基金申请的策略和技巧

基金申请的策略和技巧第一页，共六十页，编辑于2023年，星期日基金申请选题撰写申请书答辩第二页，共六十页，编辑于2023年，星期日撰写前的准备好心情、好身体边想边写3h/天读指南、读通知注意截止期读标书、读高手、读同行读自己卖点！？选题创新性工作基础想法变文字一气呵成“立项依据”沟通科研科87330567、医科处

87333055

第三页，共六十页，编辑于2023年，星期日摘要

研究内容和意义（限400字）1.基础：继续和深入发表和未发表创新2.问题中肯3.预实验针对“问题”的预实验结果4.假设思想性、创新性5.方法可靠性第一先进性第二6.目标明确、具体7.意义理论性和应用性第四页，共六十页，编辑于2023年，星期日立项依据1.关键!占50%文笔流畅、层次分明、逻辑性强2.要求：充分的理由和意义思想性与摘要呼应3.自己的工作为依据图文并茂规范4.参考文献时效性自己的文章规范化5.深入浅出内行、外行读得懂6.人文文化素质精神动人的故事第五页，共六十页，编辑于2023年，星期日神经元凋亡时SP1对BH3-only蛋白Bim的转录调控细胞凋亡时SP1对BH3-only蛋白Bim的转录调控神经元凋亡时BH3-only蛋白Bim的转录调控神经元凋亡时SP1对BH3-only蛋白Bim的调控

SP1对BH3-only蛋白Bim的转录调控

SP1对神经元凋亡的调控作用关键词：SP1/Bim/基因调控/信号转导/神经元凋亡项目名称第六页，共六十页，编辑于2023年，星期日研究内容、研究目标与

拟解决的关键问题第七页，共六十页，编辑于2023年，星期日研究目标

获得SP1直接调控bim基因表达的可靠证据，阐明促凋亡蛋白Bim由SP1转录调控的新机制，为确立SP1作为神经退行性疾病治疗的新靶点提供更充分的科学依据。要求：明确、具体解决学术问题神经元凋亡时SP1对BH3-only蛋白Bim的转录调控与题目相呼应第八页，共六十页，编辑于2023年，星期日

研究内容

（紧紧围绕研究目标）

1.

证明bim启动子核心区的SP1结合序列是否介导了bim基因的上调

为了证实bim启动子核心区的SP1结合序列是否介导了bim基因的上调，将其中的SP1结合序列进行点突变，使其不能结合SP1；确定这一突变是否能够消除bim启动子的撤钾反应。

2.

分析SP1是否能够与bim启动子核心区的SP1结合序列结合

应用EMSA(ElectrophoreticMobilityShiftAssay)技术，证实bim启动子核心区的SP1结合序列是否能够与SP1结合；进一步采用CHIP(Chromatinimmunoprecipitation)方法，获得SP1与bim启动子核心区在细胞内结合的证据。

3.

从bim的mRNA和蛋白质水平，观察负显性SP1是否能够抑制撤钾诱导的bim基因的上调

质粒转染CGNs的转染率只能达到0.1-1.0%，腺病毒的感染率可达70－80%[1]。因此，构建dnSP1的腺病毒载体Ad-dnSP1，感染CGNs才能达到可靠分析bim的mRNA和蛋白质表达水平改变的目的。

4.分析SP1诱导Bim这一机制对神经元凋亡的调控作用

确立SP1转录激活bim这一机制后，进一步分析这一机制对神经元凋亡的调控作用。

第九页，共六十页，编辑于2023年，星期日

拟解决的关键问题

获得SP1直接调控bim基因表达的可靠依据。

什么是关键问题？

—研究过程中对达到预期目标有重要影响的某些研究内容或因素。

—为达到预期目标所必须掌握的关键技术或研究手段。撰写要求：找出关键问题，问题清晰，分析透彻，合理的解决方法。第十页，共六十页，编辑于2023年，星期日

研究方案项目需求为前提；可靠性第一，先进性第二；参考文献；突出关键技术的描述；不主张使用流程图，建议开头：“有关方法、技术路线、试验手段、关键技术综述如下……”。

