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文档简介

紫外可见吸光光度

分析方法、应用、软件1.紫外可见吸光光度分析方法2.紫外可见吸光光度分析方法的应用举例3.Win-sp分光光度计工作站功能4.Win-sp分光光度计工作站使用指导紫外可见吸光光度

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1.紫外可见吸光光度分析方法1.1吸光光度分析法基本概念1.2紫外可见吸光光度分析法浓度因子定量计算标准曲线法定量计算双波长吸光光度法多波长吸光光度法动力学吸光光度法光谱分析导数光谱分析1.2.8其它吸光光度法分析方法紫外可见吸光光度

分析方法、应用、软件2.紫外可见吸光光度分析方法的应用举例2.1在环境保护中的应用举例—空气中“甲醛”的测定2.2在食品安全中的应用举例—食品中“农药残留”的快速检测2.3在生命科学研究中的应用举例—DNA/蛋白质浓度检测2.4在医药分析中的应用举例—小儿用盐酸麻黄素滴鼻剂的导数光谱测定法紫外可见吸光光度

分析方法、应用、软件3.Win-sp分光光度计工作站功能3.1基本测试功能3.2具体应用功能3.3辅助功能紫外可见吸光光度

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4.Win-sp分光光度计工作站使用指导4.1软件的安装4.2联机4.3光度测试演示4.4时间扫描演示4.5光谱扫描演示4.6多波长演示4.7农药残留检测演示3.Win-sp分光光度计工作站功能

3.1基本测试功能3.1.1光度测试工作模式3.1.2时间扫描工作模式3.1.3标准曲线工作模式3.1.4光谱扫描工作模式3.Win-sp分光光度计工作站功能

3.2具体应用功能3.2.1多波长工作模块3.2.2室内环境检测工作模块农药残留快速检测工作模块3.2.4DNA/蛋白质浓度检测工作模块3.Win-sp分光光度计工作站功能

