microRNA在甲壳动物中的研究进展

microRNA在甲壳动物中的研究进展摘要：目前为止，众多的microRNAs已经从各种组织中被发现并提取，包括哺乳动物，植物，昆虫，线虫动物，和病毒等。microRNAs是一类在真核生物中广泛存在的大小在22〜24nt左右，单链，内源性，非编码，进化上高度保守的小分子RNA，在转录水平上，通过和靶mRNAs互补结合调控基因表达，在RNA信号通路上，干扰RNA通路正常运行。研究发现microRNAs在生物体具有高度的保守性、时序性、组织特异性的转录后调控因子，在调控途径：生长、发育、生殖、细胞分化、造血作用、细胞增殖与凋亡、疾病、代谢、信号转导、胁迫应答以及免疫(调节先天免疫和适应性免疫)等方面发挥重要调控作用。有关microRNAs的研究已经取得了众多的科研成果，但在一些甲壳动物中研究还比较缺乏，比如：斑节对虾。在甲壳动物中，最先得到深入研究的是水溞，2011年，在水溞中发现了45种miRNAs，同年，在日本囊对虾中也首次发现了35种miRNAs，其中的11种miRNAs，和其他已知节肢动物相比，显示了高同源性。据2015年数据显示，在甲壳类动物，已经有数十种microRNAs被鉴定，包括螯虾(Procambarusclarkii)，日本囊对虾(Marsupenaeusjaponicus)，中华绒螯蟹(Eriocheirsinensis)等。本文主要对microRNAs的基本概念，形成，作用机理，在甲壳动物中的生物学功能，研究应用，发展前景等方面作有限的总结，以期能为甲壳动物microRNAs的研究发展起到推动作用。关键词：microRNAs；甲壳动物；调控；免疫；对虾Abstract：TilldatenumerousmicroRNAs(miRNAs)havebeendiscoveredfromvariousorganisms,includingmammals,plants,insects,nematodesandviruses.MicroRNAsareakindofaround22~24nt,singlestrand,endogenous,non-coding,evolutionaryhighlyconservativeRNAswhichwidelyexistineukaryotic.miRNAsregulategeneexpressionatthepost-transcriptionallevelandplayanimportantroleindevelopment,reproduction,celldifferentiation,hematopoiesis,cellproliferationandapoptosis,disease,metabolism,signaltransduction,stressresponseandimmunologicaldefensefunction,asshowninFigure1.StudiesofmicroRNAshasmademanyachievements,butinsomecrustaceanstheresearchisrelativelylack,suchas:Penaeusmonodon.Incrustaceans,Daphniaisthefirsttogetin-depthstudy.In2011,45kindsofmiRNAswerefoundinDaphnia.Thesameyear,35speciesofmiRNAswerealsofoundforthefirsttimeinMarsupenaeusjaponicas.Amongthem,oneofthe11kindsofmiRNAs,comparingwiththoseofotherknownarthropod,showedhighhomology.Accordingtothedatain2015,incrustaceans,dozensofmicroRNAshavebeenidentified,includingProcambarusclarkia,Marsupenaeusjaponicas,Eriocheirsinensis,etc.Thisarticlemainlydiscussesthebasicconception,theformationandactionmechanismofmicroRNAs,biologicalfunctionincrustaceans,researchandapplication,thedevelopmentprospectinordertopromotetheresearchanddevelopmentforcrustaceans’microRNAs.Keywords:microRNAs;crustaceans;Regulation;Immune;prawn;前言随着虾、蟹等水产十足目甲壳动物养殖业在世界范围内迅速发展，人们对其需求的逐渐升高，必然会大量养殖，但经常高密度养殖和过剩投饵等原因，导致养殖池的饲养环境急剧恶化，由细菌和病毒引起的传染性疾病也逐渐增多，传统上治疗和预防此类疾病主要依赖抗生素、化学药物等，这些药物的滥用造成环境污染、药物残留、产生耐药性细菌等严重问题也就成为困扰甲壳动物养殖的一个重要环节［1］，运用动物自身介导的免疫功能来解决这一问

