正交试验法优选前列宁颗粒剂的提取工艺

正交试验法优选前列宁颗粒剂的提取工艺【摘要】：［目的］筛选和优化前列宁颗粒剂提取工艺。［方法］采用正交设计法，以水醇两组提取物中浸膏得率、有效成分分别为大黄酸和黄芪甲苷提取率为指标，确定提取参数。［结果］确定黄芪等药组水提工艺为10倍量水，煎煮3次，每次；大黄等药醇提组工艺为6倍量60%乙醇，提取2次，分别为、。［结论］前列宁颗粒剂提取工艺稳定，可行。

【关键词】前列宁颗粒剂；大黄酸；黄芪甲苷；提取工艺；正交设计

Abstract:［Objective］TofilterandoptimizeextractivetechnologyofQianlieninggranules.［Methods］TheoptimizationextractivetechnologyofQianlieninggranuleswasinvestigatedusingorthogonaldesignwiththeavailabilitycomponentextractingfromthedrugastheindex.［Results］TheoptimalconditionfortheextractionofRadixAstragaligroupwas10foldsamountofwater，3times,hourseachoptimalconditionfortheextractionofRheumofficinalwas6foldsamountof60%alcohol,2times,twohoursandhourseachtime.［Conclusion］Theoptimizedextractivetechnologyisscientificandefficient.

Keywords：QianlieningGranules；Rhein；AstragalosideIV；extractivetechnology；orthogonaldesign

前列宁颗粒由酒大黄、黄芪、牛膝、菟丝子等多味中药组成，为我院中西医结合系洪振丰教授的经验方，具有清热解毒、活血化瘀、益气补肾之功效，用于治疗慢性前列腺增生及前列腺炎等症，疗效显着［1］。为方便临床用药和患者携带，实验对组方成分进行分析，根据各味药材所含成分的理化性质，拟分水溶和醇溶两组提取。其中黄芪、菟丝子等药采用水煎煮提取，酒大黄、牛膝等药采用醇提，对其提取工艺采用正交实验法进行研究，以确定最佳提取工艺，使制剂工艺更加合理。

1仪器与试药

美国Waters600E高效液相色谱仪，包括二极管阵列检测器，四元泵，在线真空脱气机，Millennium32色谱工作站；SartoiousBT25S型电子分析天平；恒温干燥箱(北京市朝阳区来广营医疗器械厂)；DKS24型电热恒温水浴锅(上海精宏试验设备有限公司)。

酒大黄、黄芪等实验药材均购自福建同春药业有限公司，经我院药学系鉴定符合2005版中国药典有关规定；大黄酸对照品；黄芪甲苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110781-200512)；甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂为分析纯。

2方法与结果

水煎煮组正交试验设计

采用正交试验法对黄芪、菟丝子等药组水煎液提取工艺进行优选。根据文献报道［2］，以提取次数(A)、提取时间(B)、加水量(C)为试验因素，每个因素3个水平进行优选，以浸膏得率和黄芪甲苷含量作为考察指标进行试验。因素水平见表1。表1水煎煮组的因素水平表

浸膏得率测定：精密吸取母液20ml，置干燥恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105℃下干燥3h，迅速取出，放入干燥器中，冷却30min，迅速精密称定，计算出膏率。

水煎液中黄芪甲苷的测定［3］

色谱条件与系统适用性试验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(38:62)为流动相；流速为/min。蒸发光散射检测器检测。此色谱条件下，理论塔板数按黄芪甲苷峰计算，应不得低于4000。

对照品溶液的制备

精密称取黄芪甲苷对照品，置于10ml容量瓶中，加入甲醇定容，制成/ml的溶液，即得。

供试品溶液的制备

按正交表条件提取，合并提取液，滤过，滤液浓缩至1:1，加乙醇使醇浓度达75％，低温静置24h，取上清液减压回收乙醇，浓缩定容于100ml量瓶，摇匀。分别精密量取，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次25ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次20ml，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶液并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，离心，取上清液，即得。

标准曲线绘制

精密吸取对照品溶液2，4，6，8，10μL，分别注人高效液相色谱仪，依法测定。回归方程为Y=+，r=。结果表明，黄芪甲苷进样量线性范围为～μg。

精密度试验

取同一份供试品溶液，按上述色谱条件重复测定5次，计算精密度，结果黄芪甲苷峰面积的RSD为％(n=5)。

重复性试验

取同一批号样品，配制3种浓度，照含量测定项下方法每个浓度测定3次，结果RSD为％、％、％，表明重现性较好。

稳定性试验

取同一份供试品溶液，在0，4，16，24，48h分别进样5次，依法分别测定黄芪甲苷蜂面积值。结果％，表明本品在48h内测定结果稳定。

加样回收率试验

精密称取已知含量的同一批样品，各精密加入黄芪甲苷对照品适量，按项下方法制备供试液，依法测定并计算加样回收率，得平均回收率为％，RSD＝％。

水煎煮组最佳工艺确定

正交试验结果见表2，方差分析结果见表3。按下列公式计算综合评分值:出膏率加权评分(y1)＝(出膏率-12)/×100；黄芪甲苷含量加权评分(y2)=(测定量-)/×100。综合评分=/2。表2水煎煮组正交试验结果表3水提工艺方差分析表

