食品微生物学第六章详解演示文稿

食品微生物学第六章详解演示文稿本文档共135页；当前第1页；编辑于星期二\7点59分优选食品微生物学第六章本文档共135页；当前第2页；编辑于星期二\7点59分传统食品微生物检测：以分离、纯化、培养为基础现代食品微生物检测：新理论、新技术遗传学特性、细胞组分、数值分类快速、灵敏、特异本文档共135页；当前第3页；编辑于星期二\7点59分第一节食品中微生物数量的检测方法检测食品中微生物总数的方法：1）活细胞的标准平板计数法（Standardplatecount,SPC）2）最近似数测定法（mostprobablenumber,MPN）本文档共135页；当前第4页；编辑于星期二\7点59分检测食品中微生物总数的方法：3）染色还原技术估算具有还原能力的各种细胞的总数4）显微镜直接计数法（DMC）本文档共135页；当前第5页；编辑于星期二\7点59分一、传统的SPC方法活细胞的标准平板计数法（Standardplatecount,SPC）菌落总数计数法“活菌”标准方法意义：判定食品被微生物污染的程度及卫生质量，也可观察微生物在食品中生长繁殖的动态。本文档共135页；当前第6页；编辑于星期二\7点59分菌落总数：在一定条件下（需氧、温度、时间、pH…)每克（每毫升）食品检验所生长出来的CFU（菌落形成单位）。本文档共135页；当前第7页；编辑于星期二\7点59分国标规定：在需氧条件下：细菌NA37℃48h霉菌酵母PDA25~28℃5天本文档共135页；当前第8页；编辑于星期二\7点59分测定方法

检测样品的处理稀释倾注（涂布）琼脂平板计数报告本文档共135页；当前第9页；编辑于星期二\7点59分（一）样品采集1、采样原则：代表性防止污染2、采样的种类：大样一整批样品中样200g小样分析的样品（检样）25g本文档共135页；当前第10页；编辑于星期二\7点59分3、采样方法：

无菌操作采样用具必须无菌尽量采集有包装的食品粉末状样品边取样边混合液体样品边振摇边混合冷冻食品保持冷冻状态非冷冻食品保存在0~5℃

本文档共135页；当前第11页；编辑于星期二\7点59分4、采样数量和部位：

200g/件乳制品一瓶（个、罐、听）粮三层五点（表、中、下）油重点采取表层及底层油5、采样标签：名称来源数量编号时间..（二）送检从采样到实验室越快越好

不得超过3h本文档共135页；当前第12页；编辑于星期二\7点59分（三）样品的处理和稀释1）取样无菌操作25g放入225mL灭菌生理盐水的无菌瓶内（1：10稀释液）2）均匀混合均质器本文档共135页；当前第13页；编辑于星期二\7点59分3）稀释4）倾注1ml1ml1ml1ml9ml9ml9ml9ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml本文档共135页；当前第14页；编辑于星期二\7点59分5）倾注平板

稀释液移入平皿后，将46℃~的营养琼脂培养基注入平皿约15mL,转动平皿。空白对照本文档共135页；当前第15页；编辑于星期二\7点59分6）倒置

培养琼脂凝固后，翻转平板细菌37℃48h~霉菌28℃5天本文档共135页；当前第16页；编辑于星期二\7点59分（四）菌落计数法

肉眼观察放大镜TTC（氯化三苯基四氮唑)显色（五）菌落计数的报告报告单位：cfu/g(mL)1、平板菌落数的选择：30~3002、稀释度的选择：本文档共135页；当前第17页；编辑于星期二\7点59分（五）菌落计数的报告3、菌落数的报告：100以内时按实数报告大于100时两位有效数字1640016000本文档共135页；当前第18页；编辑于星期二\7点59分涂布平板法

先倒平板待凝固后，吸取0.1ml稀释液于平板表面上，用灭菌涂布棒在整个平板上均匀涂布，培养观察。本文档共135页；当前第19页；编辑于星期二\7点59分涂布法的优缺点可检测到热敏性菌体菌落形态比较明显更适合于严格的好氧菌没有倾注法简便，易出现菌落重叠、混杂现象本文档共135页；当前第20页；编辑于星期二\7点59分二、旋转接种法（Spiralplatemethod）