第十一页，共六十页，编辑于2023年，星期日可行性分析

－从学术思想角度提出

1.工作基础（学术思想）

2.科研梯队

3.实验条件

4.实验技术

5.交流与合作（国内、国外）第十二页，共六十页，编辑于2023年，星期日

创新性

对创新的理解：创新性与先进性是有根本区别的。

原始创新：填补空白或修改传统的理论；新技术、新方法的发明创造。

跟踪创新：

在前人工作基础上补充、完善现有理论；对原有技术、方法进行修改后产生1＋1＞2的效果。第十三页，共六十页，编辑于2023年，星期日本项目的特色与创新之处：申请人首次报道了神经元凋亡时促凋亡蛋白Bim上调是不依赖于JNK/c-Jun通路(LeyuShi,etal,NeurosciLett.2005)一观察之后，又以可靠的实验结果证明PI3K/Akt/FKHRL1信号通路也不参与bim的上调（见立项依据）。bim上调的转录机制是什么？我们率先对bim启动子进行了5‘末端序列续减分析，确立了诱导bim表达的启动子核心区，进而发现一个典型的转录因子SP1结合序列位于其中。进一步实验显示：神经元凋亡时SP1被激活；负显性SP1突变体和SP1-DNA结合抑制剂mithramycinA可抑制bim的上调。根据以上生物信息学分析和实验观察，我们首次提出了SP1介导bim上调这一新的bim转录机制：神经元凋亡时转录因子SP1被激活，激活的SP1与bim启动子核心区的SP1结合序列结合，从而转录激活bim的表达。本项目拟进一步采用负显性SP1突变体的腺病毒表达技术以及启动子点突变、EMSA和CHIP方法，旨在获得SP1直接调控bim基因的可靠证据，为阐明SP1对促凋亡蛋白Bim的调控作用和机制并进一步确立SP1作为神经退行性疾病治疗的新靶点提供更充分的科学依据。

第十四页，共六十页，编辑于2023年，星期日研究基础与工作条件

—突出与项目相关的工作积累研究基础

已取得的研究工作成绩及与本项目有关的研究工作积累(对于自由申请项目，着重填写申请人近期的主要工作业绩；对于重点项目，请着重填写本课题组与本项目相关的研究工作积累和近五年的主要研究业绩)工作条件

已具备的实验条件，尚缺少的实验条件和拟解决的途径(包括利用国家重点实验室和部门开放实验室的计划与落实情况)第十五页，共六十页，编辑于2023年，星期日研究基础

在国家自然科学基金(已结题三项、正进行一项)的资助下，近五年有如下工作积累和成绩：

1.

SCI论文近五年发表了14篇SCI论文；其中与神经元凋亡的信号转导和基因调控有关的论文，作为第一作者的有2篇，作为通讯作者的有4篇(见后)，作为共同作者的有8篇。

2.Bim转录机制的前期工作我们首次报道了神经元凋亡时JNK/c-Jun不参与bim的上调[1]，随后，我们又以可靠的证据揭示了PI3K/Akt/FKHRL1也不介导bim的上调(未发表资料)。这些研究工作改变了以往的观点,也是本项目重要的立项依据之一。

第十六页，共六十页，编辑于2023年，星期日

3.

Bim启动子核心区确立

启动子5‘末端序列续减分析确立了诱导Bim表达的启动子核心区，并发现一个典型的转录因子SP1结合序列位于其中。进一步实验显示：神经元凋亡时SP1被激活；负显性SP1突变体和SP1-DNA结合抑制剂均可抑制Bim的上调。这些实验资料揭示了SP1介导bim转录调控的新机制，也为本项目申请提供了最根本的实验依据。

4.

转录因子调控神经元凋亡的工作基础

另一项转录因子MEF2抗神经元凋亡的工作也显示了申请人与本项目相关的较扎实的研究工作积累。本人首次报道(MingtaoLi,etal,JofNeurosci.2001,21:6544-6552)、随后被他人证实(Shu-ichiOkamoto,etal,PNAS2002,99:3974-3979)，神经元凋亡时转录因子MEF2A和MEF2D不仅活性降低和失去抗凋亡作用，而且被凋亡杀手caspase剪切，其N-末端产物反而具有促凋亡活性。这一MEF2调控凋亡机制的发现，不仅对于我们理解神经元存活或凋亡具有重要的意义，而且也为神经系统的发育和分化的研究开拓了一条崭新的思路，具有创新性。第十七页，共六十页，编辑于2023年，星期日

5.

