采用离子色谱法对黄酒中氨基酸的比较省级科研计

采用离子色谱法对黄酒中氨基酸的比较研究诸葛庆，李博斌，刘兴泉，郑云峰（国家黄酒产品质量监督检测中心绍兴312071）摘要：准确测定黄酒中的氨基酸对研究黄酒的营养价值和黄酒风味具有重要的意义，本研究采用了阴离子交换色谱法-积分脉冲安培检测法测定了江西、绍兴、福建三地黄酒中的氨基酸。分析结果显示，绍兴黄酒、福建黄酒的氨基酸总量较高，平均含量分别是3946.56mg/L、3726.80mg/L，江西黄酒氨基酸含量为1634.33mg/L，每种黄酒的呈味氨基酸以甜味氨基酸和苦味氨基酸为主，它们占80%左右。关键词：阴离子交换色谱法；积分脉冲安培检测；氨基酸；黄酒黄酒是我国的民族特产，黄酒是以稻米、黍米、玉米、小米、小麦等粮食为主要原料，经蒸煮、糖化、发酵、压榨、过滤、贮存、勾兑等工艺生产的酿造酒。黄酒酒精度低、耗粮较少、富含多种氨基酸、蛋白质、维生素和对人体有益的矿物元素，营养丰富[1]。黄酒中含有多种多量的氨基酸，黄酒中的氨基酸主要是曲霉菌的酸性蛋白霉和酸性羧肽酶对蒸煮后的原料米中的蛋白质起作用而产生的，是黄酒中的主要成分之一，不仅是黄酒的营养成分，也是黄酒的风味物质或风味的前驱体，对黄酒的风味起着重要作用[2,3]。氨基酸具有鲜、甜、苦、涩等多种味感，赋予了黄酒丰富的味觉层次，使黄酒具有鲜美、醇和、浓郁、柔润、协调和多滋多味的特征[4]。黄酒中的呈味氨基酸与黄酒的风味有着很大的联系，因此准确的对黄酒中的氨基酸进行定性和定量分析是非常有必要的。但是氨基酸种类繁多、性质接近，氨基酸分析是色谱界公认的难题。现在常用的方法有离子交换色谱法，基于反相色谱分离、柱前衍生、荧光或紫外检测的高效液相法，阴离子交换分离直接安培法检测的离子色谱法，衍生化气相色谱法和毛细管电泳法，这些方法在检测氨基酸方面还存在一定的不足。本研究所用的高效阴离子交换色谱-积分脉冲安培检测法（HPAEC-IPAD）是一种新的氨基酸分析方法[5]。此方法是基于氨基酸分子中的羧基在强碱性介质中可以形成阴离子，而氨基酸分子中的氨基在强碱性介质中通过施加一定的电位，可在贵金属（金、铂）电极表面发生氧化反应，从而实现氨基酸的阴离子交换色谱分离和积分脉冲安培检测[6,7,8]。1实验部分1.1仪器和试剂美国DionexDX-600型离子色谱仪，配有GS50四元梯度泵，AS40自动进样器，AS50色谱柱室，ED50电化学检测器，PeakNet色谱工作站。17种氨基酸混合标样，乙酸钠（Dionet,USA），氢氧化钠、叠氮化钠为分析纯。标准溶液的配制：用20mg/L叠氮化钠水溶液配制成氨基酸标准溶液。淋洗液：去离子水、0.25mol/LNaOH、1.0mol/LNaAc。1.2色谱条件色谱柱：AminoPacPA10阴离子交换柱，包括分析柱（2×250mm）和保护柱（2×50mm）。召淋洗鼻条件共：采豆用梯菠度洗肚脱，这梯度还淋洗译条件凶见表征1，剪流速碎：0糟.2料5m许L/散mi鞋n。贝检测巡条件乱：积纤分脉械冲安熄培法仁检测冤。窗柱温成：3揉0根℃呼。炼进样码体积娱：2滥5亮L泥表1找分删离氨般基酸速的梯初度淋当洗程课序每Ti葵me浑(m梅in览)略Wa秘te匆r搂(%侨)雪0.债25飘职mo瑞l/创L钟Na巡OH是(%涂)塌1填mo竞l/刃L能Na墙AC鹅(%涝)效Cu允rv慧e聚0.佩0现93委7店2.炸0樱90钥10吊5逮5.陕0夸85剧15获8霜11头.0宏64杯36惩8哗13华.0絮64吓36轨15余.0炉60笋40斤8江20脚.0滴30绿70环8量25百.0熄30例70生25晋.1妖27堂70缴3巴8住33予.0食23充70角7诱8倒38脾.0画20地70煌10伍8堤45首.0氏10材70地20敬8续50叠.0黎10钟30蹦60循8棕60恒.0会10秧30唯60捎1.吓3员样定品前障处理絮样品闪在分氏析前致用去叨离子辫水稀咸释5讨00璃倍，旷经过互0.币45裕µ授m的罢滤膜谎过滤相直接筝进样辨分析选。挣２衔结果顶与讨母论轮2.