1970年FDA原理：接种针将样品液以螺旋方式从平板中央往外连续接种。接种量：0.05mL本文档共135页；当前第21页；编辑于星期二\7点59分优点：可测定50~500000cfu/mL的菌数样品不需事先稀释不需做2个重复接种速度快结果可人工计数，也可用激光计数器计数人力与物力花费成本低廉测定结果与传统方法相关性高本文档共135页；当前第22页；编辑于星期二\7点59分缺点：设备投资较高含颗粒样品容易堵塞管道如果样品的带菌量超出范围则结果准确性降低对琼脂平板表面要求高本文档共135页；当前第23页；编辑于星期二\7点59分菌落计数的其它方法膜过滤MPN染色还原计数法DMC本文档共135页；当前第24页；编辑于星期二\7点59分三、膜过滤SPC方法的改良过滤膜的孔径0.45um收集菌体提高检出率直接显微计数膜过滤与荧光染色方法结合本文档共135页；当前第25页；编辑于星期二\7点59分直接荧光膜技术计数法（DEFT）

DirectEpifluorescentFilterTechnique本文档共135页；当前第26页；编辑于星期二\7点59分DEFT—微菌落计数

仅用于活细胞的检测原理：食品匀液经DEFT膜过滤，膜放在培养基表面，恒温培养至微菌落长出，显微镜观察G-3hG+6h本文档共135页；当前第27页；编辑于星期二\7点59分快速检测技术特殊滤膜（0.5um）过滤样品液滤膜经啶橙染色紫外光显微镜观察活细胞橙色荧光死细胞绿色荧光20~30min本文档共135页；当前第28页；编辑于星期二\7点59分四、最近似数测定法（MPN）

选择3个稀释梯度的稀释液，每种稀释液接种3管（5管）装有培养基的试管中培养，根据实验结果查MPN检索表，得到样品中微生物数量。本文档共135页；当前第29页；编辑于星期二\7点59分

1915年McCrady发明MPN的优点：方法相对简单与SPC相比，相似率较高用选择性培养基可检测特殊的微生物类群测定大肠菌群数量的方法本文档共135页；当前第30页；编辑于星期二\7点59分

MPN的缺点：需要大量的玻璃器皿（特别是5试管实验）不能观察微生物菌落的形态准确性不高本文档共135页；当前第31页；编辑于星期二\7点59分1、大肠菌群（coliformgroup）

领域用语与粪便污染有关的细菌定义：一群需氧及兼性厌氧，在37℃经24h能分解乳糖产酸、产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。

本文档共135页；当前第32页；编辑于星期二\7点59分主要包括：大肠埃希氏菌属（Escherichia）柠檬酸杆菌属（Citrobacter）克雷氏菌属（Klebsiella）产气肠杆菌属（Enterobacter）非典型大肠杆菌典型大肠杆菌本文档共135页；当前第33页；编辑于星期二\7点59分目前，大肠菌群已被我国和许多国家用作食品质量评价的指示菌。一般认为，大肠菌群都是直接或间接来自人与温血动物的粪便。

本文档共135页；当前第34页；编辑于星期二\7点59分2、检测大肠菌群的意义

粪便污染食品的指示菌大肠菌群数的高低，表明粪便污染的程度和对人体健康危害性的大小肠道致病菌污染食品的指示菌

大肠菌群数的高低，表明肠道致病菌存在的可能性大小（并非一定平行！）

本文档共135页；当前第35页；编辑于星期二\7点59分3、大肠菌群检测方法与检验结果

检验结果：用每100mL（g）样品中大肠菌群最近似数来表示，简称大肠菌群MPN.检测方法：乳糖发酵试验、分离培养、证实试验见GB4789.3-1994本文档共135页；当前第36页；编辑于星期二\7点59分五、染色还原计数法一种估计活性微生物数量的方法。原理：活细胞内含有还原酶，可把特定的染料从一种颜色还原为另外一种颜色。本文档共135页；当前第37页；编辑于星期二\7点59分亚甲基蓝（兰色）白色刃天青（暗兰色）粉红色或白色染色还原的时间与样品中微生物浓度成反比两种染料：本文档共135页；当前第38页；编辑于星期二\7点59分应用：乳品工业上原料乳中的微生物检测优点：简便、快捷和经济缺点：不同的微生物还原能力不同，给估算带来了一定的困难。不适用于含有还原酶的食品应用及优、缺点本文档共135页；当前第39页；编辑于星期二\7点59分六、显微直接计数法

