論文投稿作業中。第二十九页，共七十三页。整理课件病例(bìnglì)1.非小细胞肺癌脑转移患者男性，54岁，非小细胞肺癌，并伴有脾、脑转移，TNMIV期治疗：EAAL为单一治疗，六周内共五次回输总回输细胞数为1.66×10(10)。结果：第五次输注后10天行MRI检查，与治疗前对比：右额叶强化结节此次扫描未见异常强化，仅表现为斑片状长T1长T2信号，范围较前缩小，余脑实质结构对称，灰白质界限清晰，未见异常强化灶，中线结构居中，脑室(nǎoshì)系统未见异常，小脑及脑干未见异常，头颅诸骨未见骨质破坏灶。提示右额叶转移瘤较EAAL细胞输注前好转。脾上极实性占位较前变化不大。胸部CT肺中叶下叶病灶变化不大。第三十页，共七十三页。整理课件病例(bìnglì)2.髓母细胞瘤术后和放化疗后复发患者：女，21岁，小脑蚓部髓母细胞瘤手术后二年（2005年3月）脊髓复发，进行单纯化疗3个疗程，肿瘤消失。继续口服化疗药，连续7个疗程。2006-2-28核磁共振发现，脑脊髓广泛种植复发治疗：化疗与EAAL疗法结合治疗方案。累积回输共14次，回输细胞总数达到6.77×10（10）。结果：2个疗程后，2006-6-21核磁共振发现转移灶大部分消失，明显好于对单纯化疗的预期。患者化疗后白细胞，血色素低。EAAL细胞治疗缩短了恢复时间，起到良好的支持治疗作用。患者在化疗期间(qījiān)无发热和感染，一直坚持爬山锻炼，也没有出现过第一次化疗时的贫血导致的心慌、气短等症状；患者精神状态良好，无食欲下降、体重减轻、睡眠不良、精神萎靡等化疗不良反应。

第三十一页，共七十三页。整理课件病例(bìnglì)3.贲门癌肺转移伴腹水患者：女，贲门癌肺转移伴腹水，化疗无效治疗：两周间隔，两次输注EAAL细胞，腹腔及静脉各半，共计细胞总数为1.13×10（10），回输前进行腹腔低剂量化疗（以前同样剂量化疗未显示治疗效果）。结果：腹部CT检查，与回输前2005-11-15腹部CT结果相比较：可见肝S4结节低密度结节较前缩小（20mm×13mm→18×12mm）肝右叶低密度结节较前缩小(16mm×24mm→14mm×22mm)，脏壁层腹膜表面及肠管表面多发结节较前缩小（20mmX22mm→17mmX15mm）双侧附件区及盆腔内腹膜多发异常强化结节及肿块(zhǒnɡkuài)亦较前缩小，现最大75mm×60mm，原为95mm×60mm。腹水较前减少。第三十二页，共七十三页。整理课件病例4：复发的乳腺癌