3.3辅助功能

3.3.1文件的存储

3.3.2图形处理

3.3.3报告打印

3.3.3邮件发送1.1吸光光度分析法基本概念吸光光度分析法理论依据吸光光度分析法是基于不同的分子结构的物质对电磁辐射的选择性吸收而建立起来的分析方法,属于分子吸收光谱分析。在某一特定波长光的作用下,物质的浓度和吸光度值成正比;在某物质的浓度不变的情况下,改变作用光的波长,吸光度也将发生变化,这表明,分子的吸光度值(A)和波长()为函数关系,同时和该组分的浓度(C)为函数关系。这就是吸光光度法定量分析和定性分析的理论依据。1.姥1吸光运光度忽分析胞法基维本概怜念1.显1.逝2.夺2分光续光度智计吸电光度烦值的急计算分光凯光度歉计检柳测器陕中的阵模拟佩信号气经A/煌D转换扫为数担字信粒号,抹保存弓到存晨储器肯中,梯这个催值我牢们称妙为能肺量值稠(En聚er厉gy),茂透过拼率的躬计算痰就是宇基于临能量阶值。透过锁率(Tr雀an汁sm龄it测ta款nc缠e):T忍=(Es洪-E撕0)(E1栗00拦-E脚0)10咸0套%吸光抵度(Ab控so悼rb低an次ce):A治=详-物lo歉g知10析TE1传00:吸货收池滚中为耽参比吗(可船能是滚空气逮)时书的能太量值E0:无江光束巧通过窝吸收放池时济的能丹量值Es:吸影收池奴中为谁待测星样品惯时的忍能量猜值1.橡2紫外弟可见鼓吸光妖光度内分析丛法速浓度精因子饭定量融计算紫外笨可见祥吸光粱光度炒分析基法有鲁定量皆分析快和定屯性分浙析;谷但以思定量较分析统为主栗。浓度查因子灾定量樱计算溶液先的某巾组分千的浓归度C和吸属光度A之间配存在芝线性揉关系炎,当A和C之间乞的关谢系确骡定时输,浓宿度C可以松直读气,令K为浓戴度因优子,梨有C非=胆KA浓度瞒因子K的取呜得1。由李已知柱浓度己的标厅准样性品的雀吸光搂度值扩中计坑算出K勾=路CA2。尼由标如准曲勾线法饭获得1.把2紫外辰可见事吸光善光度施分析剃法标准私曲线暑法定往量计葛算先配边制一示系列叶浓度旧不同裳的标枝准溶蜘液,阵在与匠试样熄相同糕的条师件下浸,分壤别测预量其拴吸光彻度,犁将吸映光度勤与对骆应的庭浓度移做图译,所脂得的权直线昏称为孙标准默曲线肃或工即作曲映线。推然后肌测定售试样鬼的吸垄光度雨,再林从工研作曲故线中桂查出交试样碌的浓帐度。计算渠机中啦标准疫曲线镰法定穷量计筒算数旱据处在理采诊用回搅归分搞析法秃。确定值回归改直线隐的原啊则是机使它型与所吵有实女验点海的误雷差的猎平方虾和为督最小浩值。设回世归方梳程为耗:碧y城=戏a哄+扭b陪x利用节最小脊二乘还法原适理,堤求出备回归著线的践斜率耀b和任截距补a。r为熊Y皱和x滑变炉量之校间的挂相关惑系数当勾r厉>0俊.9泳99凝时权表摸明Y哄和颜x桃之绳间存齿在线竭性函或数关总系。1.是2吸光凯光度象分析项法总双没波长寨吸光稼光度灰法原理劳:以慰样品道溶液暑本身略做参管比,潜用两改束强赛度相缓等、谣波长页不同赤的单工色光惕交替杂入射房诚到同龄一样雾品溶荡液,榴测得取吸光币度A1、A2。设矩两波俘长吸袋光度延之差仅为∆A,样敌品溶喝液某红组分触浓度若为C,样肾品溶陪液某评组分邻浓度史和∆A之间食因子吓为K。有:∆A桥=员A1充-岭A2C惕=乓∆AK双波迅长吸撒光光灰度法俘主要各特点只:可以旺对浑文浊试斤样进西行分拨析可以锋进行农双组惕分或饲三组蒜分混够合物恼同时萌测定在药徒物分熟析中打有广凯阔的柳使用继。1.晶2吸光来光度元分析认法贱多良波长宁吸光豆光度维法原理拾:以颗样品馋溶液爆本身盏做参嫌比,丙用多个束波皂长不仆同的珍单色皂光交谦替入驳射到架同一鞋样品症溶液武,测祸得吸曲光度A1、A2墨….阳An。设象每个众波长科吸光可度对生应的遭系数K1、K2农…Kn,设∆A为所掉有波齿长吸校光度冷的代为数表偷达式取之和执,样驴品溶罩液某餐组分违浓度怒为C,样着品溶拴液某籍组分酬浓度茅和∆A之间央因子传为K。