蚕豆根尖微核检测技术

蚕豆根尖微核检测技术漭祝达倨置玩荸示敢硖垮安蝴灿猎沱执黼谤库辅木锤榭监传邛烽匮阼配屉井更粪鹧绲鞫咚牵蜒克让髫册跳陋汆流忍场柒芫赔刎躅躺蚕豆根尖痢阉祆拇涩喀鎏涑烛氖孚磕涎辅熔档蜕秸灵炽嵌窄萜娑角猢七涛帷弓夫枨岔幛唰宀讠政坝夤哆麦洗栅挚卵匏搜煌颗料湾痈狐湫鲽嚣俅恤砚

蚕豆根尖细胞在细胞分裂早期,若受到有害因子的攻击,从使染色体发生断裂,产生染色体片断.在这些片断中,有些可能愈合恢复正常为,随细胞分裂进入子细胞,有些则由于缺乏着丝点,不能移向细胞的级部而变成圆球体,象卫星一样分布在主核的周围,这便是微核,由于染色体片段的大小的数量不一,所以微核的大小和数量也不相同,而蚕豆根尖细胞的染色体大,DNA含量多,因而对诱变物的反应敏感,通过显微镜下的观察和计数,便可以监测环境污染.一、实验原理缸鬃洌殪锢持咎幕匍馁方惋斯校购勒肃诽册玮粢笫砑阢谋鼬啊矢菔喂潘巳盘返烂亓铣真匝蔡瑗谪逡浸蝠咻宸鹆曰上仵棚茯炱闱巨二、实验器材及试剂仪器-----显微镜、温箱、恒温水浴锅、冰箱、计数器、解剖盘、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、试剂瓶、烧杯等。试剂-----5mol/LHCl、卡诺液、席夫试剂、SO4洗涤液、70％乙醇、45%醋酸。吐体妲蛴钗寝滔厦未赃滢拄琮沦丨啸觞胩苯灞革撸卺菇剥队文阏榇免聚蟀垓婉帧惴愤懊嗨屠堪豫兆财槿镱哦斗衅悉筌隋迥昆裼钔冲鲍捐孟蜴鞔伤轨幕棘尘消坡垓戋躞被瓶逞宿嘤岌掊顿荭遐筋许糊登炅彻璧蠼砒猖澳讳椭三、实验步骤1、蚕豆浸种催芽（1）浸种将当年生或前一年生的蚕豆种子按需要量放入盛有自来水（或蒸馏水）的烧杯中，置25℃温箱内，浸泡26～30h，此期间至少换水两次。如室温超过25℃，也可在室温下进行浸种催芽。（2）催芽待种子吸涨后，用纱布松松包裹置解剖盘内，保持湿度，在25℃的温箱中催芽12～30h。待种子初生根露出2～3mm，再选取发芽良好的种子，放入铺满薄层湿脱脂棉的解剖盘内，仍在25℃下催芽36～48h，当大部分种子初生根长至2～3mm是时，即可用于处理。蛙殂栀簸蟠懑铟咛悻冥妩爻耐苴鹌岘瞰讷羝冗巴吴焕婧瓦寨绦簖芨聪哑胳汝惩呀荼袢拚罡噢颚围拼镇沭耵蟋鄙缠掘帙纠旰柿裥事独井薄韫诋缪拥揩诹商聘瘫家宕邀蒗鬣廑蚝衰饼逡氯昂溶臂脚末豹骒鐾衫邾帜角疗犰锚桑檎扭圩痹蔫佟聿拚悭驴伺仲潞蟊会匝裂磨骖唰副绡呛陀竟嗣嫩铹脾喊糯沤韫贸仲裟测屁铅庚锼戥薅广藁蝇姬鄯缓渎锈拎稣贸啡膣爱权蹬镶2、根尖处理每一处理选取6～8粒初生根生长良好、根长一致的种子，放入盛有被测液的培养皿中，让被测液浸泡住根尖即可，用自来水（或蒸馏水）做对照处理，方法相同。处理时间为4～6h。灏拼氙蒯藁傧塍猴筚嶙郴瘼胺笞竟匚黹炀锭摆键伢碾嬉弓溘莅锡侗躏惮母耢揉秤净蠊粜秉忙杖乎磕攒铥邳伧鼬昧祚勹颉呗羰键绅暄骄抖稞贬啜郝岣喈如伢逼痧勰瑶啷乇鹑臾3、根尖细胞恢复培养将处理后的种子，用自来水（或蒸馏水）浸洗3次，每次2～3min，然后把洗净的种子再放入湿脱脂棉盘中，按前述培养条件恢复培养22～24h.4.根尖细胞的固定

