呼吸道病毒标本采集与转运-防疫课件

济南市疾病预防控制中心JinanMunicipalCenterForDiseaseControl&Prevention呼吸道病毒标本采集与转运病毒性疾病检验所2020-2021年全省呼吸道组工作要点每所哨点医院2020年至少采集1200份流感样病例标本的采集任务指标每周至少采集20份流感样病例标本，每月至少完成100份流感样病例标本采集工作完成所有标本的流感病毒和新冠的核酸检测标本采集标本采集的主要内容一、标本种类二、采样前准备三、医生防护四、咽拭子的采集方法五、鼻咽拭子的采集方法六、下呼吸道样本的采集七、血液标本采集八、粪便标本的采集九、尸检标本的采集十、不合格样本的处理一、标本种类临床样本种类血液、体液、分泌物、排泄物、组织病原微生物现场采集的样本全血、血清咽拭子、鼻咽拭子、痰液、鼻咽洗液粪便、肛拭子疱疹液活检组织、尸检组织一、标本种类咽拭子标本从咽部和双侧扁桃体处取分泌物样本。鼻咽拭子标本是通过鼻腔到达鼻咽后壁取分泌物的样本。用以检测可能引起疾病的多种呼吸道病毒或细菌。注：拭子尖端必须是聚酯纤维、人造丝或尼龙绒。不可使用木柄材质棉签，木柄容易导致某些病毒失活；脱脂棉含有荧光物质，容易干扰荧光定量PCR反应结果。二、准备物品无菌采样拭子和采样管标签或记号笔个人防护装备（专门的部分）病人信息登记表带盖废物箱签字笔生物安全垃圾袋锐器盒（如何采血）拭子选择（品牌型号仅用于参考）三、医生防护根据疾病的防控要求，在充分做好个人防护的前提下对病人进行采样操作。KN95及以上防护级别的口罩防护面屏乳胶（丁腈）手套防护服鞋套三、医生防护防护措施：标本采集人员防护：低风险地区，二级防护（隔离衣、N95口罩、防护眼罩或面屏、手套）标本运送人员：一级防护（医用外科口罩、工作服、手套）标本接收人员：二级防护标本检测人员：三级防护四、咽拭子的采集方法咽拭子：先嘱病人放松，张口发“啊”音，暴露咽喉（必要时使用压舌板），用拭子擦拭双侧扁桃体及悬雍垂后部的咽后壁，采样过程不要过快，保持2-3秒或者擦拭2-3下（注意不要碰到舌部），使拭子头充分吸收分泌物，然后将拭子头浸入含3ml病毒保存液的管中，沿着断点折断拭子或无菌操作剪断拭子，盖紧管子。四、咽拭子的采集方法五、鼻咽拭子的采集方法1、告知患者采样过程中可能会感到轻微不适或有打喷嚏的冲动，以取得患者的配合。实际上患者越放松不适感越轻微。2、患者直立在床边或坐直在椅子上。请患者先擤干净鼻涕以清理鼻腔通道。3、请患者略微抬起头部，面对采样医生；防喷嚏喷溅考虑，采样者也可以立于患者体侧，选择自己的顺手位：比如右利者站于患者右侧，反之亦然。侧位采样遇到患者喷嚏可以及时躲开。五、鼻咽拭子的采集方法4、打开包装，取出无菌拭子，注意不要触碰污染拭子头部。5、轻轻地将拭子以垂直面部角度插进鼻孔约8-10厘米的抵达鼻咽后壁（可明显感觉到触墙壁感，即插到底）。将拭子旋转一周并保持数秒以吸收更多分泌物，轻轻拔出拭子。五、鼻咽拭子的采集方法注意：拭子进入深度大约等于鼻孔至耳垂距离，如图所示。不要用转运管中液体沾湿拭子，否则会降低病毒载量，致假阴性使用细长易弯曲、以及拭子头较小的拭子，提高病人的耐受力。五、鼻咽拭子的采集方法6、取下采样管盖子，小心插入拭子，沿着断点折断拭子或无菌操作剪断拭子，盖紧管子。7、同样方法采集另一鼻孔，放入同一采样管（双侧采集有利于提高病原体检出率）。8、在标本上做好必要的标记。六、下呼吸道标本深咳痰液：要求病人深咳后，将咳出的痰液收集于含3ml采样液的50ml螺口塑料管中。住院重症病例建议采集下呼吸道分泌物，使用与负压泵（呼吸机）相连的收集器从鼻咽部抽取粘液（支气管灌洗液/肺泡灌洗液）深咳痰液等下呼吸道标本的阳性率高于上呼吸道标本。采集人感染高致病性禽流感疑似病人标本，重点采集下呼吸道标本。七、血液样本的采集