有:∆A续=Ki缸AiC死=羽∆AK其中裤的系赛数K1、K2榜…Kn为经效验值1.蒸2吸光茫光度蚀分析热法饭动怠力学靠吸光柴光度往法动力驴学吸久光光毙度法阔是通辱过研确究样切品吸伏光度恋随时沿间变聋化规智律,钓来分怨析化真学反棉应等迎平衡争过程僚状态枕,或猾借此租方法满分析地某种蚁组分郊的一鼠种方验法。一般满可分标为三季类:催化采动力窗学方羽法(召包括或酶催多化动己力学眨方法语)非催容化动渴力学变方法迅(包竖括差服动力钉学方剩法)诱导泰方法测量肉方法贤:起使始斜尘率法翠、固如定时谦间法椒、固急定浓愤度法甘。动力蔽学吸洞光光顷度法陪最基刮本的询测量台方式格就是绸时间侧扫描择。通过霞时间界扫描骡,我先们可得以得较到样同品吸勒光度A的时经间数慢列A1、A2、A3务….华.A驰n对这彼个时拍间数棉列我模们可仰以得免到A的几塞个统究计指研标:动态围范围平均疑值摔标馅准差平均遥差变代异系趴数--标准伶差变多异系典数1.负2吸光吗光度料分析萝法咐光俭谱分启析光谱里分析光谱嚷分析役是通太过研崖究样例品吸微光度获随波盼长变招化规穴律,险来分隆析样嗽品的馆光谱逐(这哀里狭殖义为认紫外-可见慨光谱万)特骗征,抹并通何过对辰比某旗种物早质的系标准话图谱菊,来执定性坝分析指组分含性质类,并凡为下六一步符定量淘分析规提供言依据剖的一宾种分制析方动法。光谱竹分析态最基俩本的卖测量垮方式障就是讯波长易扫描递。通过比波长阀扫描秃,我尸们可孙以得照到样食品吸笨光度A的谱虽图数灭据A1、A2、A3框….废.A驼n对这镜个谱群图数才据我座们常寇规处光理就盲是光企谱波全峰波旁谷的突扫描晕,对胞某个伞特征帮峰,议我们嘴可以洞由下劝面几失个属维性来爹描述袋:波长峰高峰类瞒型1.报2吸光者光度初分析贫法损导庭数光市谱分衣析导数黑光谱替分析壁有一秃阶导槐数光刷谱、沟高阶总导数斥光谱还分析屯。它傍是普相通光气谱分斧析的肤补充贯,当问样品糠的两精种组芦分在委普通茶光谱裁分析嫂中无扣法识祝别时给,可它以考律虑导阿数光愧谱分楼析。导数蹦光谱静的获侦得有解两种旅方式哄:直接稀通过鉴同时早记录掘两波吼长的∆A,进遍行一秃次完铅整扫城描即狸可获缺得。在计葬算机田内通爪过程姻序对绸普通量光谱鲜扫描倘的结孩果进亿行求绢导获局得。对这歌个谱正图数名据我素们常稠规处碰理就税是同亲样是检光谱炸波峰亭波谷是的扫蹲描,衫对某抬个特躬征峰握,我类们也岁可以惊由几装个属污性来宿描述疫(同秀光谱嫁分析奥)1.泰2吸光步光度归分析啦法1.补2.虹8其它专吸光猪光度肥法分窝析方尘法正交邻函数翠吸光订光度充法混合黄组分楼的测傍定流动裹注射籍吸光舟光度愉法差示浇吸光行光度凳法浮选岩吸光想光度惯法固相忍吸光鸟光度旅法计量公学吸忌光光否度法(多草组分哄光谱唯定量锹方法馋)最小梳二乘压法逆最培小二蠢乘法偏最蚊小二霞乘法非线舌性最独小二圆乘法改进纲矩阵叮法卡尔神曼滤独波法2.絮1在环跃境保犁护中句的应楼用举监例—空气模中“盟甲醛镜”的程测定在室饺内环筐境检真测有堤五个忌项目漠:游脏离甲安醛、拜氨、伸氡、冈苯、赵总挥睡发性昂有机很化合骄物(TV芒OC),如其中摊游离规甲醛鞭、氨蒙两项泥是用趟分光捞光度杨法分瓜析的有。室内宵环境栗检测奥检测堪以《民用记建筑福工程方室内冠环境眼污染袜控制号规范》缓GB嚷5尤03杆25傅-2彼00湿1及《室内纳空气棚质量斥标准》G督B/创T益18称88亲3-荷20葛02作为榨标准教。“游讨离甲橡醛”广的检鞠测方升法是缎酚试艇剂分饶光光托度法,波长乌为63券0n诵m。“氨埋”的章检测厨方法哄是靛丑酚蓝途分光亭光度善法,波长碗为69卷7.猴5n泥m。一、吧“游捉离甲仆醛”御的检岔测(1竿)检验幕原理空气兔中的质甲醛路与酚隶试剂词反应蛛生成改嗪,形嗪在哄酸性朵溶液沙中被仁高铁愁离子哈氧化砌形成薯蓝绿神色化甘合物雕。根或据颜冈色深柱浅,荒比色纠定量塌。(2讨)检验织仪器站及软辩件1.分光灾光度同计:72季3可见附分光垒光度氧计;2.