题，不仅于环境，还是动物生长本身，都是相对好的途径，甲壳动物是依靠血细胞吞噬和包囊化作用发挥其免疫防御机能，这就体现了动物机体中的miRNA,microRNAs在生物体具有高度的保守性、时序性、组织特异性的转录后调控因子［2］，在调控途径：生长、发育［3-4］、生殖、细胞分化［5］、造血作用、细胞增殖［6］与凋亡、疾病、代谢［7］、信号转导、胁迫应答以及免疫［8］(调节先天免疫和适应性免疫)等方面发挥重要调控作用(图1),它只需通过几个碱基互补便可发挥作用，因此在免疫反应中，miRNA快速、精细而又柔和的调控就显得至关重要。miRNA在抗菌，抗病毒，胁迫应答等方面的作用会为虾、蟹等甲壳动物的养殖业带来巨大的利润。因此，努力去研究甲壳动物miRNAs在宿主病原体感染时对靶基因的调控作用及miRNAs的不同表达，进而使其免受细菌或者病毒的侵袭⑼。miRNAs的发现，标示着一个新层次上的基因表达调控方式的出现,引发了一场科研界的震动。miH-27Se泊14目前miRNAs已成为分子生物学、神经生物学、发育生物学、肿瘤学等领域的明星分子。microRNAs、smallnon-codingRNAs仅仅只占基因组的1-5%，但是可以调控所有基因的20-30%，所以，microRNAs形成一种复杂的基因调控网络，那么，它参与了很多不同的生物发生过程［10］，可以与靶基因的3′非翻译区(untranslated-regions，UTR)，5‘非翻译区，开放阅读框结合，根据部分互补或者完全互补的关系，相对应的抑制靶基因的翻译或降解靶基因，这种互补关系一般发生在3’非翻译区结合的几率高于其他两种。首个miRNA(lin-4)是在1993年秀丽隐杆线虫(Caenorhabditiselegans)时序性发育调控过程中发现的；2000年又在线虫中找到了第2个调控时序性发育miRNA基因let-7。接下来几年间，继在人类、小鼠、大鼠、果妈、斑马鱼、拟南芥等生物物种中发现了这类RNA，人们开始认识到这些普遍存在的小RNA分子在真核基因的表达调控中起着广泛的作用，因而lin-4和let-7也就成为miRNA家族的奠基性成员。miRNA参与生物体中很多基本生命过程的调控，在生命活动中起着非常重要的作用。正是由于这种功能的重要性，miRNA吸引了很多科研人员通过多种途径、从多种角度、利用多种模式生物来探讨miRNA的起源、作用机制和功能，miRNA已成为调控基因表达的分子中数量最为庞大的一族［11］。随着关于miRNA的研究急剧增加，在甲壳动物中的研究还为数不多。最初miRNA的鉴定是先构建小RNA文库，然后随机挑选克隆，采用传统的Sanger测序技术进行测序，近来，高通量测序技术发展很快，如Solexa、454、Solid等高通量测序平台已经被广泛应用。这些高通量测序技术提供了鉴定miRNA及其表达谱的快速的和高通量的方法，加上生物信息学在靶基因预测的发展，miRNA已经被成功应用于动植物和微生物的miRNA研究miH-27Se泊14ihsuiin/lgfl卜午$miR'l,jIm-14,jIm-14*加IECart®砂加占沁&hptd

meisboitsmMusc^grown

(pasfmitotic)miR-143miR-375jamaAdipocytemiR-143miR-375jamaAdipocyteExocyiosts图1miRNA参与的基本概念了多种动物化及人体的多项生命活动，行使多种功能图1miRNA参与的基本概念了多种动物化及人体的多项生命活动，行使多种功能［13］— ..丁绑T/HDAC4\上miR-122HEK293Tng(ycsrid&Choiesteroi的定义miRNA参与了基因转录后水平的调控，在生物机体的调控方式非常广泛，miRNA的可以定义为：是一类长约19-23bp的小分子单链RNA；位于基因组非编码区；在进化上其基因组在种间高度的保守，但是pre-miRNA在种间相对保守；基因上下游能形成发夹结构，此结构的自由能最低；其成熟过程需要Dicer酶的切割；其功能是在转录后水平对基因表达进行调节，生物重要的生命活动(例如：生长发育，细胞凋亡等)离不开miRNA的调控，30%左右的蛋白表达需要miRNA的调控(图1)。