第十一章革兰氏阴性需氧杆菌详解演示文稿

第十一章革兰氏阴性需氧杆菌详解演示文稿本文档共52页；当前第1页；编辑于星期三\13点52分优选第十一章革兰氏阴性需氧杆菌本文档共52页；当前第2页；编辑于星期三\13点52分第一节布氏杆菌属（Brucella）布氏杆菌是多种动物和人布氏杆菌病的病原。该菌不仅危害畜牧生产，而且严重损害人类健康，因此在医学或兽医学领域都极为重视。本文档共52页；当前第3页；编辑于星期三\13点52分一、主要生物学特性

（一）形态及染色

球杆状或短杆状，长0.6～1.5μm，多单在。不形成芽孢和荚膜，无鞭毛不运动。革兰氏染色阴性。柯氏染色法布氏杆菌呈红色，其他菌呈绿色或蓝色。本文档共52页；当前第4页；编辑于星期三\13点52分布氏杆菌本文档共52页；当前第5页；编辑于星期三\13点52分（二）生长要求与培养特性

生长要求初代分离营养要求较高，培养基中常需加入血清、血液、肝汤、葡萄糖或泛酸钙和赤藓醇等。需氧，适温37℃，最适pH6.6～7.4。流产布氏杆菌和绵羊布氏杆菌初代分离时尚需5％～10％CO2环境。本文档共52页；当前第6页；编辑于星期三\13点52分培养特性

初次分离时生长缓慢，需5～10d甚至20～30d才能长出菌落，但实验室传代保存的菌株，培养48～72h即可生长良好。肝汤肉汤呈轻微浑浊生长，无菌膜。但培养日久，可形成菌环。血清肝汤琼脂形成无色透明、隆起、光滑、湿润、有光泽、边缘整齐的圆形小菌落。直径0.5～1.0mm。本文档共52页；当前第7页；编辑于星期三\13点52分（三）生化反应

本菌能分解尿素，能产生硫化氢。根据不同生物型产生硫化氢的情况、脲酶作用时间和对碱性染料抑制作用的敏感性不同，可鉴别不同种型的布氏杆菌。本文档共52页；当前第8页；编辑于星期三\13点52分（四）种和生物型

种

型流产布氏杆菌（Br.abortus）1、2、3、4、5、6、7型

马尔他布氏杆菌（Br.melitensis）1、2、3型猪布氏杆菌（Br.suis）1、2、3、4、5型绵羊布氏杆菌（Br.ovis）1个沙林鼠布氏杆菌（Br.neotomae）1个犬布氏杆菌（Br.canis）1个田鼠布氏杆菌（Br.microti）？牛布氏杆菌（Br.ovis）？海豹布氏杆菌（Br.pinnipediae）

？海豚布氏杆菌（Br.cetacease）

？本文档共52页；当前第9页；编辑于星期三\13点52分（五）抗原性布氏杆菌具有A和M两种表面抗原，两者的含量在不同的种型间有差异。流产布氏杆菌以A抗原为主，马尔他布氏杆菌以M抗原为主，而猪布氏杆菌两种抗原含量相近。A抗原和M抗原分别能与相应的单相抗血清发生凝集反应。可用凝集试验鉴别两种不同的抗原。本文档共52页；当前第10页；编辑于星期三\13点52分

二、致病性本菌致布氏杆菌病，可感染60多种动物，包括人类、各种家畜、野生哺乳动物、啮齿动物、鸟类、爬虫类、两栖类和鱼类。细菌通过皮肤、口腔、眼结膜、阴道粘膜等部位侵入体内。多数动物为隐性感染。实验动物中，豚鼠最易感，小鼠和家兔也可感染。本文档共52页；当前第11页；编辑于星期三\13点52分本病特征母畜生殖器官和胎盘发炎，引起流产、不孕和多种组织的慢性炎症（如慢性子宫内膜炎、乳房炎、关节炎等）。公畜睾丸炎、副睾炎幼畜关节炎本文档共52页；当前第12页；编辑于星期三\13点52分流产母牛从阴道排出污灰色或棕红色有恶臭的分泌物本文档共52页；当前第13页；编辑于星期三\13点52分病母牛流产，产出发育较为完全的死胎本文档共52页；当前第14页；编辑于星期三\13点52分病牛流产，产出发育不全的胎儿，全身肿胀，有出血斑本文档共52页；当前第15页；编辑于星期三\13点52分流产的胎儿及胎衣本文档共52页；当前第16页；编辑于星期三\13点52分胎衣水肿增厚，呈胶样浸润，子叶上有出血本文档共52页；当前第17页；编辑于星期三\13点52分感染羊阴囊胀大、水肿本文档共52页；当前第18页；编辑于星期三\13点52分病公猪睾丸肿大本文档共52页；当前第19页；编辑于星期三\13点52分病猪睾丸萎缩本文档共52页；当前第20页；编辑于星期三\13点52分本文档共52页；当前第21页；编辑于星期三\13点52分本文档共52页；当前第22页；编辑于星期三\13点52分本文档共52页；当前第23页；编辑于星期三\13点52分病猪关节肿胀本文档共52页；当前第24页；编辑于星期三\13点52分