信号转导的工作基础

较早的一项对cAMP/PKA抗神经元凋亡机制的研究也反映了本人在神经元凋亡信号转导的研究方面有较厚实的工作积累。申请者首次发现促凋亡激酶GSK-3

和GSK-3β是PKA的天然底物；阐明cAMP/PKA通过磷酸化并抑制GSK-3β发挥其促神经元存活的作用，此内容发表在《分子细胞生物学》(MingtaoLi,etal,MolCellBiol.2000,20:9356-9363)。

6.JNK/c-Jun通路的工作基础

我们首次以JNK/c-Jun为直接靶点、用小分子JNK抑制剂(SP600125)治疗帕金森病动物，证实JNK是有效的治疗靶点。此工作发表后(NeuroscienceResearch,2004;48:195-202)，得到了国际同行的认可。SCI期刊DrugNewsPerspectives邀请本人撰写了有关“以JNK为靶点治疗帕金森病”的专题综述“JNKInhibitionasaPotentialStrategyinTreatingParkinson’sDisease”(DrugNewsPerspect.2004;17:646-54)。

第十八页，共六十页，编辑于2023年，星期日SCI文章1.LeyuShi

,ShoufangGong,ZhongminYuan

,ChiMa,YanlingLiu,ChuanfuWang

,WenmingLi,RongbiaoPi,ShoujianHuang,RuzhuChen

,YifanHan

,ZixuMao,andMingtaoLi(通讯作者).Activitydeprivation-dependentinductionoftheproapoptoticBH3-onlyproteinBimisindependentofJNK/c-Junactivationduringapoptosisincerebellargranuleneurons.NeurosciLett.2005,375：7－12.2.WenyaWang,ChiMa,ZixuMaoandMingtaoLi.(通讯作者).JNKinhibitionasapotentialstrategyintreatingParkinsons’sdisease.DrugNewsPerspect,2004,17(10):646-54.3.WenyaWang,LeyuShi,YuanbinXie,ChiMa,WenmingLi,XingwenSu,ShoujianHuang,RuzhuChen,ZhenyuZhu,ZixuMao,YifanHanandMingtao

Li.(通讯作者).SP600125,anewJNKinhibitor,protectsdopaminergicneuronsintheMPTPmodelofParkinson’sdisease.NeurosciRes2004；48:195-202

4.YuanbinXie,YanlingLiu,ChiMa,ZhongminYuan,WenyaWang,ZhenyuZhu,,GuoquanGao,XianguoLiu,HengxinYuan,RuzhuChen,ShoujianHuang,XuelanWang,XiaonanZhu,XueminWang,ZixuMao

andMingtaoLi(通讯作者).Indirubin-3′-oximeinhibitsc-JunNH2-terminalkinase:anti-apoptoticeffectincerebellargranuleneurons.NeurosciLett.2004,367:355-359.第十九页，共六十页，编辑于2023年，星期日5.RongbiaoPi,WenmingLiNelsonT.K.Lee,HughH.N.Chan,YongmeiPu,LingNgaChan,NikolausJ.Sucher,DoanldC.Chang,MingtaoLiandYifanHan.Minocyclinepreventsglutamate-inducedapoptosisofcerebellargranuleneuronsbydifferentialregulationofp38andAktpathways.JNeurochem.2004,91:1212-1230.WenyaWang,ChiMa,ZixuMaoandMingtaoLi.(通讯作者).JNKinhibitionasapotentialstrategyintreatingParkinsons’sdisease.DrugNewsPerspect,2004,17(10):646-54.6.WenmingLi,RongbiaoPi,HughH.N.Chan,HongjunFu,NelsonT.K.Lee,HingWaiTsang,YongmeiPu,DonaldC.Chang,ChaoyingLi,JialieLuo,KemingXiong,ZhiwangLi,HongXue,PaulR.Carlier,YuanpingPang,KarlW.K.Tsim,MingtaoLiandYifanHan.NoveldimericAChEinhibitorBis(7)-tacrine,butnotDonepezil,preventsglutamate-inducedneuronalapoptosisbyblockingNMDAreceptors.JBiolChem.2005,280(18):18179-88.7.XueminWang,XiaoliTang,MingtaoLi,JohnMarshall,ZixuMao.Regulationofneuroprotectiveactivityofmyocyteenhancerfactor2bycAMP-PKAsignalingpathwayinneuronalsurvival.JBiolChem.2005,280(17):16705-13.8.MarcusWiedmann,XueminWang,X.iaoliTang,MingtaoLi,ZixuMao.PI3K/Akt-dependentregulationofthetranscriptionfactormyocyteenhancerfactor-2ininsulin-likegrowthfactor-1-andmembranedepolarization-mediatedsurvivalofcerebellargranuleneurons.JNeurosciRes.2005200581(2):226-234.第二十页，共六十页，编辑于2023年，星期日9.MingtaoLi，XiaominWang，MaryKayMeintzer，TraceyLaessig，MorrisJ.BirnbaumandKimA.Heidenreich.CyclicAMPpromotesneuronalsurvivalbyphosphorylationofglycogensynthasekinase3β.MolCellBiol.2000,20（24）：9356-9363.10.MingtaoLi，DanielA.Linsenman，MelissaP.Allen，MaryKayMeintzer，XiaominWang，TraceyLaessig，MargaretE.Wierman&KimA.Heidenreich.MEF2AandMEF2Dundergophosphorylationandcaspase-mediateddegradationduringapoptosisofratcerebellargranuleneurons.J.Neurosci.2001;21(17):6544-6552.11.DanielA.Linseman,ChristopherM.Bartley,ShoshonaS.Le,TraceyA.Laessig,RonJ.Bouchard,MaryKayMeintzer,MingtaoLiandKimA.Heidenreich