采集血液标本：采取正确的姿势，并按检测目的来确定是否采集血清或是全血。八、

粪便标本的采集在急性腹泻期及用药前，采集自然排出的新鲜粪便。成型粪便至少取蚕豆大小粪块一块（约3-5g，大拇指大小）液体粪便采取水样便或含絮状物的液体粪便2-5ml粘液脓血便挑取黏液或脓血部分3-5g采样时勿将尿液或水混入粪便或容器内采样完成后立即旋紧螺旋盖。八、

粪便标本的采集肛拭子—若无法获得粪便，可用保存液湿润过的拭子插入肛门4-5cm深处（小儿2-3cm）轻轻转动一圈，擦取直肠表面的黏液后取出，放入病毒采样液中送检。九、尸检标本的采集病人死亡后越早采集越好。采集感染部位标本（如脑、肝、肺和肠等重要组织），每一采集部位分别使用单独的消毒器械。每种组织应多部位取材，每部位应取2-3份约5-10g，分别置于装有相应培养基的无菌容器中。十、不合格样本处理在采样日志上注明，写清楚不合格的原因，妥善处理采集到的样品是非常珍贵的，尤其是疫情标本，不能够轻易拒绝或丢弃标本，仍需要与采样人员明确说明后妥善保存重大疫情采样如果出现不合格样本，应该及时向上级汇报实验检测进行中发现的无法检测的样本分析无法检测原因；判断排查是样本质量问题还是保存问题，如：样本降解、严重污染等保留相应的书面证据对样本做出妥当处置决定或找到弥补措施及时通知采样者或被检测者标本无法检测，并说明理由可能的情况下再次采集标本样本采集的注意事项1、做好自我防护，自我防护是第一位2、操作要细心，防止标本之间交叉污染，一份标本采集完毕以后要拧紧管盖再采集下一份。3、根据病例定义选择病例样本（流感样病例定义）3、采集标本的手法要正确、到位。咽拭子的采集要有一定的力度和速度，鼻咽拭子的采集要缓慢轻柔。4、标本采集完成后应迅速至于2-8℃环境保存，流感哨点采集的流感样病例样本需在48小时内送至实验室，如果来不及就保存在-70℃冰箱。5、标本管上的姓名、编号写清楚、完整，样本类型写清楚，（肛拭子和鼻、咽拭子容易分不清）。6、血标本采集时间要掌握好，急性期7天内，恢复期2-4周。标本正确采集的重要性

一、生物标本采集的“四大原则”二、五个“好”一、生物标本采集的四大原则防护原则：人员要求：经过生物安全培训具备相应的技能个人防护：按照疫情级别选择不同的防护措施和消毒措施污染废弃物的处理：按照产生的废弃物选择不同的处理方式样本容器：选择合适的标本采集试剂和样本容器一、生物标本采集的四大原则采集原则：与病例的必要沟通：与病例沟通，以便在合适时间内采样。专业指导和支持：专业人员采样，选用合适的采样器现场采样：选择合适的采样试剂、正确的采样方式、正确的现场保存方式。采样时间：根据不同的微生物检测方法，选择在合适的时间内采集标本。特殊样本的采样要求：如采集鼻咽拭子开展PCR检测，就需使用灭菌的人造纤维拭子，而非棉棒（含有核酸扩增抑制剂）一、生物标本采集的四大原则运输原则：运送基本要求：需要满足生物安全相应法规等样本标识：样本的相关信息及检测目的等运送温度和时间：根据不同病原微生物标本种类和保存方式选择不同的运送温度贮存原则：