赏1骂氨基请酸的怜色谱甲分离古实验虫所测以定1五7种休氨基闲酸标弓样色抄谱图惠见图雄1。丹图1出氨基舱酸标接准色悦谱图欢从图察1中画可以依看出秆，1每7种众氨基荣酸在诊选定吊的分垂离条纵件下势可以声达到税很好疯的分绣离。济2.以2尊方法亦的检们出限梦、线柱性范时围及营回收勿率身根据饲以上恋的分姓离条壁件，破对氨雾基酸裹的混座合标柄样进朴行测链定，推得出浪了该滔方法召的检络出限遭、线疼性范居围，手同时点还分秀析了肆各种韵氨基炒酸的店回收造率，梯所得组的数兴据见互表2滩。餐表2蹄方法粉的检眨出限天、线议性范发围及砍回收斯率栏化合蚀物名困称殖检出顺限志μ狸mo大l/只L便回归矿方程滩相关捞系数会线性坐范围赠μ定mo疾l/党L软加入势量护μ最mo类l/箭L损实测外值钞μ部mo掠l/肝L抚回收彼率叠%牺精氨仔酸望0.家00挂95帮1.滚15鸭X-反0.教35备0.鹊99波90沫0.尚2～躲20迹5.绝00怀4.露93汪98咏.6读赖氨穗酸狭0.菌05饭89台0.摇32莫X+趣0.痕11逃0.宽99萄89青0.衡2～犬20疗2.响5炼0允2.情57凯10受2.代8掏丙氨悬酸甲0.这02榴09锁1.祝01裳X+径0.潮99肤0.搁99臭76驳0.多2～乏20荷10者.0浴0后9.补69斧96凑.9妹苏氨拦酸亭0.糟00邮91弃2.煤28把X+租0.勺32猾0.藏99撇92侮0.扇2～集20插2.章5鼠0盛2.加55膀10级2浅.0鸡甘氨哗酸率0.令02懂12际1.醒10阶X+失0.勉01湿0.搏99唇95摧0.想2～磨20鸽5晋.0辣0冒4.牲89到97劝.8辫缬氨秒酸绑0.菠02释54护1.愿31掩X+倘0.店65违0.胜99抹85贱0.度2～片20铜4访.0肥0帝3.丸75袜93税.芹8愚丝氨叠酸式0.齐00墓78蝴2.询49标X+银0.描55榴0.穴99趴94幅0.炸2～傅20谊4倦.0具0奖4.脑03督10海0.削8印脯氨定酸骑0.词01析62传1.冰29彻X+就0.欠91洋0.掏99棕82来0.绝2～垮20禾8献.0脉0耗8.吧09捏10振1.治1璃异亮朗氨酸盈0.滔04涌59繁0.投58珍X+帆0.产42奔0.元99维97和0.营2～宝20魄2.坛5再0巨2.婶53蔽10余1.谣2练亮氨巴酸采0.浴06考01斑0.送61下X+努0.卷53备0.肆99饿94壤0.略2～管20耐5轮.0巾0绢5.诱13乎10韵2.恼6袋蛋氨杀酸哪0.肾01吉38添2.部07街X+宣0.毯97孔0.耳99窗65焦0.火2～复20顺1隆.0捷0棋0.莫95衡95窗.0侵组氨买酸捷0.寄00豪61洋4.疯56医X+偿0.爬43读0.骨99区81疫0.震2～辛20策1志.0符0烧0.戒93框93叫.0狱苯丙熔氨酸感0.料01补39拌2.纹81武X-仇0.酸67缘0.榨99粘99墓0.认2～孩20剑4蜘.0城0辱3.顶89乞97巨.2洲谷氨胁酸葵0.否25象79母0.抬20留X+潜0.昌05旱0.颤99愿98搏1.减0～肿20坑4界.0拔0任3.笛85岭96锹.2遵天冬半氨酸版0.凯06害98辟0.蹦18绸X+劣0.灶61司0.辟99盾91伶0.描2～列20萍5码.0蝶0蛙4.波73盈94鲜.6盼胱氨筝酸兴0.本00跃44砍4.絮29环X-乖0.谦53肚0.般99危69较0.蹦2～扣20州1.转00僚0.具96品9商6.禾0符酪氨臭酸伴0.赤00座60危1.耗97急X+皆0.例89腾0.谢99沸92暴0.址2～读20原2.息5酿0赵2.润57泳10狡2.漆8欠由表饮2可认知，狭该方升法对呼17患种氨掩基酸钉的检唐测具恰有较智低的差检出蝴限、位较宽纪的线槐性范抓围和殃较高诞的回赌收率剪，较款高的晴回收凑率也誉说明犯了用肆该方炎法检鲜测黄末酒中炸的氨散基酸惩所得街到的润数据荷是准趣确可付靠的垫。蜡2.幕3厚黄酒振中氨漠基酸寿的分煮析妻随意脆选取辜了江达西、厦绍兴吓及福缠建三歼个省昨份的宇各5锯种黄捷酒样限品进杀行检金测，迁以保狮留时到间定膏性、纷外标织法定驴量，原所得画到的欧样品刻图谱烘见图盏2，拒分析屯结果菜见表缸3、商表4抖及表概5。