竟Wi丛n_抚en咬v环保袖工作躺站;(3右)试剂吸收西液:哀酚试丧剂[C满6H酿4S惨N(CH龟3)C∶界NN远H2谨·H牢CI浆]。2.狭1在环抄境保如护中沃的应衫用举闹例—空气婚中“澡甲醛报”的戏测定(4秒)工畜作流炉程吸收液等化学试剂的配置室内环境空气样品采集标准溶液吸光度测定样品溶液吸光度测定结果计算标准曲线的绘制2.云1在环钓境保呈护中样的应催用举扩例—空气津中“干甲醛招”的哄测定(7暂)检测耐示例2.速2分光选光度雨计在捎食品吃安全池中的英应用逗举例-食昼品中锻“农滥药残犬留”第的快绵速检哪测食品应中“性农药优残留伟”的志快速西检测拖是动插力学货吸光引光度兆法的夫一个抖具体沙应用附。仪督器检血测过袋程遵继循国惹家标加准GB少/T拍50假09剖.1爪99息-2宇00匹2规定宰的酶著抑制驴率法怒来检查测蔬闭菜、关水果高中有跪机磷棍和氨缓基甲刘酸脂汽类农掉药残兰留。(1挺)检验姨原理检测果所用优的酶内抑制冬率法钥是模舍拟人完体温毒度(37C)环孩境下态,通度过测义定食弄品中弱有机纹磷和江氨基貌甲酸询脂类招农药器残留撒对已崇酰胆时缄酶兼活性拣的抑悦制率典,来因快速晴判断杀农药淘综合逗残留度量。摄测定窗波长41旺0n善m。(2筐)检验辨仪器孔及软食件1.分光零光度检计:72碎3可见久分光伙光度浊计;2.客《尾Wi称n_月Sp农药驰残毒坚检测肿工作慨站》;(3滋)试剂1.提取否试剂2.酶3.显色雨剂4.底物2.映2分光丈光度孙计在拐食品用安全站中的殊应用赢举例-食景品中暑“农棚药残搂留”芝的快检速检荡测(4毒)检测亲范围即及灵搬敏度蔬菜东:叶菜盼、果子菜、在豆菜回、瓜赖菜(墙除胡摩萝卜柄、韭泳菜、尼茭白斧、蘑醋菇)农药暑:有机菠磷类脚:甲养胺磷迎、对俗硫磷感、氧胃化乐元果、跳敌敌多畏、岛甲拌丝式磷、漂久效横磷、组杀扑搭磷等灵敏熊度0.赠5-阀5m趋g/膏kg2.水胺农硫磷良、甲奥基对厉硫磷艳、甲如基异艳柳磷腹、乐艰果等灵敏种度8-范10趴mg边/k殿g氨基祖甲酸饱酯类夹:克愤百威字、涕携灭威蛇、丙巧硫克跪百威估、丁右硫克旬百威那、抗惹蚜威扩、仲灵丁威膛、速舟灭威乒、残炕杀威汁、西屯维因程、叶凑蝉散立等灵敏英度(对隐照组妥用3毫升宾提取册试剂影代替略样本棒提取踏液)2.伴2分光阳光度艘计在弦食品姜安全鸡中的乎应用木举例-食寻品中邀“农海药残云留”闸的快敬速检喝测(5卫)册检测暴流程取样(取2克样本,非叶菜类4克,切碎)提取(加入20毫升提取试剂,震荡1-2分钟,倒出上清液,静置3分钟)抑制反应(于试管中加入50微升酶、3毫升样本提取液、50微升显色剂)培养(把配制好的样品或对照组放入37-38C培养箱中培养30分钟)显色反应(取出培养好的样品,加入50微升底物,倒入比色杯,立即进行仪器测定)2.舱2分光职光度纸计在禽食品恢安全拥中的奋应用加举例-食优品中基“农洞药残遍留”毒的快份速检僵测(6贿)检测肚示例2.颂2分光民光度亮计在雪食品秃安全腰中的做应用杜举例-食躬品中乳“农愚药残袖留”等的快钥速检命测农残测试界面2.牌3可见衬分光锈光度醋计在命生命雕科学槽研究锄中的秀应用聚举例-D赢NA哨/蛋务白质衔浓度垦检测蛋白楚质和透核酸商均有春紫外喇吸收炎的性焦质,蝇蛋白慰质在反28刻0n蝇m波灯长处宫的紫茂外线堡有最浩大吸筝收,牢核酸披及其哄衍生神物在赤26舞0n念m波悲长处睁紫外通线有寺最大惊吸收隔,可垄以通孩过标梦准曲都线法千进行岗定量兆测定张,也拖可用猜二波村长、斯三波无长方谋法消店除干券扰组参分的氏影响传,提难高测蛇试准裁确度肉。1.富定吐点波引长(咱28颠0n腊m)唯定量移测定朴蛋白和质浓坟度原理掉:妇蛋可白质桃对2怜80提nm坊的紫欠外线禾有最悼大吸及收,研这是艇因为器含有茫酪氨穿酸和餐色氨柜酸的愧缘故朵,蛋令白质而溶液钳的2称80轻nm伯吸收加值与唯其浓芒度成撑正比土,可责作定其量测责定。仪器突:7假52险分光阴光度光计试管爆1.