的命名根据《microRNA与肿瘤》书中描述，对miRNA的命名规则可以简介概括如下:<1>miRNA成熟体简写为miR，按照克隆到的先后顺序，在miR-的后面加一个阿拉伯数字(如miR-1)；<2>对于在次命名规则出来之前就已经有命名的基因，保持原来的名字，如let-7和lin-4；<3>如果同一个基因具有不同的转录本，那么还需在其后面加一数字(如miR-6-1,miR-6-2,miR-6-3)；<4>如果miRNA为高度同源的，则在字母后面再加数字予以区分；<5>两miRNA来源于同一个转录本，则被命名为miR-序号-5p和miR-序号-3p，或者miR-序号和miR-序号*。为了方便，常见属用缩写字母表示hsa代表人源，mmu代表小鼠源，mo代表大鼠源，cel代表线虫，dme代表果蝇，如has-miR-1代表人源的miR-1［14］。的加工成熟以及作用机理21世纪生命科学领域重大发现之一。编码microRNA的DNA序列多位于基因间隔区和基因内含子区域，合成过程分为细胞核内和细胞质中两个步骤，首先在细胞核内，miRNA基因在RNA聚合酶II的作用下形成较长的茎环结构，称为初级miRNA(pri-miRNA)；此时的pri-miRNA在5’端有帽子结构，3’端有一个多聚腺苷酸尾巴。随后pri-miRN在Drosha-DGCR8复合物的作用下形成长度约60~70个nt的发卡状结构，成为前体miRNA(pre-miRNA)；pre-miRNA在Exprotin-5复合物的协助下通过核孔复合物到达细胞质中。pre-miRNA在细胞质中由Dicer剪切成为19~25nt的双链miRNA结构，随后双链miRNA中的一条链在解旋酶的作用下分解，另一条链则成为成熟的miRNA分子。有文章表明miRNA前体可以形成两条具有调控作用的miRNA，分别为标记为miRNA和miRNA*，可共同调控一个基因或者分别调控多个基因，成熟的单链miRNA与Argonaute蛋白和Dicer结合形成RNA诱导的沉默复合物(RNA-inducedsilencingcomplexRISC)(图2)［均。RISC复合物与靶mRNA的3'UTR的碱基结合，对靶基因进行降解或翻译抑制。如果miRNA与靶mRNA完全匹配，则RISC复合体降解该mRNA；若二者序列部分匹配，尤其是miRNA的5’端2〜8个被称为种子序列(seedsequence)的碱基与靶mRNA完全匹配，则通过抑制靶mRNA的翻译来沉默该基因［16］°MicroRNA在植物中，miRNA与靶基因完全互补，降解RNA。5’端的第一个碱基具有很强的U碱基倾向，而以G开头的却很少，具体的过程可以通过图清楚地看到(图3)。

图2microRNArriRNA:miRNA*cfuplexRISCtanlaui^ijinalurefi：RNA图2microRNArriRNA:miRNA*cfuplexnearperfectcomEJleenaniartymRMAtreavsge动物的蚤状溞(Daphniapulex)[17]、明钩虾(Parhyaleh‘aiensis通过组织测序或者是生物学信息学分析，获得我们感兴趣的miRNA序列。例如，甲壳动物的蚤状溞(Daphniapulex)[17]、明钩虾(Parhyalehawaiensis)[18]、日本囊对虾(Marsupenaeusjaponicus)[19-20]、斑节对虾(Penaeusmonodon)[21]、克氏原螯虾(动物的蚤状溞(Daphniapulex)[17]、明钩虾(Parhyaleh‘aiensis西洋中脊盲虾(Rimicarisexoculata)[24]、罗氏沼虾(Macrobrachiumrosen-bergii)[25]>中华绒螯蟹(Eriocheirsinensis)[26]、拟穴青蟹(Scyllaparamamosain)[10]、三疣梭子蟹(Portunustrituberculatus)[27],都已通过组织测序法获得了目标组织的miRNA信息。柳承璋、李富花等

通过生物信息学方法对淡水枝角水蚤(Daphniapulex)miRNA进行了发掘，得到miRNA前体(pre-miRNA)252个、可编码262个功能miRNA;发现了6个miRNA簇囤。的检测Northern杂交法是验证及检测miRNA及其前体的黄金准则，能够灵敏地检测miRNA的表达，利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)从总RNA中分离miRNA或其前体，利用标记的探针进行杂交。探针的标记方法多用放射性标记，地高辛标记，生物素标记，锁核酸标记等等。对miRNA进行荧光定量来检测其在各组织的定量表达情况，Tang等设计了一种颈环引物，并将颈环引物混合反转录，高效地检测了细胞中220个miRNA。茎环引物反转的SYBR染料法定量原理见图4。miRNAStep1:苜miRNAStep1:苜ttsrmlgpRTI'RTprimer0Step2:RE-al-tiim9P^R\ F位G 图4miRNA定量原理对于miRNA靶基因的预测，研究显示，已验证的miRNA与其靶基因相互作用的方式有一个特点：miRNA序列的5'端的第丁8个碱基与靶基因的3'UTR区完全互补，目前的各种靶基因预测软件都以这一特点为基础。