chz2013酵母菌子囊孢子观察以及孢外多糖发酵

实验模块五酵母菌胞外多糖的发酵吴莹莹2014.12酿酒酵母菌子囊孢子的观察

斯达油脂酵母胞外多糖的发酵抗菌活性菌株的筛选结果观察准备(移液管,配制发酵培养基)灭菌讲解操作、结果观察准备：每小组首先准备10mL移液管1支,包扎好,湿热灭菌（记得塞棉花）。配制液体发酵培养基：每小组配50mL，装入

250mL三角瓶（8层纱布塞，灭菌）。建议每排一块配制。配方：蔗糖80g，蛋白胨3.0g

，磷酸氢二钾（K2HPO4

）3.5g，磷酸二氢钾（KH2PO4）3.5g，无机盐溶液5mL（已配好）,加水至1000mL

，pH6.5。无机盐溶液的配制:每100mL加MgSO4.7H2O0.4

g;MnSO4.H2O

0.2

g; FeSO4.7H2O

0.2

g，NaCl

0.2

g.清洗：每组清洗3支小试管(15×100mm),3支大试管(18×180mm)，容量瓶1只。105oC烘箱烘干.(用洗液清洗，之后用蒸馏水润洗，一定要清洗干净.（下次实验用）试管口朝下放置烘干！一、抗菌活性菌株的筛选及斜面划线结果的观察观察抑菌效果→计算Di/Dc抑菌活性菌株的评价：根据抑菌圈和菌落直径比值（Di/Dc)（比值大的抗菌活性较强），筛选出抑菌活性最强的菌株。评价标准：染菌否？均匀程度划线结果概念：这个术语是无分类学意义的普通名称，泛指能发酵产生糖类的各种单细胞真菌。通常以芽殖或裂殖来进行无性繁殖，并以此与霉菌区分开。特点个体一般以单细胞状态存在细胞壁常含甘露聚糖能发酵糖类产能多数以出芽生殖常生活在含糖量较高、酸度较大的水生环境中1、多分布在含糖的偏酸性环境，也称为“糖菌”如水果、蔬菜、叶子、树皮等处，及葡萄园和果园土壤中等2、重要的微生物资源酵母菌是人类的第一种“家养微生物”3、重要的科研模式生物啤酒酵母（Saccharomycescerevisae）第一个完成全基因组序列测定的真核生物（1997，16条染色体，6200个基因）4、有些酵母菌具有危害性有些酵母菌能引起皮肤、呼吸道、消化道、泌尿生殖道疾病分布及与人类的关系子囊菌门（

ycota)酵母目（Saccharomycetales)芽殖：各属酵母菌无性

裂殖：裂殖酵母节孢子：地霉属繁殖产无性孢子掷孢子：掷孢酵母属厚垣孢子：白色念珠菌等产生有性（产子囊孢子）：接合酵母属、Saccharomyces（酵母属）假酵母：只有无性繁殖过程，没有有性繁殖过程真酵母：既有无性繁殖过程，又有有性繁殖过程酵母菌的繁殖方式生活史（sexual有性和asexual无性）sexualasexual子囊实验原理子囊孢子(ascouspores)是子囊菌有性生殖(sexualreproduction)中产生的有性孢子。酵母菌中能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类的重要依据。酵母菌形成子囊孢子需要一定的条件，所以不同种属的酵母菌要选择适合形成子囊孢子的培养基。酿酒酵母(Saccharomyces

cerevisiae)活化：28℃,24h,麦芽汁琼脂培养基（无性）产孢培养：葡萄糖-醋酸钠为主的麦氏培养基(有性）。28℃培养一周选用着色力强的染色剂孔雀绿进行染色，使染料不仅进入菌体也可进入子囊孢子内。进入菌体的染料经水洗后被脱色，而子囊孢子则难以脱色，当用对比度大的染色剂复染后，子囊孢子仍保留初染的颜色，而菌体细胞和子囊被染成复染剂(番红）的颜色。因此从颜色的差别，可以区分子囊孢子、子囊和营养细胞。在洁净载玻片上滴水少许,取经产孢培养的酵母菌，涂片(使其薄而均匀)、干燥、固定。初染:5%孔雀绿水溶液染色3min（加热），水洗.复染:0.5%番红水溶液复染30s，水洗，吸水纸吸干。镜检:用油镜观察（子囊孢子，营养细胞和子囊）。注意：加热时不要让温度过高！绘出观察到的酵母菌营养细胞、子囊和子囊孢子的形态,并标明。子囊孢子子囊营养细胞1000×讲解胞外多糖指分布于细胞壁之外，以荚膜的形式附到细胞壁上或以黏液的形式分泌于胞外环境的同多糖或异多糖。酵母多糖，因其安全无毒、理化性质独特等性质，已作为乳化剂、增稠剂、稳定剂、胶凝剂等应用于石油、化工、食品和制药等领域。本实验采用斯达油脂酵母（Lipomycesstarkeyi)为生产菌种。采用高碳氮比、高通气量进行发酵培养。种子培养基：蔗糖2%，酵母膏0.5%，pH6.5。发酵培养基：蔗糖8%，蛋白胨0.3%

，K2HPO4

0.35%

，KH2PO4

0.35%

，无机盐溶液5mL/L

pH6.5。根据多糖在高浓度乙醇中不溶解的性质，将其从发酵液中沉淀出来。胞外多糖发酵（1）菌种活化：将菌种接到斜面培养基上，28℃培养48

h。（2）种子培养：在种子培养基中接入斜面菌种一环，用8层纱布展平包扎瓶口，然后置于28℃摇床振荡，培养36h。（3）多糖发酵：在超净工作台中，往发酵培养基中接入种子液5mL。用8层纱布展平包扎瓶口，然后置于28℃摇床振荡培养108

h。注意:共用种子液，不要污染!实验报告实验名称：酵母菌子囊孢子的观察及胞外多糖的发酵姓名： 组别：实验内容：酵母菌子囊孢子的观察放线菌抗菌活性菌株的筛选实验结果：绘制子囊孢子、子囊以及营养细胞的形态图分析与讨论：成绩评定：现场打分、实验报告成绩计算Di/Dc=10mm/1mm=10描述大小；颜色等子囊孢子子囊营养细胞思考题1.结合酵母菌多糖的发酵过程，探讨从放线菌发酵生产抗生素的一般过程。2.如何从菌落特征上区分霉菌，放线菌，酵母菌和细菌？本次实验主要操作酵母菌子囊孢子的观察:显微镜载玻片→滴水→涂菌→室温干燥→固定→孔雀绿加热染色(3min)→水洗→番红复染

(30s)→水洗→吸干水分→油镜观察绘图(标出子囊，子囊孢子，营养细胞）多糖发酵：超净工作台带上洗耳球无菌条件下,用灭菌的移液管取种子液5mL,接入装有

50mL培养基的三角瓶中(每组1瓶)，用8层纱布包扎瓶口，28℃，摇床振荡培养108h。注意无菌操作！！！烘干的玻璃器皿记得取回！本次实验主要操作酵母菌子囊孢子的观察:（显微镜316室）载玻片→滴水→涂菌→室温干燥→固定→孔雀绿加热染色(3min)→水洗→番红复染

(30s)→水洗→吸干水分→油镜观察绘