温度管理二、五个“好”“五个好”：好的采样对象好的采集时机好的采集部位好的采集手法好的保藏手段“五个好”缺一不可。病毒活性的影响。二、五个“好”好的采样对象：纳入标准准确，如流感样病例标本采集符合流感样病例定义，且必须在发病3天以内。采样过程中全程配合：如采集咽拭子、鼻拭子过程中无抵触情绪。好的采集时间根据不同的检测方法在不同的时间点采集相应的标本。如：在传染期采集标本可以开展病毒分离，检测IgG抗体必须采集恢复期的血清标本。二、五个“好”好的采样手法：正确的标本采集方法采样人员的态度在一定程度上也决定了标本质量的好坏好的保藏手段，包括运输时间、温度和保存时间和温度：用于病毒分离的样本，尽量早做检测，如果24小时内可接种，应放4℃冷藏保存，最长不超过48小时。若长期储存，应放-70℃冷冻保存。检测抗体的样本，在4℃下可保存约一周，最长10天，超过1周必须在-20℃冻存。样本应避免反复冻融！有关标本采集、保存、运输的记录填写采样填写采样管上标记编号与送检表标记编号要一致。流感样病例样本的编号7位数要写完整，同时要标明病例姓名和采集日期。血清管的编号和姓名要与标本采样管相对应以外，还要加上标记“A”（Acute）急性期或“C”（Convalescence）恢复期。同时填写流感/人禽流感监测病例标本原始登记送检表流感样病例聚集和暴发疫情的采样要求1、定义：1周内，在同一学校、幼托机构或其他集体单位出现10例及以上流感样病例。2、样本采集：每一起暴发疫情至少采集10份呼吸道标本；急性期和恢复期血清标本。重症和死亡病例标本尽量全部采集。3、样本转运：样本采集后在2℃-8℃条件下暂存，于24小时内送至网络实验室。附送送检单纸质版或者发电子版到邮箱。血清标本可暂冻存在-20℃以下冰箱。4、同时在疫情24小时内登陆中国流感监测信息系统将标本信息录入，并与疫情相关联。流感样病例聚集和暴发疫情暴发疫情病例号码编写规则“区县编码+年份后两位+样本序号”举例：2020年市中区流感暴发病例样本编码应为0320001.注意：天桥、槐荫、章丘由于有哨点医院送流感常规病例样本，所以送流感暴发样本的时候，编号在区县编码后面加上bf两个字母以用以区分。举例：2018年天桥区流感暴发病例样本编码应为0520bf001职业暴露人群血清学和环境高致病性禽流感的样本采集要求血清样本采集及送样要求1、采集时间：每年冬春季（10月-次年3月）2、样本管壁写完整编号3、每份血清在无菌条件下分装为3份，有1管不少于1ml，另外两管不少于500ul，可在市疾控实验室领取血清冻存管。4、附送送检单纸质版或者发电子版到邮箱禽流感外环境样本采样点的选择城乡活禽市场：每个摊位为一个采样点家禽养殖场：每间（排）禽舍为一个采样点家禽散养户：每个家禽散养户为一个采样点家禽屠宰加工厂：每个屠宰、加工间为一个采样点外环境样本的采集水标本，禽类活动或笼具旁边的水沟或水池笼具表面标本，一个笼具采集一份，可多个拭子充分擦拭表面放入同一个采样管宰杀或摆放禽肉案板表面的擦拭标本粪便标本，采集新鲜禽类粪便3-5g，放入采样管中清洗禽类的污水，混匀后采集禽类饮用水，混匀后采集其他：地面污水、地面灰尘及笼具垫草等外环境样本送样及注意事项1、标本采集后应在4℃条件下48小时运送至实验室。2、管壁写清编号，附纸质版送检单或者电子版发到邮箱。3、禽类粪便应采集新鲜湿便，病毒活性较高。4、禽类粪便标本和表面擦拭标本均置于含有保存液的样本管中。5、屠宰水等水样标本保存在15ml离心管中。混采方案（10合1）

为有效满足疫情常态化防控需求，颁布10合1混采检测技术规范：将采集自10人的10支拭子集合于1个采样管中进行核酸检测的方法。以提高核酸检测能力和效率。病毒采样管：试管外径14.6～15mmx100.1～100.9mm；管帽外径：15.65～15.95mm；高度：12～13mm。容量企业定标10ml，内含6ml胍盐或其他有效病毒灭活剂的保存液。采样拭子：选用聚酯、尼龙等非棉质、非藻酸钙材质的拭子。设置等候区、采集区、缓冲区和临时隔离区采集方法：单采后置于同一采样管中送检：2-4小时标本保存和运送样本的保存及运送暂存：能在24小时内送检的样本可置于4℃保存，应设立专库或专柜单独保存样本。注意：暂存样本的冰箱注意消毒包装要求：新型冠状病毒毒株或其他潜在感染性生物材料的运输包装分类属于A类，对应的联合国编号为UN2814。环境样本属于B类，对应的联合国编号为UN3373。运输箱A类三层包装运送过程1.将密闭后的样本容器外注明编号、种类、姓名及采样日期,放入大小合适的密封袋内，每袋装一份样本。2.将样本放入第二层包装，最后放入转运箱中。3.外层包装可使用1000mg/L的含氯