第四章 抗体制药ar

第四章抗体制药抗体？1937年Tiselius用电泳法将血清蛋白分离为白蛋白、α（甲种球蛋白）、β（乙种球蛋白）、γ球蛋白（丙种球蛋白），并证明抗体活性主要存在于γ球蛋白组分。在相当一段时间内丙种球蛋白称为抗体的同义词。第一节概述抗体？

抗体是指能与相应特异性结合的具有免疫功能的球蛋白（Ig）。它是机体免疫系统受抗原物质刺激后，B淋巴细胞被活化、增值和分化为浆细胞合成和分泌的球蛋白。第一节概述抗原决定簇？

是指抗原分子中决定抗原特异性的特殊化学基团，又称表团，通常由5-7个氨基酸残基或5-7个多糖残基/核苷酸组成。抗原决定蔟是T细胞受体、B细胞受体和抗体识别结合的基本单位，他们之间的相互作用具有高度特异性。如：菌体抗原（O抗原）、鞭毛抗原（H抗原）等。第一节概述多克隆抗体？

病原微生物含有多种抗原决定簇的抗原物质，因此这些抗体制剂也是多种抗体的混合物，故称多克隆抗体，会给治疗和诊断带来误差。第一节概述单克隆抗体？1975年Kohler和Milstein首先利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备出单克隆抗体。他们将抗体产生细胞于具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞相融合，通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系，此细胞系能产生结构和特异性完全相同的高纯度抗体。第一节概述单克隆抗体？由一种抗原决定簇刺激机体，由一个B淋巴细胞接受该抗原所产生的抗体。单克隆抗体具有高度特异性、均一性、来源稳定、可大量生产等特点。第一节概述以单克隆抗体作为载体的药物可对肿瘤进行定向治疗。但是，临床应用的实践证明，免疫导向法并没有成功，其障碍有：①单克隆抗体均是鼠源性抗体，应用于人体内可产生人鼠抗体，加速了排斥反应，在人体内半衰期只有5~6h，难以维持有效药物作用靶组织时间。②完整的抗体分子，即Ig的相对分子质量过大，难以穿透实体肿瘤组织，达不到有效的治疗浓度。第一节概述基于上述原因，需从两个方面对单克隆抗体加以改造：①降低单克隆抗体的免疫原性。②降低单克隆抗体的相对分子质量。利用基因工程技术制备出基因工程抗体，即可达到上述目的。第一节概述单克模隆抗穴体药精的现讽状抗体蜘药的程销售蠢额97年~9忘9年由4.朵68亿美副元增付长到13亿美秀元03年抗熟体类绣药物课总销暑售额尺将会洲达到50亿美损元25骆0多种楼抗体做类药止物在勺临床候试验希中1/影3已进缸入三侵期临阶床1/类4已通概过临请床三再期试占验美国茄市场巷上有茧种治奖疗用深的抗暂体药爆物第一雅节碰概需述单克刑隆抗睛体药匠的现颜状19涌94年，Ce眨nt酸oc普or的Re碑op探ro一种角血小炊板表论面受勇体的误单克禁隆抗兔体片蛋段被助批准币用于佣临床谈来预潜防治我疗血雷栓形室成19宗97年批鸟准上鞠市的12种生故物新锐药中拆有2种是之抗体贫药19具98年上辈市的12种新贪药中摊有6种是创抗体钟药20旱00年又蔽批准枯了My仇lo地ta抛rg用于饶治疗至急性奏髓细产胞白辅血病译的抗CD索33单克互隆抗迟体20愉01年已梯批准另及预索期会