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文档简介

河南中医学院

第二临床医学院诊断学科

.第一页,共八十二页。.第二页,共八十二页。输血前检测第一节病毒性肝炎第二节艾滋病

第三节梅毒

.第三页,共八十二页。第一节病毒性肝炎血清标志物检测

.第四页,共八十二页。病毒性肝炎的实验诊断

我国属病毒性肝炎高发区,全国有肝炎病人2700万人,每年新发病例900万人,HBsAg携带者达一亿二千万人。慢性肝炎中有50~70%有活性性病毒复制,30%开展为肝硬化,5~10%开展为肝癌,故我国又是原发性肝细胞癌的高发国家,慢性HBV携带者患肝癌危险性较非携带者高100倍。.第五页,共八十二页。.第六页,共八十二页。病毒性肝炎分类(ClassificationofViralHepatitis)1、已确定的肝炎:甲、乙、丙、丁、戊五种。2、未定论的:己、庚和输血传播病毒〔TTV〕引起的肝炎。3、非甲~戊型肝炎.第七页,共八十二页。5型病毒性肝炎病原体、流行病学和临床特征.第八页,共八十二页。5型病毒性肝炎病原体、流行病学和临床特征.第九页,共八十二页。一、甲型肝炎病毒标志物检测1RNA病毒2只有1个血清型4引起典型的急性黄疸性肝炎3通过消化道〔粪-口〕途径传播.第十页,共八十二页。一、甲型肝炎病毒标志物检测检查:HAV常在转氨酶升高前5~6天就存在于患者的血液和粪便中。发病2周开始,粪便中不再排出HAV。目前临床上主要采用酶联免疫吸附试验〔ELISA〕和放射免疫分析〔RIA〕法检测HAV-IgM和HAV-IgG,其次检测HAVAg。HAV-RNA可采用PCR技术检测。.第十一页,共八十二页。一、甲型肝炎病毒标志物检测【参考值】均为阴性抗HAV-IgM、抗HAV-IgA、抗HAV-IgGHAVAgHAV-RNA.第十二页,共八十二页。一、甲型肝炎病毒标志物检测★【临床意义】〔1〕抗HAV-IgM是病毒衣壳蛋白抗体,于HAV感染1周后产生,血中持续3~6个月,是早期诊断甲肝的特异性抗体。抗HAV-IgA是感染早期肠道粘膜分泌的局部抗体。

.第十三页,共八十二页。一、甲型肝炎病毒标志物检测【临床意义】〔2〕抗HAV-IgG代表着抗HAV总抗体,甲肝初期血中滴度已相当高,2~3个月达顶峰。抗HAV-IgG为保护性抗体,病愈后可长期存在.对流行病学调查和接种疫苗效果的观察有重要意义。.第十四页,共八十二页。一、甲型肝炎病毒标志物检测【临床意义】〔3〕HAVAg存在于HAV感染后10~20天的粪便中,其阳性可证实HAV在体内的存在.见于急性期甲肝。发病第1周时粪便阳性率为42.9%,1~2周为18.3%,2周后消失。.第十五页,共八十二页。一、甲型肝炎病毒标志物检测【临床意义】〔4〕HAV-RNA从分子水平对HAV抗原给以更准确的说明.对甲型肝炎的诊断具有特异性,对早期诊断的意义更大。临床少用。.第十六页,共八十二页。二、乙型肝炎病毒标志物检测

.第十七页,共八十二页。〔一〕HBV的形态结构形态:球形颗粒,直径约42nm外膜:厚约7nm,HBsAg+脂类内核〔核衣壳〕:直径27nm,HBcAg、DNAP、病毒DNA、少量来源于宿主的磷酸激酶.第十八页,共八十二页。BiologicalFeaturesofHBV42nm22nm30-40nm.第十九页,共八十二页。〔二〕HBV在血清中的存在形式完整的病毒颗粒(Dane颗粒),如前述,能复制,有传染性;②乙肝外表抗原颗粒,为22nm的小球型颗粒,由HBsAg和脂类组成,不含DNA,不能复制,不具有传染性*,数量最多;③管型颗粒,长30-40nm的,由HBsAg和脂类组成,不含DNA,不能复制,不具有传染性*,血清中数量最少。.第二十页,共八十二页。〔三〕检查工程及临床意义目前实验室常用的至少有四对抗原抗体系统:HBsAg和抗-HBs