（Directmicroscopecount,DMC）一定量的食品（0.001mL）显微镜载玻片（1cm2）烘干、固定、脱脂、染色复式显微镜计数换算本文档共135页；当前第40页；编辑于星期二\7点59分DMC方法的优点快捷、简便能对细胞形态进行分析载玻片易保存，作参考可使用荧光技术增强效果本文档共135页；当前第41页；编辑于星期二\7点59分DMC方法的缺点仅适于检含大量菌体的样品准确性差易造成操作人员的疲劳本文档共135页；当前第42页；编辑于星期二\7点59分七、棉拭子涂抹法

表层微生物的检测应用于食品、公共场所本文档共135页；当前第43页；编辑于星期二\7点59分方法：1）无菌棉拭子蘸取灭菌生理盐水（10mL试管）均匀涂抹样品表面一定面积（5cmX5cm，1cmX1cm）后，放回试管中，及时送检；本文档共135页；当前第44页；编辑于星期二\7点59分2）试管振荡，使微生物悬浮于稀释液中；3）按SPC方法进行梯度稀释、培养、计数。

此外，纸片法……本文档共135页；当前第45页；编辑于星期二\7点59分第二节物理、化学、分子和免疫方法本文档共135页；当前第46页；编辑于星期二\7点59分一、物理方法阻抗测定法微量量热法本文档共135页；当前第47页；编辑于星期二\7点59分（一）阻抗测定法（impedance）

1899年G.N,Stewart估算20世纪70年代应用阻抗：交流电路中导电物质对电流所起的阻碍和抵抗作用，可由电导和电容计算。本文档共135页；当前第48页；编辑于星期二\7点59分原理：微生物可使培养基中电惰性底物，如碳水化合物、蛋白质等营养物质代谢成为电活性产物（乳酸盐或氨等）当微生物生长繁殖时，培养基中的电惰性分子即为许多电活性分子所取代，从而使培养基的电导性增大，培养基的阻抗降低。本文档共135页；当前第49页；编辑于星期二\7点59分检测时间（detectiontime)样品接种后从开始培养到阻抗值发生急剧变化的时间。与原始菌数成反比Bactomer细菌计数器准确率93%10~100个5h~本文档共135页；当前第50页；编辑于星期二\7点59分（二）微量量热法（Microcalorimetry）细菌生长时产生热量测定微小温度变化的仪器—量热计批次型：早期应用流动型：灵敏、快速本文档共135页；当前第51页；编辑于星期二\7点59分二、化学方法（一）热稳定性核酸酶（DNAse）

S.aureusG（+）凝固酶（+）产肠毒素菌株95%产热稳定性核酸酶耐高温本文档共135页；当前第52页；编辑于星期二\7点59分原理：检测食品中热稳定性核酸酶的含量，可以精确计算出金黄色葡萄球菌的数量。本文档共135页；当前第53页；编辑于星期二\7点59分

分光光度法

热稳定性核酸酶是S.aureus生长的标志凝固酵素是产肠毒素菌株的标志本文档共135页；当前第54页；编辑于星期二\7点59分（二）ATP的测定生命体的主要能源细胞中ATP含量恒定ATP测定计数法的原理根据ATP可与从荧火虫中提取的荧光素酶作用发光，发光的总光量与ATP的量成正比。本文档共135页；当前第55页；编辑于星期二\7点59分

光强度推算出细菌细胞数液体发光分光计照度计结果与SPC法一致10~25min本文档共135页；当前第56页；编辑于星期二\7点59分ATP检测法的应用：

检测微生物数量的快速方法医学：尿样的检验环境卫生：表面微生物的测定本文档共135页；当前第57页；编辑于星期二\7点59分（三）辐射测量法（Radiometric）原理

利用细菌在代谢碳水化合物时产生CO2的原理，把微量元素标记到葡萄糖或其他糖类分子中。放射能计数器本文档共135页；当前第58页；编辑于星期二\7点59分放射物的种类C-14葡萄糖C-14甲酸盐C14-谷氨酸盐放射量与菌数成正比检测C-14所需的时间与食品中微生物的含量成反比。本文档共135页；当前第59页；编辑于星期二\7点59分应用医学：“吹口气，查胃病”30min食品：微生物含量高5~6h微生物含量低更厂本文档共135页；当前第60页；编辑于星期二\7点59分三、食品微生物的指纹识别和鉴定