我5*拔15阵cm朝(*姨9)吸管汇0印.5托ml熊(*绍1)传、1故ml兽(*台3)胶、躲2m迟l(妄*2次)、钞5芽ml前(*插2)旁。2.铅3可见淋分光藏光度坛计在直生命饶科学赴研究唇中的亩应用豆举例-D影NA魂/蛋排白质袄浓度惊检测试剂卵清羞蛋白查标准搏液:秋约1g卵清奖蛋白型溶于10皱0m塌l筹0.积9%Na锻Cl溶液摇,离脑心,座取上索液,先用克蜜氏定炉氮法愉测定蚂其蛋亏白含起量。袍根据麦测定醋结果将,用0.绢9%Na伐Cl溶液竿稀释岛卵清和蛋白辛溶液女,使秃其蛋早白含盯量为2m讨g/协ml,将2m吧g/纳ml蛋白蓄质的削溶液泡准确找稀释1倍未知括浓度会蛋白核质溶刑液,外有酪掉蛋白聪配制芳,浓申度控事制在骨范围截内。操作介:标准布曲线配的绘驱制,珠取8支干凡净试乌管,鲜按下宣表编贩号并死加入耍试剂姐:加毕趴,混窃匀,窃用紫且外分堂光光哪度计双计测OD寺28鸡0,以隶光密无度为乒纵坐散标,扫蛋白炸浓度傻为横烈坐标弊作图叔。样液厚的测悬定:己取未辉知浓轨度的奖蛋白缸液1.蛋0m烈l,加安蒸馏谈水3.现0m判l,混米匀,本测OD症28超0,对赴照标产准曲绳线求寸得蛋偿白浓州度。2.拴3.章2女.双波斩长法冷定量考测定桶核酸致浓度——紫外厉吸收岸法原理核酸窜及其青衍生碍物、丛核苷妖酸、迎核苷恐、嘧咳啶和系嘌呤固均有纷紫外顾吸收遥的性瞧质。淘其吸圾收高乱位在26耻0n顶m波长牧处。匠核酸辩的摩农尔消临光系忌统用c(尼P)来表沸示,惧:(F厚)为每诞升溶物被中藏含有1克原当子核业酸磷辜的光做吸收创值(即A值)(见下佩表)。测暴得未拳知浓灵度核稠酸溶厘液的A值、摔即可尿计算欲出其壶中RN机A或DN谷A的含吗量。撕该法扒操作浸简便酸、迅售速,衰对样丛品无孝损。云蛋白搬质和茎核苷店酸等兆也有功紫外锐吸收某。通常斤蛋白县质的场吸收登高峰咏在28策0n项ml波长紧处,分在26堪0n秃nl处吸刷收值张仅为稳核酿疫的1/10或更犯低、链因此澡对于雹含有盼微过傅蛋白兰质的漆核酸述样品目。测银定误估差较辣小。RN福A的26蹈0n狐m、与28盈0n馆m吸收凑比值袜在2.武0以上DN料A的26锐0n质m和28恋0n榴m吸收跑比值旅在1.嘴9左右菌.当组样品沾中蛋佣白质筛含量芦较高原时,挠比值咸下降戚。若块样品芹中混加有大贷量的困蛋白悠质和啄核苷究酸等艺紫外宵吸收绒物质罩时,限应设唯法除恶去。2.骆3.碎3多波烤长法殿定量料测定DN爷A/蛋白悟质浓代度一、木原理蛋白算质和为核酸暴均有独紫外揉吸收沉的性蜻质,载蛋白螺质在28犁0n虑m波长券处的洪紫外辽线有闷最大居吸收酒,核豪酸及宜其衍两生物袭在26呈0n截m波长虎处紫扮外线俘有最沈大吸疏收,方通过彼三波直长方赤法消停除干掀扰组暗分的凝影响散,提班高测蜻试准源确度毅。二、暮测定住原理波长晶选择被:1.23啊0n院m:蛋除白质籍明显全吸收爸波长虚。2.26省0n蜻m:DN糠A最大封吸收评波长叠。3.28旨0n驻m:蛋瓦白质胳最大辟吸收转波长裂。4.32格0n办m:背及景波拳长。计算踪蝶方式方式1:DN眨A浓度=4影9.君1A2脱60抵-3贴.4翻8A2裙30蛋白印质浓扣度=1仗83堤.0A2来30苦-7环5.越8A2辟60方式2:DN毙A浓度=6生2.摄9A2铺60票-3从6.炼0A2酱80蛋白乖质浓怒度=1穗55势2.价0A2正80划-7投57刘.3A2醉60参考描指标贡:A2矿60酸/2避80割,通常A2缸60兴/2突80在1.针9左右隙。故杏在蛋的白质敲和DN民A同时稳测定柏中,愿若样境品中插混有碎大量裕的蛋努白质跪和核者苷酸行等紫炕外吸出收物拢质时菠,应因设法挽除去脏。2.才3.宾3多波婆长法显定量察测定DN退A/蛋白点质浓挥度---工作李示例2.仔4可见糖分光应光度拥计在歉医药

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