三、微生物学诊断布氏杆菌病常表现为慢性或隐性感染，其诊断和检疫主要依靠血清学检查及变态反应检查。细菌学检查仅用于发生流产的动物和其他特殊情况。本文档共52页；当前第25页；编辑于星期三\13点52分（一）细菌学检查

1、病料

流产胎儿的胃内容物、胎盘、羊水、阴道分泌物、乳汁和尿液等。

2、诊断方法病料柯氏染色涂片镜检分离培养纯培养鉴定豚鼠血清抗体本文档共52页；当前第26页；编辑于星期三\13点52分（二）血清学检查1、用已知抗体检测抗原

用已知抗体检查病料中的布氏杆菌，或鉴定分离菌是否为布氏杆菌可用：荧光抗体技术反向间接血凝试验间接炭凝集试验免疫酶组化法本文档共52页；当前第27页；编辑于星期三\13点52分2、用已知抗原检测抗体

动物感染该菌7～15d出现抗体，检测抗体是布病诊断和检疫的主要手段。方法：玻板凝集试验虎红平板凝集试验乳汁环状试验试管凝集试验补体结合试验本文档共52页；当前第28页；编辑于星期三\13点52分试管凝集试验

操作按检疫规程进行。牛、马、骆驼血清凝集价1:100时判为阳性，1:50为可疑。羊、猪、狗等血清凝集价1:50为阳性，1:25为可疑。可疑病畜于3～4周后采血重检，如仍为可疑反应，牛、羊即可按阳性处理；猪、马则须视情况而定。本文档共52页；当前第29页；编辑于星期三\13点52分虎红平板凝集试验取被检血清和虎红平板抗原各0.03ml，滴加于玻板上，混匀，在4～10min内出现任何程度凝集者即为阳性反应。乳汁环状试验为检查新鲜乳汁中抗体的方法，操作简便，准确性较高，常被用于畜群布氏杆菌病的监测。本文档共52页；当前第30页；编辑于星期三\13点52分补体结合试验特异性和敏感性均较凝集试验高，是慢性布氏杆菌病一种可靠的诊断方法，已作为世界各国清除病畜的必要手段。规定1:10被检血清阻止溶血在50％以上，即为阳性反应。因补体结合反应的操作方法复杂，只在特殊情况下才应用。本文档共52页；当前第31页；编辑于星期三\13点52分（三）变态反应检查变态反应现象一般在感染后的20～25d出现，因此不宜作早期诊断。本法适合于动物的大群检疫，主要用于绵羊和山羊，其次为猪。检测时，将布氏杆菌水解素0.2ml注射于羊尾根皱襞部或猪耳根部皮内，24及48h后各观察反应一次。若注射部发生红肿，即判为阳性反应。此法对慢性病例的检出率较高。本文档共52页；当前第32页；编辑于星期三\13点52分四、免疫防治我国目前用的疫苗：M5弱毒活菌苗可用于牛、羊和鹿布病的预防。皮下注射或气雾免疫。免疫期羊1年半，牛、鹿各为1年。M90弱毒活菌苗同M5弱毒活菌苗。S2弱毒活菌苗可用于猪、羊、牛等动物，甚至可以接种怀孕动物而不引起流产。免疫方法采用饮水、气雾和皮下注射3种。免疫期猪为1年，牛和羊均为2年。本文档共52页；当前第33页；编辑于星期三\13点52分第二节伯克氏菌属（Burkholderia）是新建立的一个属，该属成员来自假单胞菌属Ⅱ群，现有30多种细菌，对人畜致病的主要有鼻疽伯克氏菌及伪鼻疽伯克氏菌。本文档共52页；当前第34页；编辑于星期三\13点52分一、鼻疽伯克氏菌（B.mallei）鼻疽伯克氏菌，原名鼻疽假单胞菌，惯称鼻疽杆菌，为马、骡、驴等单蹄兽鼻疽病的病原体，也能感染人及其他家畜和多种野生动物。此病可呈急性或慢性经过，病变特征为皮肤、鼻腔粘膜、肺脏及其他实质器官形成典型的鼻疽结节和溃疡。本文档共52页；当前第35页；编辑于星期三\13点52分（一）形态及染色