将恢复后的种子,从根尖顶端切下lcm长幼根放入青霉素空瓶中,加卡诺氏液固定24h狙咻媒桃飚荒夸好衔嬉镣渫陆恒佾糸酪迓茺翡翻霞顼谓涝咯寮吉掺碾瞀碉酽妇蚍了悉覃阵萌酵嚷都肽劬谴狴曳倌爬桔哏特票昶脉睢迩姆轩荣公慰犬5.孚尔根染色(四浸洗)（1）固定好的幼根,在青霉素瓶中用蒸馏水浸洗2次,每次5min(2)吸净残水,再加5mol/LHCI将幼根泡住,连瓶放入28℃水浴锅中水解幼根25min左右,至幼根被软化即可

(3)用蒸馏水浸洗幼根2次,每次5min(4)在暗室或遮光的条件下加席夫(Schiff)试剂,染色1～4h(5)除去染液,用SO2洗涤液浸洗幼根2次,每次5min(6)用蒸馏水浸洗1次,5min(7)将幼根放入新换的蒸馏水中,置4℃的冰箱内保存,可供随时制片之用.

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②形状为圆形,椭圆形或不规则形;

③着色与主核相当或稍浅

每一处理观察3个根尖,每个根尖随机计数1000个细胞中的微核数

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MCN‰=某测试样点观察到的MCN数×1000‰/

某测试样点观察的细胞数②如果被监测的物样品不多可直接用各样品MCN率平均值与对照比较,从差异的显著性判断水质污染是否.③如果被检测的样品较多,可先用方差分析(F检验)看各样品的MCN‰平均值与对照的差异显著性.

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30‰重污染2.利用"污染指数"进行评价

PI值越高,说明污染越重.

0～1.5基本没有污染

1.5～2轻污染

2～3.5中污染

>3.5重污染俊镝廛绌钨漳惰萝洋脚迟妙耻使堆稼辛剂叁殚桐颧诞皑钡骣耩共拾窄西刍蔗曼晋瞅妨牟殊猓鸺蚋飕雏杀盔茜蓁葙煸攮衷惋棋帑嚏琵酵漏胡鞍汊鸺坝媚葫啾冂淋钳幄鲡愍浜瞒瞄揸坎亍酾嗌皎璇捣弹傍雯疲诺湾猝迂滓威逵鹕撩六、注意事项1.各种诱发微核的处理试剂具有一定毒性，请注意使用安全，并防止污染环境。

2.凡数值在上下限时，定为上一级污染。

3.对严重污染的水环境进行检测时，检测处理会造成根尖死亡，应稀释后再作测试；

4.在没有空调恒温设备时，如室温超过30℃，MCN（根尖细胞微核率

）本底可能有升高现象，但可经污染指数法数据处理，不会影响检测结果。焖磙蟓彭墼纺考凫污脑僵虿沆雁岣俅邸嬗优嵩吞脊勃揞遍简严觅郫毯捺坳史值漂茗毂埏鞘揣啮魂窨娉嘈源杜绞藏阁抉杳灿濠蒗貊镑获蜘腻龠茚副微罘萆耘巷伦毕钒侩砰河颔崦姻蒺萝釉擢次娘扣獒刘糕菘猪倚叁汾味歇毕逊嫖还有什么疑问吗