RNAhybrid是一种快捷方便的miRNA靶基因在线预测软件，可直接提交靶基因序列和miRNA序列进行预测，针对基因组信息不全或是甲壳类动物，与其他预测软件相比RNAhybrid更加方便进行生物学预测，这些完成之后，我们还需要对其结果进行验证，双荧光素酶报告基因系统是验证靶基因用的最多得技术，包括萤火虫荧光素酶载体和海肾荧光素酶载体，将靶基因片段克隆到荧光报告基因载体的3'UTR区，将miRNA表达质粒或是miRNAmimics与重组UTR质粒和内参质粒共转染到细胞中，培养24-48h后检测荧光素酶活性。若荧光素酶活性受到抑制，则证明此基因为miRNA的靶基因［29］，但也存在缺陷，最好还是后续在蛋白水平验证。在甲壳动物中的功能研究5.1细胞凋亡miRNA在甲壳动物中关于细胞凋亡见于发表的中文期刊只有为数几篇，可见，在此方面的研究处于刚起步阶段，因而进行这一方面的研究具有十分重要的意义。细胞凋亡是指细胞为维持内环境稳定而主动有序的死亡，细胞凋亡不仅是免疫反应的重要部分，也与许多疾病尤其是癌症的发生有着密切的关系。已有研究发现细胞凋亡在对虾抗病毒过程中起到了十分重要的作用。杨璐等通过将三种不同处理的对虾血淋巴细胞(正常血淋巴细胞，诱导细胞凋亡的血淋巴细胞，抑制细胞凋亡的血淋巴细胞)，进行对虾芯片杂交试验，筛选获10条与对虾细胞调亡相关的miRNA。通过northernblot,结果显示有六条的结果与芯片数据相符。挑取其中一条进化保守的miR-100,进一步的研究其在对虾细胞凋亡过程中的作用。通过将特异修饰miR-100的反义核酸注射到对虾体内敲低miR-100的表达，试验结果显示细胞内caspase3/7酶活活力明显上升，说明miR-100能够抑制对虾细胞细胞凋亡的发生。为了进一步研究miR-100在对虾抗病毒过程中的作用，在通过注射的miR-100反义核酸降低对虾体内的miR-100含量的情况下，检测对虾感染病毒的拷贝数和对虾死亡率的变化，结果显示表明注射miR-100反义核酸引起的细胞凋亡能够降低病毒的拷贝数和对虾的死亡率，从而起抗病毒作用［30］。5.免2疫免疫是机体抵抗外来物侵袭集体的自我防护行为，复杂而精细，一方面，动物体需要对外源性刺激做出迅速而准确的反应；另一方面，又要避免对机体造成过度损伤。甲壳动物中，免疫方面的研究是相对较多的。NapolKaewkascholkul等对miRNAs调控白斑综合症病毒感染的斑节对虾，发挥作用，取白斑综合病毒感染的虾的血细胞测序，46个miRNAs被鉴别，应用茎环实时荧光定量分析，16个备选的miRNAs中的11个在病毒感染后表达有显著差异，所有验证的基因中，pmo-miR-315和pmo-miR-750是显著性最强的，所以对抗白斑综合征的免疫调控最强。并得知miRNAs是和虾的免疫反应相关的，一个基因可以被多个miRNAs调控，同样的，一个miRNAs也可能调控多个mRNA，被识别的免疫相关的目标基因翻译的蛋白多是:蛋白酶，蛋白酶抑制剂，在血凝系统的蛋白，细胞凋亡相关蛋白，酚氧化酶原系统蛋白，抗菌肽，信号传导蛋白，热休克蛋白，氧化应激蛋白，模式识别蛋白，或者是其他的免疫分子（图5）。同时发现，在日本囊对虾中的miRNAs涉及到先天免疫，包括细胞基础的免疫（主要是细胞凋亡和吞噬作用）以及体液免疫（例如，酚氧化酶原系统）［31］。以此得出，miRNAs在虾抗病毒感染的免疫反应中起着举足轻重的角色▲6493-5p▲&5P▲3牛5Pbantam▲750ApoptosisinducingfactorOtherimmunemoleculesProclottingenzymeC-tyipelectin1•▲Zb•Cadherin •Cadherinlike•i-typelysozymelikeprotein1Clipdomainserineproteinase2.ProPOsystemSignalingtransduction•IntegrinJtegrinalphalikeThioredoxinOxidativestressHeatshockproteins^Caspa&e2▲6493-5p▲&5P▲3牛5Pbantam▲750ApoptosisinducingfactorOtherimmunemoleculesProclottingenzymeC-tyipelectin1•▲Zb•Cadherin •Cadherinlike•i-typelysozymelikeprotein1Clipdomainserineproteinase2.ProPOsystemSignalingtransduction•IntegrinJtegrinalphalikeThioredoxinOxidativestressHeatshockproteins^Caspa&e2Apoptotictumor-relatedproteins.Autophagyrelatedprotein2likeprotein•Beclin1associatedautophagyrelatedkeyregulatorSerine/threonine-proteinphosphatase.Serinethreonineproteinkinase-like.Serinethreonineproteinkinase•Tyrosine-proteinkinase\317-3p.Apoptoticchromatin^condensationinducer•Beclin-l-likeprotein•Celldeathprotein•Heatshockprotein67B2•Heatshockprotein40•Heatshockprotein70CathepsinC•Kunitz-typeserineproteaseinhibitor.Serineproteinase•Thloredoxindomaincontainingproteinlike•Copperzincsuperoxidedismutase.Proteinases/proteinaseinhibitorsSerineproteinaseinhibitor7•CathepsinD•PatternrecognitionproteinCru5tinPm4Antimicrobialpeptides•Penaeidin3bBloodclottingsystem图5在斑节对虾中预测的miRNAs和靶免疫基因之间的相互关系miRNA在基因表达调空上的功能，依赖于直接结合靶mRNA的能力，因此，每一个miRNAs的靶mRNA的鉴别可以为虾免疫反应中miRNAs的作用研究提供线索，凭借先进的miRNA靶基因预测工具，斑节对虾的EST信息被用来进行靶mRNA的预测，标准是：出现的miRNA的种子序列在任何区域（ORF，3'UTRand5'UTR）都和Mrna完美互补，miRNA和靶mRNA的互补率不能低于65%国］。近年来，有证据显示，当病毒感染机体时，miRNAs可以同时对宿主和病原体的基因进行调控，这是在哺乳动物中进入研究的，在甲壳动物中，尤其是虾中，还有很少的研究，调查miRNAs在病毒感染方面的研究［现。Ou等3在颤抖病螺原体(Spiroplasmaeriocheiris)侵染克氏原螯虾。Li等［10］在副溶血性弧菌(Vibrioparahaemolyticus)侵染拟穴青蟹的实验中也分别发现33个和161个显著差异表达miRNA。Labreuche等［33］进一步阐述了对虾可能存在的miRNA抗病毒机制：病毒分子侵染对虾，使感染细胞核内产生Ars2和Pasha两种相互作用的蛋白。Ars2和Pasha复合物及相关蛋白将pri-miRNA剪切成pre-miRNA，在细胞质中DCR1将pre-miRNA加工成成熟的双链miRNA，miRNA与AGO1及相关因子组成复合物与靶基因结合，调控靶基因的表达。5.3发育Chen等阳在蚤状溞中发现miR-8等5个miRN在不同的发育时期差异性表达表明这5个miRNA在蚤状溞生长发育过程中发挥作用。史莉莉等在研究中华绒螯蟹miRNA的分离及在卵母细胞成熟过程中的表达分析中，显示miRNA成熟过程中需要Dicer酶的剪切，中华绒螯蟹Dicer酶在卵母细胞成熟过程中的表达量是逐渐升高的。这说明在卵母细胞成熟的过程中，产生了大量的miRNA，对卵母细胞成熟起着很重要的作用，进一步研究发现，在中华绒螯蟹3'UTR上存在着介导负调控的三个box元件，同时在测序结果中得到了与box结合的三个miRNAs，用双报告基因检测系统对cyclinB蛋白可能为miR-2的靶基因。数据显示，miRNA从起始阶段就调控性腺的发育。也进一步说明甲壳动物的发育离不开microRNA的作用。5.4胁迫应答Lv等［27］在低盐胁迫三疣梭子蟹的鳃中发12个较对照组显著差异表达的miRNA，这些miRNA的靶基因主要参与离子转运和甲壳素代谢等调节渗透压的过程。季鹏飞等在克氏原鳌虾在盐胁迫条件下差异化的miRNA表达谱的巧究，在这其中，miR-71、miR-276-3p、miR-let-7-5p、miR-184显著下调；miR-275显著上调。miR-276、miR-71、miR-let-7-5p随着盐度的上升的表达量比在正常对照克氏原鳌虾中均比较显著的的下降，且这种下降在统计学上是显著的。广盐性的水产种类，例如，sdx凡纳滨对虾(Litope〃aeusvaMamei)在海水和淡水中均可进行人工养殖，其渗透压的调节机制尚不明确。研究甲壳动物的渗透压调节机制，对于解决我国众多的盐碱地荒废问题很有作用。miRNA在甲壳动物中呈现多样的生物学功能。通常情况下，miRNA与已知功能的靶基因结合，通过调控靶基因的表达来实现自己的生物学功能，本文仅从甲壳动物经常研究的主要功能进行综述，其他方面的功能，会随着在这些方面的研究深入，再进行综述。