HBcAg和抗-HBc

HBeAg和抗-HBe

Pre-S2和抗Pre-S2

及乙型肝炎病毒DNA.第二十一页,共八十二页。1.乙型肝炎病毒外表抗原〔HBsAg〕[参考值]ELISA法为阴性〔P/N≤2.1〕[临床意义]阳性见于急性乙肝的潜伏期,发病时达顶峰;如果发病后3个月不转阴,那么易开展成慢性乙型肝炎或肝硬化。携带者HbsAg也呈阴性,HbsAg是HBV的外壳,不含DNA,故HbsAg本身不具传染性。.第二十二页,共八十二页。★总结HBsAg阳性的意义

〔1〕HBV感染的潜伏期;〔2〕乙型肝炎急性期;〔3〕慢性或迁延性乙型肝炎活动期;〔4〕肝炎后肝硬化或原发性肝癌;〔5〕无病症HBsAg长期携带者。(6)HbsAg阴性不能完全排除慢性乙型肝炎.第二十三页,共八十二页。血清别离不佳或用肝素抗凝血常导致HBsAg假阳性注意.第二十四页,共八十二页。HBsAg假阴性常见的原因为:①5%的急性感染者肝炎病症出现后仍阴性,极少数的慢性感染者也为HBsAg阴性,这种情况需要检测抗HBc-IgM及HBVDNA;注意.第二十五页,共八十二页。HBsAg假阴性②S基因突变导致HBsAg的氨基酸结构改变,由于多数商用试剂盒检测系统采用的为多克隆抗体检测HBsAg的a决定簇,这一区域的点突变即可导致临界测定值或阴性结果;注意.第二十六页,共八十二页。HBsAg假阴性③由于慢性病毒携带者〔低水平HBsAg携带者〕或HBV感染潜伏期,HBsAg浓度低于检测水平的下限。注意.第二十七页,共八十二页。2.乙型肝炎病毒外表抗体测定乙型肝炎病毒外表抗体是患者对HbsAg所产生的一种抗体,它对HbsAg有一定的中和作用,说明机体具有一定的免疫力。[参考值]ELISA法为阴性〔P/N≤2.1〕;[临床意义]抗-HBs是种保护性抗体,可阻止HBV穿过细胞膜进入新的肝细胞,提示机体对乙肝病毒有一定程度的免疫力。抗-HBs一般在发病后3~6个月才出现,可持续多年。.第二十八页,共八十二页。★总结血清抗-HBs检测的意义〔1〕在乙型肝炎感染率调查时,HBsAg、抗-HBs和抗-HBc均为感染率的指标。在这三项指标中,只要其中一项阳性,表示受过HBV感染。〔2〕抗-HBs是对HBV免疫的指标,抗-HBs阳性率和滴度表示人群的免疫状况。

.第二十九页,共八十二页。血清抗-HBs检测的意义〔3〕乙型肝炎的诊断和鉴别诊断,在HBV感染后3个月,血清中出现抗-HBs。采集双份血清〔急性期和恢复期〕同时检测,抗-HBs阳转,或恢复期与急性期比较,抗体滴度有4倍或4倍以上增长,表示这次感染为HBV感染。

.第三十页,共八十二页。血清抗-HBs检测的意义〔4〕乙型肝炎疫苗免疫效果考察。在疫苗免疫前后,采集血清检测抗-HBs,如抗-HBs阳转或抗体滴度明显提高,表示疫苗免疫效果良好。否那么免疫效果不佳。〔5〕对乙型肝炎预后的判断。抗-HBs的出现表示疾病处于恢复期,预后较佳。.第三十一页,共八十二页。同时可检出抗HBs及HBsAg见于:急性HBV感染时一过性存在,两者浓度均很低〔以免疫复合物的形式出现〕,以后再采血检测仅有抗HBs;前后或同时感染两种亚型HBV,HBsAg短暂或持续存在反映其中一种亚型感染,抗HBs及HBsAg同时检出通常要持续很久,且浓度均很高;.第三十二页,共八十二页。同时可检出抗HBs及HBsAg见于:抗HBs假阳性;编码HBsAg的基因变异使得HBsAg抗原性改变,原型抗HBs不能将其去除。.第三十三页,共八十二页。3.乙型肝炎病毒e抗原测定乙型肝炎病毒e抗原是HBV核心颗粒中的一种可溶性蛋白质,具有抗原性。[参考值]ELISA法为阴性〔P/N≤2.1〕;★[临床意义]HbeAg阳性说明乙型肝炎处于活动期,并有较强的传染性。孕妇阳性可引起垂直传播,致90%以上的新生儿呈HbeAg阳性。HbeAg持续阳性,说明肝细胞损害较重,且可转化为慢性乙型肝炎或肝硬化。.第三十四页,共八十二页。注意!

