胃癌Her2的检测南京军区总医院周晓军主任

胃癌HER2的标准化检测周晓军南京军区南京总医院本文档共53页；当前第1页；编辑于星期日\23点47分本文档共53页；当前第2页；编辑于星期日\23点47分本文档共53页；当前第3页；编辑于星期日\23点47分本文档共53页；当前第4页；编辑于星期日\23点47分HER2，又名HER2/neu，c-erbB-2，表皮生长因子受体（EGFR）家族成员；原癌基因，位于17q21，编码相对分子量185KD的跨膜糖蛋白（跨膜酪氨酸激酶受体，表皮生长因子样分子），在细胞表面表达；通过参与信号传道通路的一系列活动影响细胞的增殖与分化。HER2基因本文档共53页；当前第5页；编辑于星期日\23点47分信号传导至细胞核细胞核接合部酪氨酸激酶活性部分细胞浆细胞膜生长因子（配体）癌基因活化细胞分裂

HER2受体跨膜二聚体的信号传导途径本文档共53页；当前第6页；编辑于星期日\23点47分1=­基因拷贝数2=­

mRNA转录3=­细胞表面受体蛋白表达4=­细胞外受体功能域释放A=HER2DNAB=HER2mRNAC=HER2receptorprotein正常扩增/过度表达细胞核细胞质细胞膜1234CBAHER2过度表达：正常状态的10-100倍本文档共53页；当前第7页；编辑于星期日\23点47分

HER2癌基因的致瘤机制：抑制凋亡，促进增殖；增加肿瘤细胞的侵袭力；促进肿瘤血管新生和淋巴管新生。研究表明：30％以上的人类肿瘤中存在HER2基因的扩增/过度表达（如乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、输卵管癌、胃癌和前列腺癌等);

胃癌中HER-2/neu基因的过表达率为7%-27%(-45%)，通过FISH检测基因扩增率为10%-20%本文档共53页；当前第8页；编辑于星期日\23点47分胃癌组织学类型(WHO2000)：

1．管状腺癌（adenocarcinoma）最多见。分高、中、低分化，此型癌多为高分化，恶性度较低，转移较晚。2．乳头状腺癌（papillaryform）：腺腔内出现许多乳头。3．印戒细胞癌（signet-ringcell）：癌细胞胞浆内出现大量偏酸性粘液，常将胞核挤压于癌细胞浆之一侧，形似戒指，故称之为印戒细胞癌。4…….

本文档共53页；当前第9页；编辑于星期日\23点47分Lauren分型(1965):根据胃癌细胞形态和胃癌组织中粘液性质将胃癌分为肠型和弥漫型两大类。肠型胃癌中唾液酸粘液及硫酸粘液多见，发生于肠化生上皮；肠型胃癌多见于老年患者，恶性度较低，分化程度差别大，与肿瘤大小反比，组织学上多为乳头状腺癌或腺管状腺癌。弥漫型胃癌中中性粘液多见。弥漫型胃癌多见于青年人，恶性度较高，肉眼类型多为皮革胃，组织学上多为粘液细胞癌（印戒细胞癌）及未分化癌。Ming（1977）：膨胀型VS浸润型本文档共53页；当前第10页；编辑于星期日\23点47分本文档共53页；当前第11页；编辑于星期日\23点47分本文档共53页；当前第12页；编辑于星期日\23点47分胃癌HER2检测本文档共53页；当前第13页；编辑于星期日\23点47分本文档共53页；当前第14页；编辑于星期日\23点47分本文档共53页；当前第15页；编辑于星期日\23点47分本文档共53页；当前第16页；编辑于星期日\23点47分本文档共53页；当前第17页；编辑于星期日\23点47分HER2geneHER2geneHER2gene双链靶基因变性的单链DNA与荧光标记探针复性\产生荧光信号荧光原位杂交法原理FluorescenceinsituHybridisation(FISH)本文档共53页；当前第18页；编辑于星期日\23点47分本文档共53页；当前第19页；编辑于星期日\23点47分HER2probeCEP17probeHER2/CEP17ratio=1HER2/CEP17ratio=1HER2/CEP17ratio=7NoamplificationNoamplification;tetraploidyHER2geneamplification(ratio>2.2)本文档共53页；当前第20页；编辑于星期日\23点47分比值<2.2提示Her-2无扩增本文档共53页；当前第21页；编辑于星期日\23点47分比值>2.2提示Her-2有扩增本文档共53页；当前第22页；编辑于星期日\23点47分比值介于1.8～2.2临界值本文档共53页；当前第23页；编辑于星期日\23点47分Aneusomy,Notamplified本文档共53页；当前第24页；编辑于星期日\23点47分本文档共53页；当前第25页；编辑于星期日\23点47分DenaturetargetDNA