“指纹”概念由于每种微生物的化学组分（DNA、蛋白质）结构、性能有差别及其特异性代谢产物等通过分析技术出现的特征性的图谱本文档共135页；当前第61页；编辑于星期二\7点59分（一）血清学方法特殊的抗体鉴定同源抗原G-菌体（O）抗原鞭毛（H）抗原热稳定性好热稳定性差本文档共135页；当前第62页；编辑于星期二\7点59分抗原（Antigen，Ag）Antigensaremacromoleculesthatelicitanimmuneresponseinthebody.Antigenscanbeproteins

polysaccharides

conjugatesoflipidswithproteins(lipoproteins)andpolysaccharides(glycolipids).本文档共135页；当前第63页；编辑于星期二\7点59分Antibodiesareimmunesystem-relatedproteinscalledimmunoglobulins（Ig）.Eachantibodyconsistsoffourpolypeptides–twoheavychainsandtwolightchainsjoinedtoforma"Y"shapedmolecule.抗体（Antibody，Ab）本文档共135页；当前第64页；编辑于星期二\7点59分Structureofantibody本文档共135页；当前第65页；编辑于星期二\7点59分（二）噬菌体（phage）类型原理：根据噬菌体和它的宿主细菌之间的特殊关系，用已知的噬菌体鉴定其特定的宿主细菌。本文档共135页；当前第66页；编辑于星期二\7点59分（三）分子生物学方法基因探针技术DNA扩增法限制性片段长度多态性技术脉冲场凝胶电泳本文档共135页；当前第67页；编辑于星期二\7点59分1.基因探针技术探针（Probe）：经过标记的一段短核苷酸，用于检测与之同源的核苷酸序列。Probeisashortlabellednucleotideusedtodetecthomologousnucleotidesequence.本文档共135页；当前第68页；编辑于星期二\7点59分Lengthofprobe：

20-1000bpTypeofprobe：

Oligonucleotideprobes（20-40bp）SinglestrandedDNAprobes（200-500bp）DoublestrandedDNAprobes

RNAprobesorRiboprobes本文档共135页；当前第69页；编辑于星期二\7点59分

Radioactive：32P、35S、3H、14CDigoxigenin（Dig）BiotinFluorescentdyeChoiceofLabelling：

Non-radioactive：本文档共135页；当前第70页；编辑于星期二\7点59分UnknownDNA本文档共135页；当前第71页；编辑于星期二\7点59分Colony

hybridization本文档共135页；当前第72页；编辑于星期二\7点59分可检测的细胞数量：106-107

必须进行细胞富集！

探针检测的灵敏度与检测时间细胞数量为108，检测需要10-12h本文档共135页；当前第73页；编辑于星期二\7点59分2.DNA扩增法（1）多聚酶链反应PolymeraseChainReaction，PCR1985年，美国PE-Cetus公司人类遗传学研究室的KaryMullis发明1993年，Mullis获得诺贝尔化学奖本文档共135页；当前第74页；编辑于星期二\7点59分PCR的基本原理DNA的结构DNAdoublehelix本文档共135页；当前第75页；编辑于星期二\7点59分DNA的复制DNAsemi-conservedreplication本文档共135页；当前第76页；编辑于星期二\7点59分本文档共135页；当前第77页；编辑于星期二\7点59分本文档共135页；当前第78页；编辑于星期二\7点59分三步曲：变性（Denaturation）退火（Annealling）延伸（Extension）一个循环（cycle）一般进行25-30个循环PCR反应的三步曲与五要素本文档共135页；当前第79页；编辑于星期二\7点59分Step1：双链DNA热变性（94℃）；Step2：引物与模板单链DNA退火（55℃）；Step3：DNA的聚合延伸反应（72℃）；Step4：扩增的双链DNA再次热变性（返回Step1）。本文档共135页；当前第80页；编辑于星期二\7点59分五要素：●模板DNA（template）●引物（Primer）●DNA聚合酶（Polymerase）●缓冲液（Buffer，Mg++）●脱氧核糖核苷三磷酸（dNTPs）本文档共135页；当前第81页；编辑于星期二\7点59分本文档共135页；当前第82页；编辑于星期二\7点59分循环次数与产物的量实际：Nf=N0（1+Y）N其中Y为扩增效率理论：Nf=N0X2N