前C区基因变异〔如1896位gua变为-arg导致终止密码子的出现干扰了HBeAg的翻译〕导致不能生成和分泌HBeAg,血清中HBeAg阴性,但这种突变并不影响乙肝病毒的复制,仍可形成完整的病毒颗粒,该种情况下尽管检测不到HBeAg,慢性HBV感染炎症反响也相当强。.第三十五页,共八十二页。4.乙型肝炎病毒e抗体测定乙型肝炎病毒e抗体是病人或携带者经HbeAg刺激后所产生的一种特异性抗体,常继HbeAg后出现在血液中。[参考值]ELISA法为阴性〔P/N≤2.1〕★[临床意义]抗-Hbe阳性表示大局部乙肝病毒被消除,复制减少,传染性降低,但并非无传染性。.第三十六页,共八十二页。5.乙型肝炎病毒核心抗原测定乙型肝炎病毒核心抗原存在于Dane颗粒的核心部位,是一种核心蛋白,其外面被乙型肝炎外表抗原所包裹,所以一般情况下血清中不易检测到游离的HbcAg。[参考值]ELISA法为阴性;RIA法为阴性。★[临床意义]HbcAg阳性,提示病人血清中有感染性的HBV存在,其含量较多,表示复制活泼,传染性强,预后较差。约有78%的阳性病例病情恶化。.第三十七页,共八十二页。★6.

乙型肝炎病毒核心抗体测定乙型肝炎病毒核心抗体是HbcAg的抗体,可分为IgM、IgG和IgA三型。〔1〕抗-HBc总抗体主要反映的是抗-HbcIgG。抗-HBc检出率比HBsAg更敏感,可作为HBsAg阴性的HBV感染的敏感指标。抗-HBc检测也可用作乙型肝炎疫苗和血液制品的平安性鉴定和献血员的筛选。抗-HbcIgG对机体无保护作用,其阳性可持续数十年甚至终身。.第三十八页,共八十二页。(2〕

抗-HbcIgM测定[参考值]ELISA法为阴性〔P/N〈2:1〉[临床意义]急性乙肝的发病期,血中抗-HbcIgM100%阳性,滴度较高,持续6-18个月。抗-HbcIgM既是乙型肝炎近期感染指标,也是HBV在体内持续复制的指标,并提示病人血液有传染性。抗-HbcIgM阴性,预示乙型肝炎逐渐恢复;抗-HbcIgM转阳,预示乙型肝炎复发。

.第三十九页,共八十二页。(3)

抗-HbcIgG测定[参考值]ELISA法为阴性[临床意义]抗-HbcIgG是在发病后1个月左右升高,可持续终身。它是HBV既往感染的指标,不是早期诊断指标,常用于乙型肝炎流行病学调查。.第四十页,共八十二页。注意!A、临界阳性一般是假阳性,是由于IgM型引起的交叉反响。B、抗HBc阴性而HBsAg阳性一般发生在免疫缺陷病例,这时存在HBV复制的其他标志如HBeAg及高滴度的HBVDNA。.第四十一页,共八十二页。注意!C、对抗HBc单独阳性,排除假阳性后,美国CDC有以下解释:①急性感染后的恢复早期〔窗期〕在HBV急性感染消退时,HBsAg减少甚至消失,抗HBs尚未出现,抗HBc是唯一能检出的特异性指标,此时抗HBcIgM也为阳性。②被动转移:HBsAg携带者母亲所生的婴儿可因母体抗体被动转移〔抗HBc可通过胎盘〕而呈现抗HBc单独阳性。

.第四十二页,共八十二页。注意!C、对抗HBc单独阳性,排除假阳性后,美国CDC有以下解释:③远期感染伴抗HBs消失,这种情况通常在感染后多年才会发生,且相当少见〔0.5%〕。④远期感染伴有低水平HBsAg。⑤HDV重复感染继发HBsAg产生下降.第四十三页,共八十二页。抗HBc始终不出现或延迟出现者占一定比例,可能系