斜被批架准的10多种礼生物趴新药弓中，踩也有5种是开属于击抗体坡类药第一细节业概壳述抗体垂药物欢市场职稳步傲增长第一哲节肉概除述第一勒节巡寿概恩述全球环有超拿过20坡0家上症市或句未上鸦市公仁司正柜在研执发用于临假床诊怨断和释治疗班的单将克隆盛抗体正在亲进行株临床忌试验催的抗仅体公养司（38家）第一阀节影概辰述当前怒美国测治疗桑性抗魔体市服场第一坑节作概肿述当前暮美国放治疗桂性抗板体市闪场第一喘节拜概伞述中国润抗体导研究篇现状第一孕节播概检述第二羊节惑单克狗隆抗额体及邮其制兔备一、堡抗原玩与动浮物免认疫二、她细胞肠融合役与杂蚕交瘤尤细胞萄的选上择三、拼筛选嗓阳性陡克隆温与克斥隆化四、录杂交愧瘤细争胞抗汗体形耐状的旬鉴定五、轨单克锈隆抗赔体的帝大量骆制备六、戒单克纹隆抗需体的促纯化第二季节案单克滚隆抗左体及扬其制严备设计剩方案柜：一个B淋巴蹦细胞--屯--只分伞泌一牵种特昆异性害抗体小鼠略骨髓享瘤细剥胞--典--能无倘限增象殖杂种沿细胞第二词节稻单克缘瑞隆抗见体及淡其制映备第二射节垒单克摧隆抗尤体及虚其制危备㈠杂交免瘤技堂术产咽生的3个技秃术关床键1.狱B淋巴班细胞鲁与骨丘髓瘤华细胞贫的特透性：B淋巴输细胞典（B损ly东mp酿ho湿cy铅te制s）：接受雄抗原眯刺激饼后，扰能分姐泌针拍对该汁抗原赵的特告异性共抗体，妹在体时液免激疫中绞具有嗽重要捡功能尸。B淋巴油细胞谱本身装是一矮种终纺末分祝化细装胞，咐通常院不再进行挣细胞冶分裂勺，存壁活一拦点时绵间后专便会拨死亡--香--浅-短命细胞第二文节脏单克僻隆抗缎体及睬其制况备骨髓话瘤细扯胞（my荐el额om至ace组ll羽s）：恶性轮增殖神的转棵化细杀胞，真只要球营养牢条件叙适合萌可永范远分裂才和存培活--倡--鹿-长命且细胞。经筛职选与羞驯化察，现棍已建烦立多锦种骨本髓瘤慎细胞--声--肚-没有抗异体分葡泌物。第二翅节界单克蒜隆抗鼻体及素其制脾备2.细胞用融合助技术舒：第二量节锁单克痛隆抗挡体及坛其制稳备3.杂交尤瘤细保胞的羡筛选拒：第二条节跟单克王隆抗雅体及脾其制峰备第二畜节腾单克铅隆抗协体及替其制姓备第二纠节挨单克掠隆抗锁体及卫其制催备第二明节笨单克明隆抗疼体及田其制姻备第二臣节催单克泽隆抗素体及羞其制匙备一、外抗原趟与动债物免恒疫第二型节编单克辽隆抗率体及垫其制巡寿备第二惹节恩单克雀隆抗骆体及经其制焰备1.抗原动物员体内抗体特异乞性差肠、纯峡度低被产量吩低，述反应蓝不够勤灵敏2.抗原动物内体内抗体抗原场不纯抗体岩不纯筛选虚单一严效应B细胞不能热增殖讯，产搬生大复量抗册体刺激效应B刺激效应B第二盖节爪单克酷隆抗阔体及倡其制赤备动物握免疫:特定目标处抗原动物脾脏搁中B淋巴孩细胞B淋巴你细胞大量市繁殖免疫刺激能分窑泌针迁对于斤该抗修原的特异伪性抗闹体目的穿：在细赖胞融犁合后唯获得尽色可能勇多的杂分泌针质对于效该目馒标抗原篇的特神异性丢抗体的丢杂交要瘤细蛋胞第二驶节师单克盏隆抗舅体及箭其制冠备常用盒免疫转方法勇：常规拐免疫形法“稳耀妥；岭优势野克隆敞”脾内傲一次柿性免狭疫法“省摊时；纸省抗本原”短程黄免疫诱法“省旗时”体外枝免疫廉法“操顾作繁特琐”免疫不途径爸：皮下储注射腹腔宜注射静脉茅注射第二备节与单克晚隆抗翼体及桶其制缩慧备常规剂免疫础法：第二糟节队单克印隆抗瘦体及些其制烟备脾内瓣免疫怕法：脾内蓄免疫纤法即劣在麻张醉条荷件下蛋直接跑把0.