由表2可见，3个因素的级差大小顺序为ACB，提取次数对提取工艺的影响最大，加水量影响较大，提取时间影响最小。由表4可见，因素A(提取次数)、因素C(加水量)有显着性，因素B(提取时间)无显着性。故最佳工艺为A3B1C3，即用10倍量水，提取3次，每次。按优选的最佳工艺提取3批样品进行验证实验，可知，三批样品出膏率分别为％、％、％；黄芪甲苷含量分别为、、/g。验证结果表明工艺基本稳定可行。

醇提组正交试验设计

根据文献和预实验结果［4］，采用正交试验法。以浸膏得率和大黄酸的含量为考察指标，对乙醇浓度(A)、醇用量(B)、提取时间(C)3个试验因素，每个因素3个水平进行优选，并以浸膏得率和大黄酸含量作为考察指标进行试验。因素水平见表4。表4醇提组的因素水平表

大黄酸含量测定

色谱条件

填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，色谱柱为SHIMADZUC18色谱柱，流动相为甲醇-％磷酸溶液(85∶15)，检测波长为254nm，流速为/min。理论塔板数按大黄酸峰计算应不低于3000。

对照品溶液的制备

精密称取干燥2h后的大黄酸对照品，置于25ml量瓶中，加甲醇至刻度，得含大黄酸/ml的对照品溶液，备用。

线性关系考察

分别精密量取大黄酸对照品溶液、、、、，置于10ml量瓶中，加甲醇至刻度，分别进样5μl。以进样量(X)为横坐标，峰面积积分值(Y)为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：Y=+(r=)。结果表明，大黄酸进样量在～μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。

供试品溶液的制备

用L9(34)正交表安排试验，称取处方量的药材，按设定方案进行回流，收集回流提取液，定容至200ml，精密量取50ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105℃干燥3h，置干燥器中冷却，迅速称量。精密量取已定容样品液50ml，水浴蒸干，加5mol/L。硫酸溶液20mL，置水浴加热1h，立即冷却，加氯仿提取3次(30、30、20ml)，合并氯仿液，加水洗涤2次(20、20ml)，弃去水层，氯仿液水浴蒸干，残留物加甲醇定容至5ml，即得。

含量测定

分别精密吸取对照品溶液5μl、供试品溶液10μl，分别注入液相色谱仪，按“”项下色谱条件测定。高效液相色谱见图1。

精密度试验

精密量取“”项下大黄酸对照品溶液5μl，重复进样6次测定峰面积。结果，峰面积RSD=％，表明仪器精密度良好。

稳定性试验

取“”项下的供试品溶液。分别于0，4，16，24，48h时按“”项下色谱条件进样测定5次。结果：峰面积RSD=％。表明供试品溶液在48h内稳定性较好。

醇提组最佳工艺确定

正交试验结果见表5，方差分析结果见表6。按下列公式计算评分值：出膏率加权评分(y1)＝(出膏率-13)/×100；黄芪甲苷含量加权评分(y2)=(测定量-5)/×100。综合评分=/2。表5醇提组的正交试验结果表6方差分析结果

由表5可见，3个因素的级差大小顺序为CAB，提取时间对提取工艺的影响最大，醇浓度影响较大，醇用量影响最小，实验结果最佳工艺为A2B2C3。由表6可见，提取时间有显着性，醇浓度、醇用量无显着性。考虑生产成本，确定A1B1C3为最佳工艺，即用6倍量60％醇溶液，提取2次，分别为、。按优选的最佳工艺提取3批样品进行验证实验，可知，三批样品出膏率分别为％、％、％；大黄酸含量分别为、、/g。验证结果表明工艺基本稳定可行。

3讨论

验方中大黄取其解毒泄下之功，以清体内热毒，使湿热由下而去；取其活血祛瘀之功，使血行通畅，瘀血得解；一药两用，为君药。而其中大黄酸具有抗菌抗炎作用，故醇提组选择以大黄酸作为含量测定指标。黄芪取其补气之功而治前列腺增生日久气虚之候，而其利水之功又可助它药以泄湿，故水提组以黄芪甲苷作为指标成分。黄芪等药味中的活性成分在水中有较好的溶解度，故考虑用传统的水煎煮提取。大黄、牛膝等醇提组药物中有效成分在醇溶液中溶解度较大。

前列宁颗粒为复方制剂，成分复杂。试验选择以浸膏得率和相应的含量测定为指标，可综合评价工艺的合理性。采用正交设计的试验方法对提取工艺进行优化筛选，确定的提取工艺简便、科学，符合生产要求。

【参考文献】

［1］周建衡，洪