.InactivationoftheMyocyteEnhancerFactor-2RepressorHistoneDeacetylase-5byEndogenousCa2/Calmodulin-dependentKinaseIIPromotesDepolarization-mediatedCerebellarGranuleNeuronSurvival.JBiolChem2003,278:41472–41481.12.Jing-PingYun,Choong-TsekLiew,EngChingChew,Xiao-YuYin,PaulBoSanLai,YamHinFai,H.K.RichardLi,Mei-LinJin,Ming-XiaoDing,MingtaoLi,Han-LiangLin,andWanYeeLau.NuclearMatrixProteinExpressionsinHepatocytesofNormalandCirrhoticRatLiversUnderNormalandRegeneratingConditions.

JCellBiochem.

2004,91:1269–1279.第二十一页，共六十页，编辑于2023年，星期日13.HongweiYang,XiaodongHu,HongmeiZhang,WenjunXin,

MingtaoLi,TongZhang,LijunZhouandXianguoLiu.RolesofCaMKII,PKA,andPKCintheinductionandmainternanceofLTPofC-fiber-evokedfieldpotentialsinratspinaldorsalhorn.JNeurophysiol.2004,91:1122-1133.14.NengweiHu,HongmeiZhang,XiaodongHu,MingtaoLi,TongZhang,LijunZhouandXianguoLiu.ProteinSynthesisInhibitionBlockstheLate-PhaseLTPofC-FiberEvokedFieldPotentialsinRatSpinalDorsalHorn.JNeurophysiol,2003;89:2354-235915.

JuanSun,

MingtaoLi,JiahuaiHanandJunGu.SensitizationofdifferentiatedPC12cellstoapoptosisbypresenilin-2ismediatedbyp38.Biochem.Biophy.Res.Commun.,2001,287:536-541.

16.WeibinCai,JianfangMa,ChaoyangLi,ZhonghanYang,XiaYang,WeiLiu,ZuguoLiu,MingtaoLi,GuoquanGao.Enhancedanti-angiogeniceffectofadeletionmutantofplasminogenkringle5onneovascularization.JCellBiochem.2005Sep15;(inpress).17.MingYANG,Cun-youWAGN,FengZHOU,JingTAO,TaoLIU,Hai-yanWEI,WeiLIU,Ming-taoLi,Xian-songFENG.ProteomicAnalysisintheEarlyProcessofPancreaticRegenerationinthePancreatectomizedRat.ActaPharmacologicaSinica2005(inpress)第二十二页，共六十页，编辑于2023年，星期日工作条件

