幽门螺杆菌临床检验方法评估及选择课件

幽门螺杆菌临床检验方法评估及选择南京鼓楼医院体检中心1幽门螺杆菌的特点幽门螺杆菌临床检验方法及选择幽门螺杆菌临床检验方法分类各种检验方法的评估及选择2幽门螺杆菌的特点幽门螺杆菌，Helicobacterpylori，简称Hp。首先由巴里·马歇尔(BarryJ.Marshall)和罗宾·沃伦(J.RobinWarren)二人发现，此二人因此获得2005年的诺贝尔生理学与医学奖。3幽门螺杆菌的特点4Hp是一种单极、多鞭毛、末端钝圆、螺旋形弯曲的细菌。长2.5～4.0μm，宽0.5～1.0μm。革兰染色阴性。有动力。在胃粘膜上皮细胞表面常呈典型的螺旋状或弧形。在固体培养基上生长时，除典型的形态外，有时可出现杆状或圆球状。幽门螺杆菌的特点5幽门螺杆菌的特点幽门螺杆菌的尿素酶极为丰富，约含菌体蛋白的15%，活性相当于变形杆菌的400倍。尿素酶催化尿素水解形成氨云保护细菌在高酸环境下生存。幽门螺杆菌感染是慢性活动性胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤和胃癌的主要致病因素。1994年世界卫生组织/国际癌症研究机构将幽门螺杆菌定位1类致癌原。6幽门螺杆菌临床检验方法及选择幽门螺杆菌临床检验方法的分类：一.有创性(侵入性)检验方法：快速尿素酶试验病理染色涂片染色细菌培养基因测定二.无创性（非侵入性）检验方法：

尿素呼气试验HP抗体测定粪Hp抗原测定7一.有创性方法：1.快速尿素酶试验（RUT）：检测胃粘膜表面粘液层中的Hp产生的尿素酶，是我国各级医院胃镜室较易开展的Hp感染诊断方法。具有简便、快捷、准确、能反应现症感染和价廉等优点。缺点是依赖胃镜，其检测结果受检测试剂的pH值、取材部位、取材组织大小、取材组织中菌量、反应时间、环境温度等因素影响。另外当患者因其他原因接受抗生素、铋剂或PPI等治疗时，Hp虽然不会被杀灭，但其活性受到抑制，尿素酶活性也随之明显降低，导致尿素酶依赖性试验出现假阴性结果。幽门螺杆菌临床检验方法及选择8尿素酶CO(NH2)2CO2+NH3NH3使酚红显红色：（＋）不变色：（－）胃粘膜组织尿素、酚红快速尿素酶试验92.涂片革兰染色镜检：属简单的形态学检测方法。将每一标本胃粘膜表面在洁净玻片上涂抹成约5mm*10mm大小（每块玻片可涂3~5个标本），晾干或火焰固定后行革兰染色，观察约20个油镜视野，一般最快约15min出结果。优点是价格低，一般无假阳性，缺点是可有假阴性，适合行胃镜检查而未开展RUT的单位进行。幽门螺杆菌临床检验方法及选择103.组织切片染色镜检：组织病理染色：胃活检标本常规制备病理切片，进行染色镜检。常用染色方法有Warthin-starry银染、Giemsa、甲苯胺兰及HE染色等。免疫组化技术：应用标记抗Hp抗体免疫染色，但实际应用有限。幽门螺杆菌临床检验方法及选择114.Hp培养：气体条件：微需氧固体及液体培养基：脑心浸液琼脂及肉汤、布氏肉汤等；添加剂：动物（马、羊、兔等）血或血清。鉴定：菌落形态、生化反应、涂片革兰氏染色镜检优点：特异性100%；可获取细菌作基础研究，方便体外药敏试验；用于自制血清学方法所需抗原；可作半定量分析；诊断金标准之一。缺点：敏感性低（70-80%），培养条件要求高，操作复杂，在临床特别是基层医院不易推广。幽门螺杆菌临床检验方法及选择125.基因检测方法：探针杂交：仅用于科研目的。该方法的优点是可对Hp基因进行分析，也可进行Hp培养；缺点是对实验室要求高，操作复杂，难推广。易出现污染而致假阳性。幽门螺杆菌临床检验方法及选择13二.无创性检测方法：1.核素标记的尿素呼气试验：包括13C或14C尿素呼气试验：通过口服13C或14C尿素，经胃粘膜Hp尿素酶分解，产生NH4+和HCO3-，经肠道吸收入血后由呼吸道以CO2的形式呼出，检测呼出气体中含13C或14C的CO2.13C无放射性，但费用较高，14C由一定的放射性，仍属安全范围，但应避免用于儿童和孕妇。呼气试验的优势是操作简便、快捷、准确、无创，检测阳性可确认现症感染，可用于判断治疗后的Hp根除效果，敏感性与特异性均高于95%。其缺点是对于近期接受过质子泵抑制剂（PPI），铋剂及抗生素治疗的患者，可出现假阴性结果。幽门螺杆菌临床检验方法及选择142.粪便Hp抗原检测：采用Hp特异抗原的抗体检测粪便中的Hp抗原，目前用于Hp检测显示有较好的敏感性和特异性只有在胃粘膜表面有Hp定植时，粪便中才可检测到Hp抗原，其结果也与胃内Hp的菌量密切相关。目前对近日使用抗生素、长期使用抑酸剂及铋剂者Hp抗原检测的可靠性无报道优点：是一种检测现症感染的无创方法，可用来评估根除治疗的疗效，敏感性和特异性均高于93%。缺点：是由于试剂来源受限的原因需等病人，在我国的开展并不普遍。幽门螺杆菌临床检验方法及选择153.血清Hp抗体检测：Hp感染后需经过一定时间（约1-3个月）才能产生抗体，而Hp根除后其抗体并不立即消失，也需要经过一定时间才逐渐消失。故Hp抗体检测一般作为非现症感染检测方法，可反映一段时间内Hp的感染情况，不受近期用药的影响，一般也不能完全反映Hp的现症感染情况。幽门螺杆菌临床检验方法及选择163.血清Hp抗体检测：由于Hp感染一般都不能自行消失，如未经抗Hp治疗，Hp抗体阳性即提示有现症感染。一般Hp根除后3个月至半年后抗体滴度明显下降。抗体滴度持续不降常提示体内的Hp残留。血清学方法的优点是不受抗生素、铋剂及PPI类药物应用的影响，创伤小，病人的顺应性好，检测标本量大，可供大规模筛查用。缺点是总体准确性不满意，因血清中的抗体并不随着Hp的根除而马上消失，不易反映现症感染，不适合评估根除治疗效果。幽门螺杆菌临床检验方法及选择17总结1.快速尿素酶试验：首选。操作简便快速，费用低，同时可确定胃十二指肠疾