其中N为循环次数，N0为起始拷贝数，Nf为最终拷贝数本文档共135页；当前第83页；编辑于星期二\7点59分PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳本文档共135页；当前第84页；编辑于星期二\7点59分Denaturing94oCTemperature100055Time5’3’3’5’本文档共135页；当前第85页；编辑于星期二\7点59分PCRDenaturing94oCTemperature100055Time3’5’5’3’Heat本文档共135页；当前第86页；编辑于星期二\7点59分Denaturing94oCAnnealingPrimers55oCExtension72oCTemperature100055Time3’5’5’3’5’5’Denaturing94oC本文档共135页；当前第87页；编辑于星期二\7点59分Denaturing94oCDenaturingng94oCAnnealingPrimers55oCExtension72oCTemperature100055Time30x3’5’5’3’HeatHeat5’5’5’本文档共135页；当前第88页；编辑于星期二\7点59分Denaturing94oCDenaturing94oCAnnealingPrimers55oCExtension72oCTemperature100055Time30x3’5’5’3’5’5’5’5’5’5’本文档共135页；当前第89页；编辑于星期二\7点59分PCRProductsWithEachThermalCycle0CyclesNumber1382412416532664本文档共135页；当前第90页；编辑于星期二\7点59分（2）随机扩增的多态性DNA

RandomAmplifiedPolymorphicDNA

（RAPD）DevelopedbyWilliamsetal.(1990)using10baseprimerstogeneraterandomfragmentsfromtemplateDNAsRAPDfragmentscanbeseparatedandusedasgeneticmarkersorakindofDNAfingerprint本文档共135页；当前第91页；编辑于星期二\7点59分Tworelatedtechniques:

1.ArbitraryPrimedPCR(AP-PCR)WelshandMcClelland(1990)longerprimers(18-25bases)2.DNAAmplificationFingerprinting(DAF)Caetano-Anollesetal.(1991)veryshortprimers(8bases)本文档共135页；当前第92页；编辑于星期二\7点59分ComponentsofPCRandRAPDRAPD1.Buffer(Mg++)–usuallyhighMg++concentration2.TemplateDNA1shortprimer(10bases)annealstoanyspecificpartofthetemplateDNA4.dNTPs5.TaqPCR1.Buffer(Mg++)2.TemplateDNA2PrimersthatflankthefragmentofDNAtobeamplifieddNTPs5.Taq本文档共135页；当前第93页；编辑于星期二\7点59分TwomodificationsmadetotypicalthermalcyclingwhenRAPDisbeingdone:Annealingtemperaturesaregenerallyverylow,around36°C-ThisallowsveryshortprimerstoannealtotemplateDNAMorethermalcyclesareused,typically45-Thiscompensatesfortheinefficiencywhichresultsfromusingsuchshortprimers.本文档共135页；当前第94页；编辑于星期二\7点59分TemplateDNAPrimerbindstomanylocationsonthetemplateDNAOnlywhenprimerbindingsitesarecloseandorientedinoppositedirectionsotheprimerspointtowardeachotherwillamplificationtakeplaceRAPD本文档共135页；当前第95页；编辑于星期二\7点59分TemplateDNAPrimerspointawayfromeachother,soamplificationwon’thappenRAPD本文档共135页；当前第96页；编辑于星期二\7点59分TemplateDNAPrimerspointinthesamedirection,soamplificationwon’thappenRAPD本文档共135页；当前第97页；编辑于星期二\7点59分TemplateDNAPrimerstoofarapart,soamplificationwon’thappen>2,000basesRAPD本文档共135页；当前第98页；编辑于星期二\7点59分TemplateDNAPrimersarejusttherightdistanceapart,sofragmentisamplified100-1,500basesRAPD本文档共135页；当前第99页；编辑于星期二\7点59分MM2345678910RAPD产物的电泳图谱本文档共135页；当前第100页；编辑于星期二\7点59分PCRMachine本文档共135页；当前第101页；编辑于星期二\7点59分3.限制性片段长度多态性技术（RFLP）RestrictionFragmentLengthPolymorphism（1）限制性内切酶