andhybridiseprobePrimaryantibodybindstotheprobeSecondaryantibody

(withunactivated

visualisationagent)

bindstoprimaryantibody色素原位杂交法原理

chromogenicinsituhybridization(CISH)本文档共53页；当前第26页；编辑于星期日\23点47分

CISH：无HER2基因扩增本文档共53页；当前第27页；编辑于星期日\23点47分CISH：HER2基因低扩增

本文档共53页；当前第28页；编辑于星期日\23点47分CISH：HER2基因高拷贝扩增

本文档共53页；当前第29页；编辑于星期日\23点47分本文档共53页；当前第30页；编辑于星期日\23点47分IHC检测:抗原修复有/无组织固定方法抗体选择评分标准变异性本文档共53页；当前第31页；编辑于星期日\23点47分本文档共53页；当前第32页；编辑于星期日\23点47分IHCvsFISHC-erbB2scoreGeneamplificationbyFISH04%17%210-35%3>90%本文档共53页；当前第33页；编辑于星期日\23点47分Fig.1HER-2proteinexpressionevaluatedbyimmunohistochemistry(A-C)(originalmagnification200)andHER-2geneamplificationassessedbyFISH(D-F)(originalmagnification1000)ingastriccarcinomatissue.AandD,3+byimmunohistochemicalstainingwithHER-2amplification.BandE,2+byimmunohistochemicalstainingwithHER-2amplification.CandF,1+byimmunohistochemicalstainingwithHER-2amplification.本文档共53页；当前第34页；编辑于星期日\23点47分胃癌HER2检测本文档共53页；当前第35页；编辑于星期日\23点47分胃癌HER2检测本文档共53页；当前第36页；编辑于星期日\23点47分HER2检测流程组织采集组织形态检测耗时评分标准足够数量的有代表性的活检标本（推荐6–8个）有代表性的手术标本胃癌HER2检测的流程

本文档共53页；当前第37页；编辑于星期日\23点47分多处活检的必要性ImagecourtesyofProf.GViale本文档共53页；当前第38页；编辑于星期日\23点47分HER2检测流程组织采集检测耗时评分标准足够数量的有代表性的活检标本（推荐6–8个）有代表性的手术标本胃癌HER2检测的特性

肿瘤异质性高(HER2-阳性位点范围小)FISH检测应筛查整个切片组织形态本文档共53页；当前第39页；编辑于星期日\23点47分HER2检测流程和乳腺癌相似首先采用免疫组化法（IHC）检测HER2-阳性:IHC3+或IHC2+/FISH+明视野方法优先足够数量的有代表性的活检标本（推荐6–8个）有代表性的手术标本肿瘤异质性高(HER2-阳性位点范围小)FISH检测应筛查整个切片检测耗时评分标准组织采集组织形态胃癌HER2检测的特性