1.与抗原复合2.种族差异3.免疫缺陷,如化疗后4.基因变异.第四十四页,共八十二页。

Anti-HBc:反映HBV感染状况HBcAg:是HBV复制的直接指标Anti-HBcIgG:曾经感染或现正感染HBVAnti-HBcIgM:病毒在体内复制总结

.第四十五页,共八十二页。7.乙型肝炎病毒外表抗原蛋白前S2和前S2抗体测定乙型肝炎病毒外表抗原蛋白前S2〔Pre-S2〕是HBV外表蛋白成分,为HBV侵入肝细胞的主要结构成分;乙型肝炎病毒外表抗原蛋白前S2抗体〔抗Pre-S2〕是HBV的中和抗体。

.第四十六页,共八十二页。7.乙型肝炎病毒外表抗原蛋白前S2和前S2抗体测定[参考值]ELISA法或RIA法:Pre-S2为阴性;抗Pre-S2为阴性[临床意义]Pre-S2阳性提示HBV复制异常活泼,有传染性。抗Pre-S2阳性见于乙肝急性期及恢复早期;提示HBV已被去除,预后较好。.第四十七页,共八十二页。

8.乙型肝炎病毒DNA测定乙型肝炎病毒DNA〔HBV-DNA〕呈双股环形,是HBV的基因物质,也是乙型肝炎的直接诊断证据。[参考值]HBV-DNA斑点杂交试验和聚合酶链反响为阴性[临床意义]HBV-DNA阳性是诊断乙型肝炎的佐证,说明HBV复制及有传染性。.第四十八页,共八十二页。常规检测HBV抗原抗体的根本解释HBsAg急慢性HBV感染;可能具有传染性;浓度降低说明感染恢复HBeAg反映HBV复制;有传染性;其消失说明急慢性HBV感染正在恢复抗-HBs感染后免疫;对疫苗的免疫应答抗-HBe表示HBV低复制或不复制抗-HBc低滴度表示过去感染,高滴度表示现行感染抗HBc-IgM高滴度是诊断急性HBV感染最好的指标,监视慢性HBV感染。.第四十九页,共八十二页。常见模式HBsAgHBV五项血清标志物联合检测的临床意义常见模式HBsAg抗-HBsHBeAg抗-Hbe抗-HBc临床意义1+-+-+急性或慢性乙型肝炎,高传染性2+--++急性乙肝趋向恢复或慢性乙肝,弱传染性3+---+急、慢性乙型肝炎4-+-++乙肝恢复期,开始有免疫力5-+--+HBV感染恢复期有即往感染史有一定的免疫力6-+---疫苗接种后或HBV感染后康复7---++乙肝恢复期,弱传染性----+急性HBV感染窗口期或即往曾感染过乙肝,有流行病学意义9-----未感染乙肝病毒.第五十页,共八十二页。三、丙型肝炎病毒标志物检测1RNA病毒2血清型多3基因组容易变异

4通过血液传播5易转变为慢性肝炎.第五十一页,共八十二页。三、丙型肝炎病毒标志物检测HCV为直径30~60nm的RNA病毒,可通过体液途径和母婴传播,但HCV主要通过输血而感染,占输血后肝炎的80%~90%,HCV主要在宿主的肝细胞内复制,引起的丙型肝炎虽较乙型肝炎轻,但更易转变为慢性。.第五十二页,共八十二页。三、丙型肝炎病毒标志物检测主要检测抗-HCVIgM

抗-HCVIgGHCV-RNA。【参考值】均为阴性.第五十三页,共八十二页。三、丙型肝炎病毒标志物检测★【临床意义】〔1〕丙型肝炎抗体的检测①急性丙型肝炎患者,发病后4周抗-HCVIgM即可阳性,持续1~4周,6个月内不能转阴者提示转为慢性丙型肝炎;②抗-HCVIgG阳性说明已有HCV感染。输血后肝炎有80%~90%的患者抗-HCVIgG阳性。经常接受血制品治疗的患者可以合并HCV的感染,易使病变转为慢性,肝硬化或肝癌。丙型肝炎抗体是有传染性的标志而不是保护性抗体,故阴性者不能排除丙型肝炎。.第五十四页,共八十二页。三、丙型肝炎病毒标志物检测【临床意义】〔2〕HCV-RNA的检测HCV感染后1~2周即可从血中检出HCV-RNA。HCV-RNA的阳性提示HCV复制活泼,传染性强。连续观察HCV-RNA,结合抗-HCV的动态变化,可作为丙肝的预后判断和干扰素等药物疗效的评价指标。.第五十五页,共八十二页。四、丁型肝炎病毒标志物检测1缺陷型RNA病毒2只有在HBV存在的体内复制.第五十六页,共八十二页。四、丁型肝炎病毒标志物检测HDV感染发生于以下两种情况:①HDV和HBV同时感染;②对慢性乙型肝炎病人或HBV携带者发生重叠感染。.第五十七页,共八十二页。四、丁型肝炎病毒标志物检测HDV的标志物HDVAg抗-HDVIgG抗-HDVIgMHDV-RNA