(Restrictionendonuclease）保护细菌不受外来DNA侵入来自细菌的一种内切酶本文档共135页；当前第102页；编辑于星期二\7点59分限制性内切酶的特点：识别4-8bp特定序列(sitespecific)两股DNA上各产生一个切口回文序列(palindromesequence)5’-GTTACATGAGATCACGGATTC-3’3’-CAATGTACTCTAGTGCCTAAG-5’本文档共135页；当前第103页；编辑于星期二\7点59分产生粘性末端(cohesiveend,stickyend)5’-GTTACATGAG3’-CAATGTACTCTTAAEcoRI5’-TTACATGC3’-AATGTACGGCMspIAATTCACGGATTC-3’GTGCCTAAG-5’CGGACGGAT-3’CTGCCTA-5’5’-GTTACATGAG3’-CAATGTACTCTTAAAATTCACGGATTC–3’GTGCCTAAG-5’5’-TTACATGC3’-AATGTACGGCCGGACGGAT-3’CTGCCTA-5’本文档共135页；当前第104页；编辑于星期二\7点59分5’-ACGGATTCGTT3’-TGCCTAAGCAAHpaI5’-AACTGTCGG3’-TTGACAGCCHaeIIIAACGTTACATGA

3’TTGCAATGTACT

5’CCAGGCTG-3’GGTCCGAC-5’产生平末端(bluntend)5’-ACGGATTCGTT3’-TGCCTAAGCAAAACGTTACATGA

3’TTGCAATGTACT

5’5’-AACTGTCGG3’-TTGACAGCCCCAGGCTG-3’GGTCCGAC-5’本文档共135页；当前第105页；编辑于星期二\7点59分（2）限制性图谱

(Restrictionmap）本文档共135页；当前第106页；编辑于星期二\7点59分（3）限制性片段长度多态性

(RFLP）本文档共135页；当前第107页；编辑于星期二\7点59分本文档共135页；当前第108页；编辑于星期二\7点59分4.脉冲场凝胶电泳技术PulsedFieldGelElectrophoresis（PFGE）本文档共135页；当前第109页；编辑于星期二\7点59分本文档共135页；当前第110页；编辑于星期二\7点59分四、免疫学方法精确性(Accurate)灵敏性(Sensitive)特异性(Specific)本文档共135页；当前第111页；编辑于星期二\7点59分（一）荧光抗体法（FA）（Fluorescenceantibody）1942年创立，在食品和医学微生物中应用广泛。原理：抗体与荧光物质结合而带有荧光，与相应抗原结合后，在荧光显微镜下可以观察，也可计数。本文档共135页；当前第112页；编辑于星期二\7点59分荧光素：异硫氰酸荧光素（FITC）若丹名B（RhodamineB）本文档共135页；当前第113页；编辑于星期二\7点59分（二）沙门氏菌1-2实验（1-2Test）原理：血清学原理,即抗原抗体结合形成肉眼可见的免疫带。一种检测有动力的沙门氏菌的方法本文档共135页；当前第114页；编辑于星期二\7点59分在一个特殊的含两个容器的塑料设备中进行：一个容器中装有选择性液体培养基，另一个中装有非选择性运动性培养基（半固体），并含有鞭毛抗体。恒温培养时，运动性沙门氏菌经选择性培养后进入非选择性培养基，并与其中的抗体结合形成免疫带。本文档共135页；当前第115页；编辑于星期二\7点59分Inoculationchamber本文档共135页；当前第116页；编辑于星期二\7点59分优点：将血清学反应和生化增菌过程结合起来，特异性强；不需特殊实验室条件，简便；8-14小时内得出结果，快速。缺点：不能检测非运动型沙门氏菌，免疫条带的判断有主观因素。本文档共135页；当前第117页；编辑于星期二\7点59分（三）酶联免疫吸附剂测定

EnzymeLinkedImmunosorbentAssay1971年Engvall和Perlmann（ELISA）canmeasureantibodiesorantigensinexpensive,rapid,quantitative,specificsensitive(pg/ml)expensiveequipmentnotrequiredcanbeautomated本文档共135页；当前第118页；编辑于星期二\7点59分ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。原理：本文档共135页；当前第