本文档共53页；当前第40页；编辑于星期日\23点47分明视野技术有利于发现HER2阳性肿瘤区域相比乳腺癌，着色异质性在胃癌和胃食管结合部癌更常见1胃癌中，5–30%病例会出现肿瘤异质性1-3HofmannM,etal.Histopathology2008;52:797–805.RüschoffJ,etal.derpathologe2010;31:208–17.RüschoffJ,etal.VirchovsArchive2010;acceptedforpublication.ImagecourtesyofProf.GViale本文档共53页；当前第41页；编辑于星期日\23点47分HER2检测流程和乳腺癌相似首先采用免疫组化法（IHC）检测HER2-阳性:IHC3+或IHC2+/FISH+明视野方法优先足够数量的有代表性的活检标本（推荐6–8个）有代表性的手术标本肿瘤异质性高(HER2-阳性位点范围小)FISH检测应筛查整个切片检测耗时组织采集组织形态胃癌HER2检测的特性

≥10%的肿瘤细胞的基侧膜、侧膜强染或完全膜强染定义为IHC阳性不界定活检标本染色的肿瘤细胞占总体肿瘤细胞的百分比：需要5个(成簇)细胞染色评分标准本文档共53页；当前第42页；编辑于星期日\23点47分本文档共53页；当前第43页；编辑于星期日\23点47分手术标本–染色结果活检标本

–染色结果评分HER2过表达情况评估无反应或<10%肿瘤细胞膜染色无反应或任何肿瘤细胞无膜染色0阴性

≥10%肿瘤细胞微弱或隐约可见膜染色;细胞仅有部分膜染色肿瘤细胞团微弱或隐约可见膜染色（不管染色的肿瘤细胞所占整体百分比）1+阴性

≥10%肿瘤细胞有弱到中度的基侧膜、侧膜或完全膜染肿瘤细胞团有弱到中度的基侧膜、侧膜或完全膜染（不管染色的肿瘤细胞所占整体百分比）2+可疑≥10%肿瘤细胞的基侧膜、侧膜或完全膜的强染色肿瘤细胞的基侧膜、侧膜或完全膜的强染色（不管染色的肿瘤细胞所占整体百分比）3+阳性HerceptinEUSmPC:http://www.ema.europa.eu/humandocs/PDFs/EPAR/

Herceptin/emea-combined-h278en.pdf.胃癌HER2检测的评分标准本文档共53页；当前第44页；编辑于星期日\23点47分完全、基侧膜或侧膜染色反应HER2阳性胃癌和胃食管结合部癌可能表现为基侧膜、侧膜或完全膜染底侧膜、侧膜染色的发生通常与低分化胃腺癌细胞结构有关HofmannM,etal.Histopathology2008;52:797–805.ImagereproducedcourtesyofTARGOSMolecularPathologyGmbH.本文档共53页；当前第45页；编辑于星期日\23点47分2.5x–5x20x–40x40x10x–20x放大:x-倍评分3+2+1+0强染色(无放大)弱到中度染色隐约可见(更高放大倍数)阴性染色强度IHC染色强度对应的放大倍率为了分辨明显的细胞间（完全、底侧膜或侧膜）的膜染色，所需的显微镜放大倍率（~工作距离）本文档共53页；当前第46页；编辑于星期日\23点47分10x20x需更高的放大倍数IHC2+20x需高倍放大IHC1+40x40x5x无需放大视野可见膜染色IHC3+甚至无需显微镜也可见5x放大倍率和HER2评分本文档共53页；当前第47页；编辑于星期日\23点47分肿瘤组织内边缘挤压所至的假象IHC:样本排除标准HER2检测ICH法染色的活检/手术标本排除保存情况差的肿瘤组织排除非特异性染色非肿瘤组织内肠型化生、再生（邻近溃疡）胞浆、核、仅底边、腔缘部分着色本文档共53页；当前第48页；编辑于星期日\23点47分评分为0无染色

(40x

放大倍率)IHC:评分标准完全膜染色或基侧膜、侧膜染色染色强度

(可见的不可疑的膜染色)强染色(2.5x–5x

放大倍率)弱到中度染色(10x–20x

放大倍率)必须至少有:活检标本中5个(成簇)细胞染色手术标本中10%的肿瘤细胞染色评分为2+隐约可见染色(40x

放大倍率)评分为1+评分为3+特异性膜染色(