族由谱师图2衔可见能，在屈以上燥所选糊定的社色谱蒸条件饰下，凭样品由中的鉴17磨种氨姨基酸肌具有谨良好距的分苍辨率的和重坛现性钓。波图2刺黄划酒中拒氨基扮酸分矩析谱舌图瞧表3扰江幸西黄怎酒氨球基酸洽分析壁结果邻（单文位：尤mg推/l志）膝氨基划酸奇样品渗1指样品却2战样品土3覆样品帅4旺样品另5爱平均陡值穴甜味彼氨基蜜酸荡甘氨铃酸G横ly主92亩.2墓6苏62存.3鲜3便75陈.3奏3授61毛.1电9业90芽.4约9执76舰.3译2众丙氨式酸A沟la滤22款0.嫩37炎16蓄5.恭32递21迹1.宋21其14牲9.饮96献44陡4.丑92颤23坛8.焦36概薄脯氨戚酸P勺ro郑19震7.耀50昼84抱.8吗3私19规6.锈16间13缸7.容50她13贸7.榴40当15装0.条68肯销丝氨强酸S棕er团10味4.祝29驻73坝.0通6穷89截.0锄0劈19省.2讯6亦90趣.2提1粒75旦.1崭6习苏氨茎酸T崖hr斯71割.8阔0案65软.2桨2合57熔.0轻4共11摘.9感7从50河.6讲7林51烧.3土4奇胱氨狭酸c侦ys筐11径.5和6我21淹.1趣0深16骆.0旬0狠18灭.3炊8袋6.逼01片14侍.6弯1或蛋氨揭酸M碑et县31扩.9蹄8壶41谢.5怠0蛇22厌.5恼6泄7.线73陪45腊.7板8箭29栏.9柱1职∑证72沿9.峰76研51肃3.侨36炎66称7.惰3脑40烂5.职99唉86背5.铁48达63围6.和38伞告苦味后氨基闪酸搏组氨片酸H笨is望52躁.0规9何30奴.5基7虏36泡.8计3从20咏.8伶8棒17堂.9眠1负31劳.6偶6业精氨蚊酸A缘rg凑14漂6.番55找93陈.4消2核20跃4.拥60帐56菠.2持5耐17汉.6音1参10宋3.舞69务利缬氨抖酸V哑al扫11助5.弄02果84穿.3插8蹦84睬.1洽3欺23持.2概3小12巴2.科20今85短.7内9舒异亮塔氨酸雪Il毫e旧82敞.1课4倡69表.3监0建54锦.0陈5蚕14搬.6芝0逆88卸.1馅7遵61谊.6测5拼亮氨银酸L旬eu渔20筛8.阔09乎19河3.牺16受23响5.愈47卸52亲.8粒5苗26捡1.贫74暮19气0.慧26菊纷苯丙挺氨酸永Ph栽e披11鼻7.需89饭11胆4.亮12逆16替8.货70愉51侨.7六9螺17范4.雕88刻12怪5.送48璃茅赖氨肿酸L手ys摘12欧7.业30悉80窜.9孙0早10兵5.膜56俊25肤.8松5归10排.3猾2麦69命.9挽9山∑帮84翻9.默08肾66竟5.勺85机88踩9.呼34患24丢5.胁45核69赚2.浅83纸66啊8.燃51骗经鲜味游氨基涛酸荡天冬毛氨酸缠As肚p附13胆9.昨74切10蕉6.道33泥14车5.农44析13凉.5事2品29裙.1冲5雷86蛙.8超4辨谷氨拿酸G燥lu港17还5.耽25本31薄3.册59迈14畅8.裁94薯86首.4盘4摸11跟0.间77扣16项7.词00涉度∑旷31急4.侨99姑41羞9.远92键29霉4.皆38遭99券.9内6塑13显9.波92邀25痕3.眨83邻箱涩味陵氨基诞酸皮酪氨倚酸T肠yr熟10酱3.败60鬼88圣.4颂4讯14零2.始63翻37击.3罢6茶6.躬00储75哭.6冠1汇总氨冒基酸鹅19绕97缺.4拍3耕16次87档.5糖7虚19外93伐.6歪5甩78爱8.吴77拌17鬼04派.2冷2氏16颠34洗.3越3房以上链五种当江西她黄酒罪样品燕均以巴红米腊为原逗料酿额制而封成，赶从表径3可首以看众出，领不同火样品绵的黄陶酒其哑氨基枕酸含虚量是秘有差脸别的济，氨需基酸睛含量拘最高犯能达疫到耳19游97互.4劲3满m签g/倦l，史最低龟只有遣78季8.拼77映mg秩/l枪，这湖是因剧为块黄酒赤中的挤氨基厨酸主限要是半曲霉贫菌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