阴道微生态评价

阴道微生态评价第一页，共三十二页，编辑于2023年，星期四护理生殖道关注微生态最重要！第二页，共三十二页，编辑于2023年，星期四阴道粘膜阴道正常菌群阴道免疫系统阴道微生态概念阴道防御系统阴道微生态是阴道最重要的防御系统第三页，共三十二页，编辑于2023年，星期四阴道原籍菌(乳酸杆菌)数量:8x107cfu/ml5%95%123

正常育龄妇女阴道菌群由六种不同种类的细菌以及念珠菌、支原体等组成。正常阴道内有100种微生物存在。这些微生物在阴道内形成生态平衡。阴道菌群（阴道的微生态系统）阴道微生态概念第四页，共三十二页，编辑于2023年，星期四CFU(Colony-FormingUnits)经培养所得菌簇形成单位的英文缩写。细菌（可见）和真菌的测量单位。cfu:colony-formingunit，菌落形成单位，将稀释后的一定量的菌液通过浇注或涂布的方法，让其内的微生物单细胞一一分散在琼脂平板上，待培养后，每一活细胞就形成一个菌落。与常规利用显微镜对微生物数量进行测量不同，主要是对可见（即多数情况下形成菌落）的细菌数量进行测量的单位。意思就是每毫升菌液中含有多少单细胞！第五页，共三十二页，编辑于2023年，星期四阴道粘膜上皮细胞纵切面示意图（过路菌）乳杆菌（原籍菌）（条件致病菌）是由不同种属的宿主传来的是其自身宿主个体对其无免疫反应或低免疫反应，是宿主个体固有的菌群是由同种属不同宿主个体传来的阴道微生态概念第六页，共三十二页，编辑于2023年，星期四乳杆菌的作用机制分解糖原，维持阴道酸性环境。产生多种抑菌物质：乙酸、16-18碳脂肪酸

H202、乳酸菌素、硬脂酸等。竞争粘附：也称占位性保护。竞争营养物质：大量定位于阴道中的乳杆菌处于竞争优势状态，利用阴道上皮细胞中的糖原，减少其他细菌的碳源供应，通过竞争营养物质而干扰一些厌氧菌如白色假丝酵母菌（白念）的生长。第七页，共三十二页，编辑于2023年，星期四维持酸性环境形成保护性菌膜杀灭致病菌乳酸杆菌正常阴道菌群作用阴道微生态平衡的核心：维持乳酸菌特别是产H2O2乳酸菌在阴道菌群中的优势地位！

在阴道粘膜表面形成一层保护性菌膜，防止入侵微生物在阴道粘膜上定植乳酸菌产生的乳酸使阴道分泌物维持酸性环境；乳酸菌产生的H2O2可杀灭入侵的致病菌。阴道微生态概念第八页，共三十二页，编辑于2023年，星期四

乳杆菌数量减少，生化指标改变，阴道微生态破坏阴道菌群失调各类阴道炎加重阴道菌群失调各种诱因各类阴道炎的共性---源于或伴有微生态破坏！为什么要关注阴道微生态第九页，共三十二页，编辑于2023年，星期四菌群演变造成菌群结构改变，特点：1、厌氧菌需氧菌、等条件致病菌大量增加

2、乳酸菌特别是产过氧化氢乳酸菌减少或消失所有的阴道感染都源于或伴有阴道微生态改变第十页，共三十二页，编辑于2023年，星期四

乳酸菌%厌氧菌%加德纳菌%支原体%

LB-

LB正常80-10070-100

10-400-30

20-40宫颈炎10-4010-3030-5020-4060-80BV

0-20

0-10

40-70

60-80

40-60滴虫阴道炎10-400-2010-300-3020-40霉菌阴道炎20-500-4020-3010-4020-30

老年性阴道炎0-200-1040-6020-4050-60第十一页，共三十二页，编辑于2023年，星期四通过形态学、生物化学、免疫学和分子生物学等方法所获得的阴道菌群数量和功能方面的信息分析阴道菌群结构的演替正常优势菌的菌群数量与功能变化条件致病微生物菌群数量与功能变化外来致病微生物菌群数量与功能变化机体反应水平如何评价阴道微生态？--阴道微生态评价的内涵为什么要关注阴道微生态第十二页，共三十二页，编辑于2023年，星期四形态学＋生物标志物菌群数量与功能的变化形态学评价---菌群数量的变化：