治疗(zhìliáo)后(5次回输),肿瘤标志物水平下降Patient:0012Infusiondate:12/29/051/5/061/12/061/19/061/26/06第三十三页，共七十三页。整理课件病例(bìnglì)5：颅内Ｂ淋巴细胞瘤患者：男，颅内Ｂ淋巴细胞瘤手术，未能完全切除治疗：10倍于常规剂量化疗，第一次化疗后副作用强，无法正常生活每次化疗后在化疗间歇回输两次EAAL结果：手术未能切除的肿瘤消失患者未再产生化疗的副作用，实现正常生活；无脱发、恶心、呕吐；体重增加；每天坚持步行2小时(xiǎoshí)现每月一次EAAL细胞回输，迄今未复发第三十四页，共七十三页。整理课件病例６．持续进展(jìnzhǎn)复发贲门癌患者：男，贲门癌复发未转移，化疗效果(xiàoguǒ)差治疗：细胞治疗配合原来效果不好的化疗剂量，共10次回输效果：疼痛（需服止痛药）基本消失打嗝基本消失CA199从210降至78CA242从158降至85超声胃镜检查肿瘤明显缩小第三十五页，共七十三页。整理课件病例(bìnglì)７．持续进展胃癌患者：男，胃癌术后未发现肿瘤，但CA724进行性增高，未进行化疗治疗：每周回输EAAL，共四次患者同时吃中药，无其它治疗效果：回输两周前：CA724为256回输两次后：降至39.8回输三次后：降至22.5持续治疗3个疗程后肿瘤标志物正常(zhèngcháng)，迄今未复发第三十六页，共七十三页。整理课件病例(bìnglì)8：晚期贲门癌男性，48岁。贲门癌，皮革胃，腹膜(fùmó)后、纵隔、左锁骨上淋巴结转移；KPS100分2007.09：分子靶向治疗+EAAL1次/2周+化疗（TP）；2008.02：接近CR，2月后CR（包括皮革胃恢复正常）继续：分子靶向治疗+EAAL1次/2周；2008.07后改为：EAAL1次/2周2009.02：4次复查（包括胃镜、PET/CT）无病生存。第三十七页，共七十三页。整理课件病例(bìnglì)9.结肠癌肝转移患者：男，结肠癌肝转移三年，手术、化疗、介入、爱必妥目前治疗：爱必妥之前使用约半年，可控制疾病进展。但2009年4月发现多项肿瘤标志物升高。细胞治疗每5天一次回输，目前已进行4次回输结果：肿瘤标志物明显(míngxiǎn)下降CEA：由421降至289CA19.9：由486降至303CA72.4：由107降至86第三十八页，共七十三页。整理课件病例(bìnglì)10：胰腺癌广泛肝转移男性，38岁。胰腺癌广泛肝转移；KPS100分2008.08：TACE1次后，分子(fēnzǐ)靶向治疗+EAAL1次/2周+健择1次/周；2008.10：MR;肝转移灶减少、缩小2009.02：SD；肝转移进一步减少、缩小，第三十九页，共七十三页。整理课件中国人民解放军总医院（301）患者(huànzhě)总结

（2007-2009）患者一般情况EAAL治疗组晚期患者共51例，男性38例，女性13例，患者年龄31-78岁。其中晚期肺癌患者22例，晚期结直肠癌患者17例，晚期胰腺癌患者7例，原发性肝癌患者5例。治疗方案在最佳支持治疗或者化疗的基础(jīchǔ)上加用EAAL细胞治疗，本试验用的EAAL细胞由患者自身提供20－100ml外周血（根据患者本人淋巴细胞绝对值决定所需要的血量），体外培养使淋巴细胞数目扩增。每次回输含3－10X109细胞/100－200ml含1％白蛋白的生理盐水。细胞产品无细菌、霉菌、支原体、病毒等任何微生物和内毒素的污染。抽外周血后约２周左右开始回输，患者每周回输一次，或者配合化疗，化疗后48小时回输，至少回输6次。