2001年回国，获得211基金180万元，组建了一流的分子、细胞生物学实验室。2002年，作为负责人获得一期985学科建设经费700万元，筹建了一流的蛋白质组学实验室并正在主持开展蛋白质科学的前沿性工作。近三年，培养和汇聚了一支从事分子神经生物学和蛋白质组学研究的科研队伍。这些建设性工作为解决细胞信号转导、基因调控以及本项目的核心问题奠定了扎实的基础。项目负责人黎明涛所在单位——中山大学基础医学院药理教研室是211项目资助学科和国家重点学科。人才济济，科研装备精良。近三年，药理教研室获得学科建设资金3000万元，已购置大型仪器如质谱仪、激光共聚焦显微镜、超速离心机、流式细胞仪、高效液相和蛋白质分离纯化系统等。这是申请者视为非常可贵的研究工作环境。

第二十三页，共六十页，编辑于2023年，星期日申请者简历申请者和项目组主要成员

学历研究工作简历近期已发表与本项目有关的文章目录获得学术奖励情况在本项目中承担的任务。

第二十四页，共六十页，编辑于2023年，星期日

黎明涛(LiMingtao)项目负责人，中山大学基础医学院药理教研室教授，博士生导师，中山医学院蛋白质组学实验室主任。于1984年、1989年和1996年分别获得医学学士、硕士和博士学位。主要研究领域是神经元凋亡的信号转导、基因调控和蛋白质组学。在美国DepartmentofPharmacology,UniversityofColoradoHealthSciencesCenter从事两年博士后研究（1999-2001），主攻凋亡的信号转导、基因调控和蛋白质组学。近五年发表了14篇SCI论文，其中：作为第一作者，在国际核心杂志MolecularandCellularBiology(ImpactFactor,10.03)和JournalofNeuroscience(IF,8.4)发表了具有创新性的文章；作为通讯作者，最近在NeurosciRes(IF,2.4)和NeurosciLett（IF，2.2）等期刊上发表了开拓性的文章。近五年（1998－2004）作为第一主持人获得13项基金，包括：4项国家自然科学基金；5项省自然科学基金；3项市基金；1项教育部基金。发表的相关论文1.

LeyuShi

,ShoufangGong,ZhongminYuan

,ChiMa,YanlingLiu,ChuanfuWang

,WenmingLi,RongbiaoPi,ShoujianHuang,RuzhuChen

,YifanHan

,ZixuMao,andMingtaoLi(通讯作者).Activitydeprivation-dependentinductionoftheproapoptoticBH3-onlyproteinBimisindependentofJNK/c-Junactivationduringapoptosisincerebellargranuleneurons.NeurosciLett.2005,375:7－12.2.……3.……第二十五页，共六十页，编辑于2023年，星期日

皮荣标(PiRongbiao)33岁，博士学位，讲师。2002年毕业于中山大学，获神经药理学博士。同年赴香港科技大学生物化学系从事博士后研究，现在中山大学药学院任讲师。主要研究兴趣涉及神经保护药物的作用及其机制的研究。曾负责或参加包括国家自然科学基金等多项研究。已发表或待发表论著近20篇，其中SCI论文5篇。皮博士与本人合作达11年，有共同的研究趣向，作为共同作者发表多篇SCI论文。他掌握了本项目涉及的大部分实验方法和技术，尤其在腺病毒载体构建方面积累了经验（见文章）。主要负责腺病毒载体构建等工作。发表的相关论文

1.RongbiaoPi,WenmingLi,NelsonT.K.Lee,HughH.N.Chan,YongmeiPu,LingNgaChan,NikolausJ.Sucher,DoanldC.Chang,MingtaoLiandYifanHan.Minocyclinepreventsglutamate-inducedapoptosisofcerebellargranuleneuronsbydifferentialregulationofp38andAktpathways.JNeurochem.2004,91:1212-1230.2.……3.……第二十六页，共六十页，编辑于2023年，星期日项目组主要成员第二十七页，共六十页，编辑于2023年，星期日经费申请表第二十八页，共六十页，编辑于2023年，星期日申请项目同行评议意见反馈信

黎明涛先生：

您好！您申请的项目经专家投票表决，同意资助。关于你的项目的同行评议意见如下：

1.本项目在小脑颗粒细胞撤钾的离体凋亡模型中，发现了一种直接调节Bim的新转录因子SP1，申请人试图采用腺病毒转染技术、基因突变以及分子生物学方法进一步论证SP1是直接调控bim基因的这一假说。立项具有前言性，申请人工作基础好，并与美国Emory大学、香港大学有长期的合作条件，完全能够完成本项课题。建议优先资助。