形态学的方法系统的方法----------阴道微生态评价内容阴道微生态评价的内容第十三页，共三十二页，编辑于2023年，星期四

标本中细菌分布、排列的密集程度，即每克或每毫升标本中的菌落数。分级标准(放大倍10×100观察每视野平均细菌数)I级（记为“+”）1个～9个

II级（记为“++”）

10个～99个

III级（记为“+++”）

100个以上

IV级（记为“++++”）细菌聚集成团

(涂片中所见细菌种类)

I级（记为“+”）能辨别1～3种细菌；

II级（记为“++”）

能辨别4～6种细菌；

III级（记为“+++”）能辨别7～10种细菌；

IV级（记为"++++"）能辨别11种以上细菌。(局部有无炎症---菌群的致病性)有无白细胞、脓细胞渗出，有无吞噬现象等。？菌群的密集度机体炎性反应菌群的多样性优势菌阴道微生态形态学评价

存在的问题

形态学评价结果的可靠性与实验室人员的技能和责任有关不能了解阴道菌群中正常优势菌和有害菌的功能阴道微生态评价的内容第十四页，共三十二页，编辑于2023年，星期四

A、正常优势菌功能生物学标志B、致病微生物与条件致病微生物增殖的生物学标志C、机体反应性的生物学标志了解菌群数量的变化形态学评价生物标志物了解菌群数量与功能的变化阴道微生态系统评价阴道微生态评价的内容第十五页，共三十二页，编辑于2023年，星期四

唾液酸苷酶BV↑门冬酰胺蛋白酶霉菌性阴道炎↑胱胺酰蛋白酶滴虫性阴道炎↑乳酸脱氢酶急性化脓性阴道炎↑透明质酸酶BV、淋菌性阴道炎↑白细胞酯酶宫颈炎及各种阴道感染↑

短链脂肪酸（如乙酸、琥珀酸）增加单胺和多胺增加（胺试验阳性）菌胞壁糖类（如阿拉伯醇糖）增加

阴道微生态评价的方法生物化学方法微生物学方法分子生物学方法免疫学方法1优势菌(乳酸菌)功能的生化标志物2致病与条件致病微生物增殖的生化标志物3机体反应性的生化标志物

乳酸菌代谢包括：过氧化氢、乳酸乳酸菌素微生物代谢产物

细菌、衣原体等病原体大量增殖→白细胞吞噬病原体过多→病原体释放的水解酶和毒素分解白细胞壁→白细胞酯酶释放到胞外→分泌物中白细胞酯酶活性增高。第十六页，共三十二页，编辑于2023年，星期四过氧化氢浓度SNA活性LE活性生态优势菌指标致病菌指标宿主反应指标卫生部十年百项计划推广项目江西省星火计划项目浙江省医药卫生科技重点推广项目了解阴道菌群结构和功能的变化，评价阴道的微生态状况阴道微生态评价适宜技术

阴道微生态评价适宜技术--------细菌性阴道病联合测定技术介绍

第十七页，共三十二页，编辑于2023年，星期四标本采集要规范各种病原体的性质和检测要求的不同，决定了标本的种类、取材部位、和保存条件标本运输方式等都有不同，采集标本上如有错误或疏忽，都会影响检验结果。标本采集的规范第十八页，共三十二页，编辑于2023年，星期四

一般阴道感染诊断的取材，须取阴道后穹隆部位的分泌物。取材前，要用一支棉签揩去取材部位堆积的脓液，用另一支棉签取材，为提高阳性率，还可采用重复两次取材或两个部位的标本混合后检验的方法。

