反相高效液相色谱法测定颈通颗粒中葛根素的含量

反相高效液相色谱法测定颈通颗粒中葛根素的含量【摘要】目的采用反相高效液相色谱法测定颈通颗粒中葛根素的含量。方法采用迪马RP18(mm×150mm，5μm),流动相：甲醇-mol·L-1磷酸溶液，检测波长λ=250nm，柱温30℃，流速1ml/min。结果葛根素在～mg/ml浓度范围内线性关系良好，(r=9)。平均回收率%，RSD=%。结论该方法操作简便，结果可靠，重现性好，可作为该药质量控制的方法。

【关键词】葛根素；颈通颗粒；反相高效液相色谱法

DeterminationofPuerarininJingtongGranulebyRP-HPLC

Abstract：ObjectiveToestablishanRP-HPLCmethodfordeterminationofpuerarininJingtongGranules.MethodsDIKMARP-18column(×150mm,5μm)wasusedwith/Lphosphoricacid(20∶80)asamobilephase.Thedetectionwavelengthwassetat250temperatureofcolumnwasat30℃,andflowratewasml/injectionvolumewas20μl.ResultsThelinearrelationshipofpuerarinwasgoodintherangeof～μg/ml(r=9).Theaveragerecoverywas%，RSD=%(n=5).ConclusionThismethodissimpleandcredible.ItcanbeusedforthequalitycontrolofJingtongGranules.

Keywords：Puerarin；JingtongGranules；RP-HPLC

颈通颗粒是由白芍、葛根、威灵仙、党参、黄芪等12味中草药经提取加工制成，具有益气养血、活血化瘀、散风止痛功效。用于颈椎病引起的颈项疼痛、活动艰难、肩痛、上肢麻木或肌肉萎缩等症。葛根素为其主要有效成分。拟以液相色谱法测定葛根素含量在适当的色谱条件下，供试液中葛根素与相邻组分分离良好，阴性液无干扰。方法的重现性，稳定性，精密度，回收率实验均符合有关规定，因此确立本制剂定量指标为葛根素，测定方法为液相色谱法。

1器材

仪器HITACHI液相色谱仪，HITACHIIntegratorD7500，HITACHIPumpL7150，HITACHIDetectorL7420UVVIS。

对照品葛根素对照品由中国药品生物制品检定所提供。

药品颈通颗粒。

试剂甲醇为分析纯，水为亚沸蒸馏水。

2方法与结果

色谱条件色谱柱：迪马RP18(mm×150mm，5μm)，流动相：甲醇-mol·l-1磷酸溶液，检测波长λ=250nm，柱温30℃，流速1ml/min,进样量20μl。

对照品溶液的制备精密称取葛根素对照品5mg，置50ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀备用。

供试品溶液的制备取本品装量差异项下的内容物，研磨，精密称定，置50ml锥形瓶中，加入甲醇10ml左右，超声波处理10min，离心回收上层溶液，沉淀再加甲醇10ml左右，重复上面操作，连续3次后，将收集到的溶液放冷，用流动相定溶于50ml容量瓶中，备用。

阴性溶液的制备及实验取除葛根素之外的其它药材，按照制备工艺制成空白样品，采用上文中样品的处理方法进行空白样品处理，制成空白溶液；分别取供试品，对照品及空白溶液进样进行峰检测，结果复方除葛根素外的其它药味不干扰葛根素的测定。结果见图1。

线性关系的考察精密称定葛根素适量，用甲醇配制成mg/ml的溶液，作为对照品溶液；依次取对照品溶液，1，2，3，5ml置于10ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀；分别取上述溶液20μl注入液相色谱仪中，记录色谱图，以峰面积对对照品的浓度进行线性回归，其回归方程为Y=×107X－×104，结果表明葛根素进样量在～mg/ml浓度范围内线性关系良好。

精密度实验精密吸取同一葛根素对照品20μl，连续进样5次，峰面积RSD为%。测定结果表明，本试验精密度实验符合有关规定。

重现性实验精密称取同一批复方药材5份，按复方样品供试液的制备方法平行操作，得5份提取液，各取20μl进样，峰面积RSD为%。

测定结果表明，本实验重现性实验符合有关规定。

稳定性实验取同一份供试品溶液，分别在1，2，3，4，5h测定，结果吸收峰面积变化不大，RSD为%。

结果表明供试品制备后5h内稳定，色谱峰面积无明显变化，在此时间内，待测组分化学性质稳定。

回收率实验精密称取阴性溶液5份，分别加入一定量的葛根素对照品，依法制备供试品溶液并测定，计算葛根素的回收率。结果见表1。表1回收率实验结果

测定结果：本方法回收率在%～%之间，RSD为%，符合相关规定。

样品测定取3个批次本品依法配置供式样品并测定葛根素含量，结果见表2。表2样品含量测定结果

3讨论

本实验根据葛根素性质，采用甲醇为溶剂，每次加10ml甲醇,超声波连续提取3次，每次10min，最后1次提取时，甲醇几乎无色，该提取方法明显好于一次加入30ml超声30min的方法，故确立该提取方法。

在供试品的配置方面，为了消除前延峰的干扰，我们采用甲醇配