细胞检测技术

T细胞检测技术机体接受外来抗原及自身抗原刺激后，通过细胞免疫和体液免疫及相关系统协同作用，对抗原产生应答。T细胞应答：T细胞增殖分泌细胞因子细胞毒效应表达特定表面标志淋巴细胞DNA合成分化母细胞刺激物细胞变大细胞浆扩大空泡核仁明显核染色质疏松一、淋巴细胞增殖实验1、原理（1）形态学检测2、检测方法方法学评价优点：形态学方法简便易行，普通光学显微镜便能观察结果，适于基层实验室应用。缺点：是依靠肉眼观察形态学变化，判断结果易受主观因素影响，重复性和准确性较差。（2）3H-TdR掺入法（MTT法）PHA淋巴细胞（54h）3HTdR掺入（MTT被还原）收集细胞，检测β射线（490nm吸光度）优点：3H-TdR掺入法敏感性高，客观性强，重复性好。缺点：但需一定设备条件，同时还存在放射性核素污染问题。

原理：CFSE等染料可连结到细胞内蛋白的氨基酸群（PKH26能插入脂膜），并随细胞分裂而分配到子代细胞中，每分裂一次，荧光强度减少一倍。方法学评价优点：操作简单；重复性强；安全；缺点：CFSE可能干扰细胞增殖（3）CFSE（PKH26等）染色法二、T细胞分泌功能的检测T细胞经各种丝裂原或特异性抗原刺激后,分泌的各种细胞因子,可借助免疫学、细胞生物学及分子生物学技术分别检测细胞因子含量、生物学活性或基因表达水平，从而间接反映T细胞功能。1、生物活性检测对于依赖于该细胞因子而增殖的细胞，细胞增殖程度与细胞因子含量呈正相关。方法学评价优点：敏感（pg）；显示细胞因子的活性；缺点：影响因素多（同一细胞分泌多种细胞因子，多种细胞因子呈现相同功能，细胞因子及其相应受体同时分泌）；2、免苏疫学被检测（1）EL矩IS彩A:操作烘简单腥，非番特异杏性影堤响大粉；（2）EL告IS鼻PO哨T:高度链的敏吐感性睁，可赏重复长性强葱，抗绵原特值异性事精确壮；（3）IC边S：可普同时唇检测岔产生饿细胞题因子体的细匠胞表哑型；形需要寨样本育量大月于EL岭IS料PO淡T，破请膜后恋的细嫂胞不哑能做既进一织步功冻能检伐测；优点涉：简蚀单，放适用理性广让，应方用特姿异的拔单克筑隆抗适体，登可检押测单解一细贞胞因省子的屡含量丑；缺点胁：无促法反欧应细苹胞因垮子的身生物螺活性戴；不很同单锤克隆政抗体拖检测畜的结鹊果不萌同；狡敏感铃性稍肿差（10长0p炭g）方法孙学评崖价（1）Re址al鞋ti爸me孙-P辈CR（2）分励子杂晴交2、分梳子生层物学厅检测三、T细胞股介导园的细犯胞毒蝇实验特异丝式性细币胞毒菠性T淋巴悟细胞察（CT锤L）识讲别靶格细胞垒表面仆特异绞性抗抹原，霸通过Fa美s途径网及颗须粒酶呼途径依，介欠导靶半细胞嫁溶解田。1、51Cr释放狱实验铬酸缴钠（Na251Cr矛O4）中狡的六芝价铬忘能被果活细慨胞摄亡取，街并在嘱细胞毫溶解系后以效三价获铬的激形式匠被释窑放。方法吴学评涌价优点渠：灵延敏、逆特异帜，是CT袖L活性寇测定摧的经锐典方梅法；缺点逝：操卷作繁姥琐；放电射性欢；靶精细胞51Cr自发梨释放悲；2、IC吓A贞ss辨ay（In秘v崭iv滋o征cy条to渔to择xi仇ci技ty启A贩ss富ay）表达要特定森抗原盆的肿饼瘤细甲胞系棒经CF咐SE标记喂后，就皮下竹注射魔入小践鼠，蠢被小扣鼠体饭内抗相原特拐异性CT溉L作用24小时醒后，之取出掩肿瘤阻细胞再，检拳测其CF黎SE含量蚂。方法刻学评双价优点温：反抢应体料内杀添伤效尤果；缺点化：影贫响因飞素多；四、T细胞豆表面独标志挎的检积测特异壶性T淋巴衰细胞量活化浙需要德第一崖信号蒸和第常二信染号。俘因此饶检测CT置L表面好特异咐性受坚体或械相关挂的表街面标祖志可翁以反只映CT扰L的活让化状鸡态。1、Te警tr使am异er技术模拟T细胞百活化会的第商一信藏号，卖构建户荧光星标记援的MH悟C-肽复肃合物友，被娘特异坑性T细胞周识别栗。通广过检渔测标梦记的也荧光膊，反炼应活热化的映特异照性T细胞山。方法宝学评太价优点糕：简故便，茎快速纸，敏押感缺点饭：成轧本高寻，受HL元A型别云的限事制2、表厦面标酸志CD称10约7a迈/b的检述测CD枪10哄7a避/b表达折于T细胞抄内的浙质膜尘上，灯随着骨脱颗迹粒作高用，逝一过撑性表冶达于姓细胞茫表面槐；T细胞启表面CD瘦10雁7a英/b的检