.第五十八页,共八十二页。四、HepatitisDvirusInfection【参考值】HDVAg、抗-HDVIgG和抗-HDVIgM:RIA和ELISA法均为阴性;

HDV-RNA:RT-PCR法为阴性。.第五十九页,共八十二页。四、丁型肝炎病毒标志物检测

〔1〕HDVAg在感染后出现较早,但持续时间短〔1~2周〕。HDVAg与HBsAg同时阳性,表示丁肝与乙肝病毒同时感染易迅速开展为慢性或重型肝炎。

★【临床意义】.第六十页,共八十二页。四、丁型肝炎病毒标志物检测【临床意义】〔2〕抗-HDVIgG阳性:只能在HBsAg阳性的血清中测到,是诊断丁型肝炎的可靠指标,且可以持续多年。抗-HDVIgM出现较早,用于早期诊断。HDV和HBV联合感染时,抗-HDVIgM一过性升高HDV和HBV重叠性感染时,抗-HDVIgM持续性升高.第六十一页,共八十二页。四、丁型肝炎病毒标志物检测【临床意义】〔3〕HDV-RNA阳性

确诊丁型肝炎.第六十二页,共八十二页。五、戊型肝炎病毒标志物检测1.直径为27~38nm的球形RNA病毒2.通过粪-口〔消化道〕途径传播3.主要表现为急性肝炎〔急性黄疸性肝炎〕.第六十三页,共八十二页。五、戊型肝炎病毒标志物检测检测可自患者粪便中用电镜或免疫电镜技术检测HEV,或用PCR法检测粪便中的HEV-RNA。目前,临床诊断常检测抗-HEVIgG和抗-HEVIgM。.第六十四页,共八十二页。五、戊型肝炎病毒标志物检测[参考值]RIA和ELISA法均为阴性★[临床意义]95%的急性期病人抗-HEVIgM阳性〔持续2~3个月〕,是确诊HEV感染较为可靠的指标;抗-HEVIgG阳性〔可持续约1年〕,目前倾向于认为是一种保护性抗体,提示HEV近期感染。

.第六十五页,共八十二页。六、庚型肝炎病毒标志物检测庚型肝炎病毒〔HGV〕侵入人体后,机体可产生相应的抗体[参考值]RIA和ELISA法均为阴性[临床意义]抗-HGV阳性表示曾感染过HGV,多见于输血后肝炎或使用血液制品引起HGV合并HCV感染的患者。.第六十六页,共八十二页。.第六十七页,共八十二页。.第六十八页,共八十二页。.第六十九页,共八十二页。.第七十页,共八十二页。.第七十一页,共八十二页。第二节人获得性免疫缺陷病毒抗体及RNA测定人获得性免疫缺陷病毒是艾滋病〔AIDS〕的病原体,它是一种逆转录病毒,其基因为单链RNA,可分为HIV-1型和HIV-2型。当机体感染HIV数周到半年后,绝大多数患者体内可出现抗-HIV抗体。.第七十二页,共八十二页。第二节人获得性免疫缺陷病毒抗体及RNA测定[参考值]★①筛选实验:ELISA法和快速蛋白印迹法〔rapidWesternblotting,RWB〕均为阴性;★②确诊试验:蛋白印迹法〔Westernblotting,WB〕和RT-PCR法检测HIV-RNA均为阴性。.第七十三页,共八十二页。第二节人获得性免疫缺陷病毒抗体及RNA测定

[临床意义]筛选试验敏感性高,但特异性不高,故有假阳性;所以筛选试验阳性时需用确诊试验证实。确诊试验阳性,特别是RT-PCR法检测HIV-RNA均为阳性,对肯定诊断和早期诊断颇有价值。.第七十四页,共八十二页。第二节人获得性免疫缺陷病毒抗体及RNA测定3.临床上抗-HIV阳性,又具有体重减轻10%以上、持续发热达38℃一个月以上、持续腹泻一个月以上、卡

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