2.本项课题的立项依据较为充分，具有一定的学术创新及科学意义。研究内容明确、技术路线清晰、研究方法和方案可行。申请者有较高的学术水平，以及多次主持国家自然科学基金课题的经验。同时，申请者所在单位又有比较好的实验室及条件。建议给予资助。

3.课题研究具有较好的工作基础，研究具有较高的学术价值，建议资助。

4.同意资助。理由：该项目立论依据充分，其重要的意义表现在澄清撤钾诱导神经元凋亡时，Bim上调的细胞内信号转导机制。申请者有较好的研究基础和研究能力，项目的内容设置合适，重点突出，总体方案合理，技术路线可行，可资助。

5.Thisisanicelywritenproposalwithaclearaimandpracticalapproaches.Further,thegrouphaspublishedresultsrelatedtothecurrentproposal,indicatingtheabilityofthegrouptoperformtheexperiments.

第二十九页，共六十页，编辑于2023年，星期日获得资助的决定因素工作基础好学术创新性及学术价值立项依据充分研究内容明确技术路线清晰重点突出、方案合理国际合作第三十页，共六十页，编辑于2023年，星期日祝大家新年快乐！

在新的一年获得更多基金！第三十一页，共六十页，编辑于2023年，星期日基金答辩充满自信、激情仪表和体语特点：专家心理？按提前结束做准备！准备充分幻灯小道具口头表达准确性、情感性、可信性和简明性开门见山、突出主题做什么？为什么？怎样做？突出特色和创新第三十二页，共六十页，编辑于2023年，星期日帕金森病治疗的新靶点及靛玉红衍生物的研究与开发黎明涛中山大学基础医学院第三十三页，共六十页，编辑于2023年，星期日立论依据现状：

1.发病情况：世界性；中国>100万；美国100万

2.病理特征：黑质多巴胺神经元凋亡纹状体多巴胺含量

3.治疗现状：左旋多巴—对症治疗：疗效不理想、安全性受到质疑第三十四页，共六十页，编辑于2023年，星期日以JNK为新靶点治疗PD2002年省重点项目（15万元）资助

MLK

↓

JNK

SP600125

↓c-Jun

↓凋亡

第三十五页，共六十页，编辑于2023年，星期日以JNK为靶治疗PD1.保护多巴胺能神经元2.改善行为学指标3.提高黑质多巴胺浓度第三十六页，共六十页，编辑于2023年，星期日第三十七页，共六十页，编辑于2023年，星期日第三十八页，共六十页，编辑于2023年，星期日

结题情况1.四篇SCI文章，通讯作者2.人才培养：1名博士2名硕士第三十九页，共六十页，编辑于2023年，星期日以JNK/CDK5/GSK3β为靶治疗PD

JNKNeurosciRes2004,48:195-202DrugNewsPerspect.200417(10):646-54GSK3βMingtaoLi,etal,unpublisheddata

CDK5PNASUSA2003,100(23):13650-5第四十页，共六十页，编辑于2023年，星期日抑制JNK/CDK5/GSK3β的方案

1.三种抑制剂联合

2.一种抑制剂，“一石三鸟”

第四十一页，共六十页，编辑于2023年，星期日

Indirubin-3'-oxime（靛玉红衍生物）是CDK5、GSK-3β的抑制剂

NatCellBiol.19991(1):60-7JBiolChem.2001,5;276(1):251-60第四十二页，共六十页，编辑于2023年，星期日靛玉红直接抑制JNK活性第四十三页，共六十页，编辑于2023年，星期日靛玉红直接抑制JNK,保护神经元第四十四页，共六十页，编辑于2023年，星期日Indirubin-3'-oximeinhibitedMPP+-inducedapoptosisincultureddopaminerbicneurons.(a)control,(redforTH-positiveneurons),(b)10μMMPP+decreasedTH-positivecellsandreducedcytoplasmicvolume;indirubin-3'-oxime3μM(c)and5μM(d)rescuedTH-positivecells