病例随访密切随访观察接受EAAL治疗患者，记录其生存情况，随访终点为患者死亡。

第四十页，共七十三页。整理课件随访(suífǎnɡ)结果（至2009年10月4日）肿瘤类型病例数中位生存期（月）及说明1年生存率肺癌22到随访截止时间有6例死亡，中位生存期尚未到达。74.4%结直肠癌17到随访截止时间有4例死亡，中位生存期尚未到达。88.9%胰腺癌6到随访截止时间有2例死亡，中位生存期尚未到达。60.0%原发性肝癌5到随访截止时间有0例死亡，中位生存期尚未到达。80.0%第四十一页，共七十三页。整理课件EAAL技术研究(yánjiū)历程引进应用提高细胞培养过程细胞因子组合(zǔhé)无血清培养基电子化管理系统推广第四十二页，共七十三页。整理课件EAAL细胞治疗(zhìliáo)的建议方案和流程第四十三页，共七十三页。整理课件不良反应统计(tǒngjì)统计患者总数:107人回输总次数:518次按症状种类统计症状低热中热高热头晕腹胀腹泻呕吐数量按人次13322211按回输次数18622211比例按人次12.15%2.80%1.87%1.87%1.87%0.93%0.93%按回输次数3.47%1.16%0.39%0.39%0.39%0.19%0.19%按症状种类统计症状感冒样症状嗜睡寒战静脉炎头疼胸闷合计数量按人次22221134按回输次数33221245比例按人次1.87%1.87%1.87%1.87%0.93%0.93%31.78%按回输次数0.58%0.58%0.39%0.39%0.19%0.39%8.69%第四十四页，共七十三页。整理课件不良反应免疫治疗组(n=76)*细胞回输(n=370)发热36(47%)50(14%)头痛3(4%)5(1%)恶心3(4%)4(1%)头晕1(1%)1(0·3%)搔痒1(1%)1(0·3%)心动过速1(1%)1(0·3%)总体45(59%)62(17%)患者(huànzhě)出现的不良反应在45位患者中共出现了62次不良反应，所有均为1或2级并且具有自限性，未有患者出现肺或肾部的症状(zhèngzhuàng)、任何迹象的感染、肝功能衰退或自身免疫失调。TheLancet,356（9232）：802-807第四十五页，共七十三页。整理课件EAAL的禁忌症感染发热期的患者（肿瘤热除外(chúwài)）进行器官移植的患者有严重自身免疫病的患者T细胞相关淋巴瘤和白血病患者第四十六页，共七十三页。整理课件EAAL细胞(xìbāo)免疫治疗细胞类型：混合型T淋巴细胞，CD8+杀伤性T细胞为主应用：多次（2-6周一次）大量淋巴细胞（1010/次）效果：有效控制实体肿瘤复发和进展、延长患者无瘤生存期配合常规放化疗延长病人生存期，实现无瘤、带瘤生存提高放化疗耐受性提高病人生存质量机制：具有(jùyǒu)肿瘤抗原特异性可明显改善肿瘤病人机体免疫功能状态，增加TH1类细胞因子的表达其它：治疗效果与临床使用方案密切相关第四十七页，共七十三页。整理课件一、单独(dāndú)使用EAAL进行治疗适用人群预期效果使用方案手术后无其它治疗患者预防复发转移四个疗程回输。第一、二个疗程每周一次回输，共6-8次回输；第三个疗程每2周一次回输，共3-4次回输；第四个疗程每月一次回输，共3-4次回输；此后可每三个月至半年进行一个疗程，每周一次的回输所有其它治疗无效、肿瘤持续进展的患者改善生活质量稳定肿瘤1周一次回输，两个疗程后评价疗效。如患者要求，根据病情进展可持续进行1-2周一次的EAAL细胞回输化疗或放疗有效，但已停用，需维持治疗效果的患者长期维持肿瘤稳定患者无肿瘤：同手术后无其它治疗患者方案患者体内仍有肿瘤：第一、二个疗程每周一次回输，共6次回输；第三个疗程每2周一次回输，共3次回输；此后根据患者的要求，可长期进行每2周一次的细胞回输。第四十八页，共七十三页。整理课件二、联合(liánhé)化疗适用人群预期效果使用方案正在进行化疗的患者改善生活质量消除化疗副作用与化疗产生协同作用，杀伤肿瘤维持肿瘤稳定三周化疗方案：自第一天给与化疗计算，第三至七天回输EAAL细胞一次。如能在七天后再给一次，效果更好四周化疗方案：化疗第七天和第十七天各回输一次EAAL细胞1、8天化疗，三周方案：化疗第三天、第十天回输EAAL细胞第四十九页，共七十三页。整理课件三、联合(liánhé)靶向治疗适用人群预期效果使用方案正在进行抗体靶向治疗的患者通过ADCC作用与靶向治疗产生协同作用，杀伤肿瘤维持肿瘤稳定根据靶向药物的治疗方案而定，细胞回输通常在靶向药物给药后48小时第五十页，共七十三页。整理课件方