寻1~勇0.蹲2ml的抗挠原注狭入脾求脏进组行免修疫。恭脾内文免疫陶法可金提高小臭鼠对掘抗原蜻的免铃疫反连应，杂节省节抗原南用量堆，细胞抗蚀原只泻需105个左兆右，诵可溶饮性抗授原只虫需10μg左右灵。第二沃节盘单克它隆抗敞体及慈其制阶备体外售免疫壤法：体外唉免疫载法的辽优点援很多穴，所蝇需抗照原量学少，停一般辛只需始几微犯克，初免疫貌期短私，仅4~间5天，霸干扰因素指少，耗已成仁功的窝制备响出针休对多阁抗原氏的单舅克隆抗结体，罚但融愿合后男产生注的杂法交瘤枕细胞亏株不乱够稳定。第二涝节声单克哥隆抗洗体及忙其制理备二、伞细胞支融合绣与杂缺交瘤丢细胞给的选舅择细胞浮融合栽方法册：病毒头介导莫的细暮胞融且合PE狼G介导乓细胞脊融合电极德融合第二布节眉单克集隆抗盼体及各其制兼备细胞蓄悬液堵的制砖备与随融合⑴脾细浙胞悬剩液的海制备撇：最后拆一次蛛免疫敞后第3天制备⑵骨髓竖瘤细逐胞悬竭液的分制备沿：于对新数生位长期展制备⑶乐细胞早融合深：5%秘P饶EG（10亲00沿~4胳00向0），pH捉8.捉0，38℃，1m疑in第二跃节脉单克慎隆抗阀体及伞其制奸备2.所H语AT培养扑基的摘筛选融合凤后细与胞混绸合液HA视T培养会基HT培养相基正常基培养撕基2舰we京ek乳s勇la么te晃r1晨we罚ek酱l款at季er第二阁节烫单克租隆抗摔体及泊其制南备三、举筛选倡阳性贴克隆充与克粘隆化常用壤方法指：要求糕：简便扛、快离速、惜敏感艰；在短爬时间模能检麻测大树量样陕品酶联榜免疫鸭吸附柿法（en收zy肉me嘱-l贩in悉ke槐dim卸mu筋no蓝so熟rb董en佛tas逆sa倍y，EL舅IS栏A）间接绳免疫黄荧光营法（In麻di遇re贸ctim抹mu望no嗽fl末uo据re纷sc床en湾ce，IF臭A）放射赛免疫洲法（ra掘di请oi姓mm萝un单oa剥ss扯ay，RI佩A）双向拼扩散露法第二扑节雷单克哨隆抗站体及买其制拔备酶联斜免疫垮吸附恶法（EL车IS哑A）技术沉原理奥：第二满节排单克进隆抗灶体及雁其制定备四、家克隆抵化常用副克隆种化方隙法：有限竿稀释芽法软琼萄脂平离板法显微福操作扫法80个细/9棕6孔饲养密细胞采（fe菌ed坛er愚c霞el花ls）EL宝IS艘A法检爹测单愈克隆蛙杂交互瘤细漫胞的姨培养巧上清睡，选出旧分泌哈特异手性抗谈体的挣阳性腊孔，煎所分虹泌抗歼体即法为单克向隆抗栽体。第二仇节炸单克他隆抗被体及县其制仅备单克些隆抗杨体（mo敢no乡丰cl春on俩al浊a睬nt缺ib顺od招y，MA虚b）由单谷一克涉隆的反杂交鞠瘤细拔胞分书泌的蜻抗体痕，只绕针对丹于一灿个抗原与决定姨簇--兆--单克涂隆抗炊体（mo颠no妹cl帽on靠al云a病nt始ib拌od尤y，MA军b）单克还隆抗牲体优郑点：高度疼纯一高度颈专一应用笼：疾病蒜的论蹈断和去治疗（生屑物导桨弹）生物悲大分裂子的闯鉴定气、定颜位和财分离月纯化细胞薄器的拌鉴定鹿、定楼位和成分离特定记细胞步或病握毒的业鉴定根、定坊位很招分离第二亲节昆单克芬隆抗穷体及狸其制浓备五、罚单克袖隆抗鞋体的浴大量础制备常用万的大撇规模夜培养偶方法里：动物仆接种娱法转瓶幼培养彼法细胞可培养躬罐法第二泄节摸单克