第四十五页，共六十页，编辑于2023年，星期日Indirubin-3'-oximepreventedlossofdopamineneuronsafterMPTPadministration.(a)vehicletreated(control);(b)MPTPtreated;MPTPalongwithIndirubin-3'-oxime5mg/kg(c);10mg/kg(d)and30mg/kg(e).NoteIndirubin-3'-oximerescuedthedopaminergicneuronslossinadose-dependentmanner(c-e).第四十六页，共六十页，编辑于2023年，星期日研究目标以JNK/CDK5/GSK3β为明确靶点，以靛玉红衍生物为抑制剂,研发出一类毒性小、特异性高、作用强的治疗PD的新药物第四十七页，共六十页，编辑于2023年，星期日研究内容1.筛选对JNK具有特异性抑制作用的靛玉红衍生物(11个）2.筛选对黑质多巴胺神经元凋亡具有保护性干预作用的靛玉红衍生物（8个）3.筛选对PD具有治疗作用的衍生物（4个）4.药理、毒理研究第四十八页，共六十页，编辑于2023年，星期日研究基础1.首次证实JNK是治疗PD的有效靶点2.证实GSK-3β是治疗PD的靶点之一3.发现靛玉红衍生物能够抑制JNK，对PD具有治疗作用4.15篇相关SCI文章第四十九页，共六十页，编辑于2023年，星期日发表文章补充WiedmannM,WangX,TangX,HanM,LiM,MaoZ.JNeurosciRes.2005Jun1[Epubaheadofprint]WangX,TangX,LiM,MarshallJ,MaoZ.JBiolChem.2005,280(17):16705-13.LiW,PiR,ChanHH,FuH,LeeNT,TsangHW,PuY,ChangDC,LiC,LuoJ,XiongK,LiZ,XueH,CarlierPR,PangY,TsimKW,LiM,HanY.JBiolChem.2005,280(18):18179-88.第五十页，共六十页，编辑于2023年，星期日创新点

1.首次证实JNK是治疗PD的有效靶点

2.证实GSK-3β是治疗PD的靶点之一

3.发现靛玉红能够抑制JNK，对PD具有治疗作用

4.JNK/CDK5/GSK-3β为靶治疗PD5.用一种化合物抑制JNK/CDK5/GSK-3β

第五十一页，共六十页，编辑于2023年，星期日我们对完成此项目充满信心！谢谢！第五十二页，共六十页，编辑于2023年，星期日Fig.6MithramycinA,aSP1-DNAbindinginhibitor,attenuatesbimupreguationbyactivitydeprivationinCGNs.(A)

MithramycinAattenuatestheupregulationofBimELinducedbyactivitydeprivationinadosedependentmanner.CGNswereplacedin25Kor5KmediaintheabsenceorpresenceofmithramycinAattheindicatedconcentrationsfor6h.BimELexpressionwasassessedbyWesternblotasdescribedinFig.1(A).Resultsshownarerepresentativeoffourseparateexperiments.(B)MithramycinAinhibitstheincreaseinbimmRNAlevelinadose-dependentmanner.Neuronsweretreatedasdescribedin(A),bimandactinmRNAsweredeterminedbyRT-PCR,Resultsshownarerepresentativeoffiveseparateexperiments.(C)MithramycinAsuppressestheactivationofbimpromoterinducedbyactivitydeprivation.Neuronswereco-transfectedwithbim-LucandpEF-RLfor8hr.LuciferaseactivitiesweremeasuredasdescribedinFig.2,Theexperimentswererepeatedthreetimeswithduplicatesforeachtreatment.Thedatarepresent±S.E.M.ofthreeexperiments.第五十三页，共六十页，编辑于2023年，星期日参考文献1.LeyuShi

,ShoufangGong,ZhongminYuan

,ChiMa,YanlingLiu,ChuanfuWang

,WenmingLi,RongbiaoPi,ShoujianHuang,RuzhuChen

,YifanHan

,ZixuMao,andMingtaoLi.Activitydeprivation-dependentinductionoftheproapoptoticBH3-onlyproteinBimisindependentofJNK/c-Junactivationduringapoptosisincerebellargranuleneurons.NeurosciLett.2005,375：7－12.2.WenyaWang,LeyuShi,YuanbinXie,ChiMa,WenmingLi,XingwenSu,ShoujianHuang,RuzhuChen,ZhenyuZhu,ZixuMao,YifanHanandMingtao

Li.SP600125,anewJNKinhibitor,protectsdopaminergicneuronsintheMPT