案

举

例星期一星期二星期三星期四星期五星期六星期日

2009-2-26回输细胞-4

2009-3-9化疗2009-3-10化疗

2009-3-16细胞回输-5

2009-3-27细胞回输-6

2009-4-6化疗2009-4-7化疗

2009-4-13细胞回输-7

2009-4-24细胞回输-8

2009-5-4化疗2009-5-5化疗

2009-5-11细胞回输-9

2009-5-22细胞回输-10

第五十一页，共七十三页。整理课件方

案

举

例治疗计划（预估）如在治疗过程中疾病进展，可随时加入化疗星期一星期二星期三星期四星期五星期六星期日

2009-2-26取血，回输和冻存

2009-3-12取血2009-3-13回输-1

2009-3-20回输-2

2009-3-26取血2009-3-27细胞回输-3

2009-4-3回输-4

2009-4-9取血2009-4-10回输-5

2009-4-17回输-6

2009-4-24回输-7

2009-4-30回输-8如不进行后续治疗，此日回输前取血，进行培养冻存，备化疗时使用；如进行后续治疗，每2-3周一次回输，一次取血，一次回输

第五十二页，共七十三页。整理课件取血要求(yāoqiú)（1）取血前必需进行的医院检验科检查项目（取血前一周内结果有效）：血常规:(检查后及取血前无其它治疗)决定病人是否可以取血决定取血量取血量=80ml/淋巴细胞绝对值例如(lìrú)：患者淋巴细胞绝对值为1.2，取血量=80ml/1.2=67ml，一般取70ml。感染筛查：乙肝、丙肝、爱滋、梅毒。（检查后及取血前未进行输血）爱滋病、梅毒患者不进行细胞培养血培养：极晚期患者，保证病人血液中没有细菌感染第五十三页，共七十三页。整理课件取血要求(yāoqiú)（2）取血量：3天内的血常规，要求白细胞在正常范围，淋巴细胞绝对值大于0.8。近3天内不能用升白药及化疗。满足取血条件(tiáojiàn)情况下，取血量取决淋巴细胞绝对值：淋巴细胞绝对值 <0.8不能取血

>0.8 可以取血取血量(ml)=80ml/淋巴细胞绝对值第五十四页，共七十三页。整理课件取血要求(yāoqiú)（3）病人清晨抽血前可以进食，但勿食用油腻食物抽血前不能输液抽血前病人没有任何感染(gǎnrǎn)及心肝肺肾功能异常手术病人：术前取血化疗病人：化疗前（需冻存步骤）或化疗后待血象正常后取血。放疗病人：放疗前或血象正常后取血每次抽血必须是在回输之前根据病人淋巴细胞计数确定外周血取血量，一般为20－100ml/每次培养或每次冻存第五十五页，共七十三页。整理课件回输要求(yāoqiú)（1）回输前病人状态：血象基本正常，回输之日无感染发烧病人没有进行(jìnxíng)免疫抑制药物治疗（本方法不能用于器官移植术后病人）第五十六页，共七十三页。整理课件回输要求(yāoqiú)（2）回输延期：实验室在回输前3-7天通知医院主管大夫回输日期医生需在回输前至少一天确认患者是否可以回输。否则细胞收获后，则无法再进行延期。一般(yībān)由于病人的原因，可延期1－2天，不影响治疗效果第五十七页，共七十三页。整理课件回输要求(yāoqiú)（3）回输步骤：细胞运输：常温4C（可置于化学冰保温的保温筒内运输），收获后12小时内回输细胞总体积约100ML-200ML回输速度开始约40-50滴/分钟，总共约60分钟回输过程中约5-8分钟轻轻挤捏转输袋上部混匀细胞 注意：不要碰到输液器针头尖部以免刺穿转输袋；避免产生气泡。回输前不建议做抗过敏预处理，医生(yīshēng)可根据患者实际情况給予5mg地塞米松，并做好过敏急救准备细胞回输后，继续输约50ML生理盐水冲洗细胞回输管第五十八页，共七十三页。整理课件操

作

流

程患者签署知情同意书，一式两份：医生、永泰免疫各一份保存制定细胞(xìbāo)治疗计划：永泰免疫配合医生回输次数是否配合其它治疗、配合的方案获得患者感染筛查和血常规结果（淋巴细胞绝对值）收费采血：取血量=80ml/淋巴细胞绝对值。永泰免疫提供采血管，护士采血细胞培养：永泰免疫永泰免疫以E-MAIL形式，在细胞培养开始约7-9天确认治疗方案中细胞回输的日期永泰免疫在每周四或星期五以E-MAIL形式和电话形式通知负责医生下周患者回输日期和时间回输：永泰免疫提供质量检测报告，负责医生签署接收报告和细胞，护士用输血器进行细胞回输第五十九页，共七十三页。整理课件目前使用EAAL进行(jìnxíng)肿瘤治疗的医院中国人民解放军总医院北京协和医院北京大学人民医院山东大学(shāndōnɡdàxué)齐鲁医院第六十页，共七十三页。整理课件谢谢(xièxie)！第六十一页，共七十三页。整理课件北京永泰免疫应用科技(kējì)有限公司

ImmunotechAppliedScienceLimited(IMAS)简介(jiǎnjiè)Introduction第六十二页，共七十三页。整理课件全球唯一经过(jīngguò)随机对照临床试验证实的、安全、有效的同类肿瘤免疫治疗产品

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Randomizedclinicaltrialprovedeffectiveandsafecancerimmunotherapeuticproductofthiskindintheworld.EAAL扩增活化(huóhuà)的自体淋巴细胞治疗肿瘤技术

ExpandedActivatedAutologouseLymphocytes:ACellularImmunotherapyPlatformforCancerChineseMedicine第三类医疗(yīliáo)技术第六十三页，共七十三页。整理课件2005年5月，EAAL基本技术(jìshù)引入中国!