G－中等大小杆菌，无芽孢、无荚膜、不运动。单独散在。美蓝染色可见异染颗粒，是本菌的形态特征。本文档共52页；当前第36页；编辑于星期三\13点52分（二）生长要求及培养特性

生长要求专性需氧，普通培养基中生长缓慢，加入适量甘油、血红蛋白、血液、血清或葡萄糖可促进生长，适温37℃，最适pH为6.4～6.8。本文档共52页；当前第37页；编辑于星期三\13点52分培养特性

甘油肉汤均匀浑浊生长，并逐渐形成灰白色粘稠沉淀，10～15d后液面形成灰白色菌环或菌膜。甘油琼脂24～48h后，形成灰白色至灰黄色中等大小菌落，直径2-3mm。

马铃薯琼脂斜面：48h后，可出现棕黄色蜂蜜样的粘稠菌苔，随着时间的延长色泽逐渐变深。本文档共52页；当前第38页；编辑于星期三\13点52分（三）致病性本菌在自然条件下主要感染马、骡、驴等单蹄兽，引起鼻疽病。骆驼、犬、猫等家畜以及狮、虎、豹、狼、狐、貂等野兽也可感染。牛、猪、绵羊、山羊及禽类不感染。人类偶尔也可经创伤或吸入含菌材料而受感染，并引起致死性疾病。本文档共52页；当前第39页；编辑于星期三\13点52分实验动物猫和仓鼠最易感，豚鼠次之。接种细菌于雄性豚鼠腹腔后可引起典型的睾丸炎，睾丸肿胀化脓而后破溃，此反应称为：Strauss反应，具有一定诊断价值。

Strauss反应本文档共52页；当前第40页；编辑于星期三\13点52分（四）微生物学诊断包括细菌学检查、血清学检查和变态反应检查。在进行大规模检疫时主要采用临床检查、变态反应和补反相配合的检查方法，其中任何一种呈阳性，都定为鼻疽病马。而细菌学检查只有在特殊病例才被应用。本文档共52页；当前第41页；编辑于星期三\13点52分1、变态反应检查是鼻疽诊断和检疫最常用的方法，所用诊断试剂为鼻疽菌素（mallein）。马感染鼻疽菌后2～3周,对鼻疽菌素呈现阳性反应，以后随着病程的发展反应逐渐增强。病马保持变态反的时间有的可达8～10年，甚至终生。因此，该方法在鼻疽诊断、检疫和流行病学调查上是一种必不可少的手段。本文档共52页；当前第42页；编辑于星期三\13点52分变态反应诊断点眼反应眼睑试验皮下试验皮肤试验喷雾诊断其中以点眼法最为常用。为我国检疫规程主要采用方法。本文档共52页；当前第43页；编辑于星期三\13点52分点眼法是将鼻疽菌素3～4滴滴入马匹一则眼结膜囊内，分别于点眼后3、6、9及24h观察反应。如眼结膜红肿并排出脓性分泌物，即为阳性反应；结膜无反应或轻度潮红、流泪或有少量的粘性分泌物判为阴性。本文档共52页；当前第44页；编辑于星期三\13点52分点眼法操作简便，特异性和检出率都很高，无论是对急性、慢性以及开放型和隐性感染的马匹均可检出。故此法最适合于畜群大批检疫，尤其是以5～6d的间隔反复点眼，检出率更高。所以点眼一般连续3次，每次间隔5～6天。点眼法对骡子的检出率较低。驴的眼结膜对鼻疽菌素不敏感，一般检不出。此外，1～2的幼马驹眼结膜对鼻疽菌素也不敏感。本文档共52页；当前第45页；编辑于星期三\13点52分马、骡三次点眼检出率第一次（%）第二次（%）第三次（%）马60～709598骡16.960.789.3本文档共52页；当前第46页；编辑于星期三\13点52分2、血清学检查常用补体结合反应。此法特异性很高，凡补反呈阳性的马，剖检时95％～99％都有鼻疽病变。但本反应检出率较低，只能检出大多数活动型鼻疽马；而对于点眼阳性但无临床症状的马只能检出10％～25％左右。因此，补反只能作为鼻疽菌素点眼的一种辅助诊断方法，用来检出其中的活动型病马，而不能代替鼻疽菌素点眼试验。本文档共52页；当前第47页；编辑于星期三\13点52分五、免疫防治对于鼻疽免疫，迄今为止还没有研制出可供实用的有效菌苗。一般防制措施是采用全面检疫，然后将检出的开放性鼻疽病马予以扑杀或隔离治疗后划地使役，将检出的非开放性阳性病马划地隔离使役，并培养健康幼驹以更新畜群。本文档共52页；当前第48页；编辑于星期三