要尽量使用大一些的棉签取样，要将棉签在取材部位旋转并停留20秒

要使用试剂盒配套的保存液保存标本。标本在2-8℃保存不宜超过2天。取材之前24小时内，应无性交、无盆浴或阴道冲洗；在48小时内未使用阴道润滑剂或阴道“兴奋剂”等化学物质一般要求取材部位要准确取材方法要得当标本量要充足标本要正确保存及时检验正确取材要把握一下几点标本采集的规范第十九页，共三十二页，编辑于2023年，星期四检验原理H2O2——阴道乳酸杆菌标志物唾液酸苷酶NAase——加德纳菌、游动弯曲杆菌等BV致病菌的标志物。白细胞酯酶——炎性细胞的标志物。第二十页，共三十二页，编辑于2023年，星期四H2O2（反应装置上部的反应孔）阴道液中过氧化氢经过过氧化物酶作用，释放出新生态氧，后者在4-氨基安替吡啉存在下，使3,5-二氯-2-羟基苯磺酸氧化成红色或紫色，在反应系统中加入3,5-二氯-2-羟基苯磺酸的拮抗物，当标本中H2O2浓度≥2μmol/L，反应结果呈红色或紫色，呈色深度与H2O2

浓度成正比，标本中H2O2浓度＜2μmol/L，反应结果呈蓝色。结果判读：阴性：显红色、紫色或蓝紫色阳性：蓝色参考范围：≥2μmol/L为阴性第二十一页，共三十二页，编辑于2023年，星期四唾液酸苷酶活性测定

（反应装置中部的反应孔）唾液酸苷酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚神经氨酸盐，释放出溴吲哚基遇重氮盐起反应呈红色或紫色，呈色深度与唾液酸苷酶活性呈正比。结果判读：阴性：不显色或黄色阳性：红色、紫色或蓝色，显蓝色表示唾液酸苷酶活性浓度很高。参考范围：＜7U/ml为阴性第二十二页，共三十二页，编辑于2023年，星期四白细胞酯酶（反应装置下部的反应孔）白细胞酯酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸盐，释放出溴吲哚基，后者在氧的条件下呈蓝色或绿色，呈色深度与白细胞酯酶活性成正比。结果判读：参照比色板比色判读结果阴性：“-”或“±”阳性：“+”、“++”、“+++”参考范围：白细胞酯酶＜7U/ml为阴性第二十三页，共三十二页，编辑于2023年，星期四

产过氧化氢乳酸菌占优势地位

粘膜修复炎症消失

无引发BV的细菌繁殖正常正常阴性异常增

高阳性过氧化氢浓度LE活性SNa活性乳酸菌减少或消失各种阴道感染致病菌、条件致病菌增加阴道微生态评价适宜技术第二十四页，共三十二页，编辑于2023年，星期四纠正了以白细胞升高才为“炎症”的生殖道感染的概念阴道感染诊断治疗思路的新突破临床用途指导妇产科临床医师从微生态角度重新审视妇科感染性疾病；关注感染及治疗后的阴道微生态状况，树立“将阴道微生态恢复正常作为阴道炎治疗的最终目标”的理念。A、弥补现有白带常规检查只做形态学检查、不做生化检查，不能准确判断感染的程度及阴道微生态、不能评价预后等不足；B、阴道微生态评价C、从微生态角度评价阴道炎是否治愈；D、阴道生态制剂的用药指标；E、了解产后阴道生态，确定是否恢复性生活；F、BV诊断与疗效评价，需氧菌阴道炎、衣原体感染筛查。阴道微生态评价意义第二十五页，共三十二页，编辑于2023年，星期四机体反应的生化标志物白细胞对细菌的吞噬过程阴道微生态评价的内容第二十六页，共三十二页，编辑于2023年，星期四

白细胞数量与白细胞酯酶的关系