2005年12月，EAAL技术(jìshù)正式在中国投入临床肿瘤治疗!

2007年10月，EAAL技术(jìshù)和试剂系统申请专利！2007年10月，EAAL技术获得北京协和医院伦理委员会批准，进行肝癌治疗！2007年12月，永泰免疫在北京建立中国第一个独立的GMP级别的细胞制备车间并投入使用！2008年7月，EAAL无血清培养基系统建立，永泰免疫进入国际细胞免疫治疗领先领域!

2009年2月，EAAL技术获得北京协和医院伦理委员会批准，进行恶性肿瘤治疗并签署合作协议，进行EAAL技术的临床应用研究!2009年2月，永泰免疫与山东大学齐鲁医院签署合作协议，进行EAAL技术的临床应用研究！2009年10月，永泰免疫与北京大学人民医院签署合作协议，进行EAAL技术的临床应用研究！2009年10月，永泰免疫在北京的第二个独立的GMP级别的细胞制备车间投入使用！2009年10月，永泰免疫投资的济南永泰细胞工程有限公司成立！2010年4月，隶属国药集团、由新型疫苗国家工程研究中心--北京微谷生物医药有限公司，正式签约控股永泰免疫，使永泰免疫进入快速市场发展阶段！永泰免疫发展历史TheHistoryofIMAS第六十四页，共七十三页。整理课件永泰免疫(miǎnyì)获得的荣誉TheHonorsofIMAS中国医药生物技术(jìshù)协会理事会员ChinaMedicalBiotechnologyAssociationMember国家“十一五”重大新药创制项目资助(zīzhù)单位National"EleventhFive"MajorDrugDiscoveryProjectFundedUnit中国生物技术外包服务联盟（ABO）成员ChinaBiotechnologyOutsourcingServicesAlliance(ABO)Member

国家卫生部第三类医疗技术规范起草单位MinistryofHealth3rdTypeofMedicalTechnical

SpecificationsDrafting

Unit第六十五页，共七十三页。整理课件外资(wàizī)49%新型疫苗国家工程(gōngchéng)研究中心51%永泰免疫股权(ɡǔquán)分析

ShareHoldersofIMAS第六十六页，共七十三页。整理课件永泰免疫(miǎnyì)关联企业RelatedInstitutes中国(zhōnɡɡuó)生物技术集团新型疫苗(yìmiáo)国家工程研究中心永泰免疫北京生物制品研究所北京天坛生物制品股份有限公司中国疾病预防控制中心病毒病预防和控制所中国医药集团总公司第六十七页，共七十三页。整理课件中国人民解放军总医院北京大学人民医院北京(běijīnɡ)普仁医院山东大学(shāndōnɡdàxué)齐鲁医院永泰免疫面貌(miànmào)展示（1）

AppearanceofIMAS第六十八页，共七十三页。整理课件永泰免疫(miǎnyì)面貌展示（2）

AppearanceofIMAS第六十九页，共七十三页。整理课件沈心亮董事长著名生物(shēngwù)疫苗专家国家疫苗工程中心北京生物制品研究所所长，新型疫苗国家工程(gōngchéng)研究中心主任；国家重大传染病专项首席科学家《国家中长期科学和技术发展规划纲要》（2006－2020年）“重大传染病”科技重大专项“疫苗、抗原筛选和国家应急系统建设”专家组组长，“重大新药创制”科技重大专项“新药研究开发关键技术研究”平台复审专家。国家科技部863生物和医药技术领域专家组专家，专家组组长；国家新药审评专家，国家药典委员会委员，受聘担任中华预防医学会常务委员，中国医药生物技术学会基因工程药物多肽药物和疫苗专业委员会副主任委员、国家药典委员会委员。国家新药申评专家库专家、国家创业板发生委唯一行业委员，享受政府特殊津贴。王歈总经理著名(zhùmíng)生物免疫学专家北京大学医学部免疫学博士，曾任北京大学医学部免疫学系副教授、北京大学临床肿瘤学院肿瘤生物诊断与治疗中心副主任，北京市