6存在的问题以及展望虽然已经在许多物种中发现了大量miRNA序列，但是还有许多问题值得人们深思。例如，miRNA如何进行自我调节？miRNA作用过程中是否有放大效应？靶基因的寻找和验证也是一项比较艰巨的工作，生物信息学手段预测miRNA所作用的靶基因，缺乏可靠的实验依据。miRNA之间，miRNA与mRNA之间，miRNA与蛋白质之间的关系仍有许多未解之谜。甲壳动物处于无脊椎动物向脊椎动物进化的过渡阶段，独特的进化地位决定了miRNA功能的特殊性，在其他生物中保守的基因，在甲壳动物中就不一定适用。miRNA在生物体的功能涉及到生命活动的各个方面，因此全面而深入地剖析miRNA的发生、作用机理和功能，将会揭示这些生物过程乃至一些疑难疾病的分子基础，对其更深入的研究，基于miRNA的转录后基因沉默将会成功应用于功能基因组学的研究及肿瘤等疾病的基因治疗。参考文献[1]邹广众，孙虎山.水产甲壳动物免疫学研究进展与前景展望[J].生命科学仪器,2009(06):17-21.AmbrosV,BartelB,BartelDP,etal.AuniformsystemformicroRNAannotation.RNA9:277-279[J].RNA,2003,9(3):277-279.FengY,CaoJH,LiXY,etal.InhibitionofmiR-214expressionrepressesproliferationanddifferentiationofC2C12myoblasts.[J].CellBiochemistry&Function,2011,29(5):378-383.JalaliS,RamanathanGK,ParthasarathyPT,etal.Mir-206regulatespulmonaryarterysmoothmusclecellproliferationanddifferentiation.[J].PlosOne,2012,7(10):-.WarthSC,HoefigKP,AnianH,etal.InducedmiR-99aexpressionrepressesMtorcooperativelywithmiR-150topromoteregulatoryT-celldifferentiation^.EmboJournal,2015,34(9):1195-1213.WarthSC,HoefigKP,AnianH,etal.InducedmiR-99aexpressionrepressesMtorcooperativelywithmiR-150topromoteregulatoryT-celldifferentiation^.EmboJournal,2015,34(9):1195-1213.KohO,TakahiroH,TomohiroN,etal.MicroRNA-33a/binLipidMetabolism.[J].CirculationJournalOfficialJournaloftheJapaneseCirculationSociety,2015,79(2):278-284.LiD,WangA,LiuX,etal.MicroRNA-132enhancestransitionfrominflammationtoproliferationduringwoundhealing.[J].JournalofClinicalInvestigation,2015,125(8):3008-3026.ZhuF,WangZ,SunB.DifferentialexpressionofmicroRNAsinshrimpMarsupenaeusjaponicusinresponsetoVibrioalginolyticusinfection[J].Developmental&ComparativeImmunology,2016,55:76-79.LiS,ZhuS,LiC,etal.CharacterizationofmicroRNAsinmudcrabScyllaparamamosainunderVibrioparahaemolyticusinfection.[J].PlosOne,2013,8(8):e73392.[11]季鹏飞.克氏原螯虾在盐胁迫条件下差异化的microRNA表达谱的研究[口].南京大学,2014.[12]马宁，曾地刚，黎铭，等.桃拉综合症病毒感染诱导的凡纳滨对虾microRNA表达差异的研究[」.西南农业学报,2015,28(5):2310-2315.KrutzfeldtJ,StoffelM.MicroRNAs:Anewclassofregulatorygenesaffectingmetabolism[J].CellMetabolism,2006,4(1):9-12.[14]周凡，庄诗美.microRNA与肿瘤[J].生命科学,2008,20(2):207-212.HeL,HannonGJ.MicroRNAs:SmallRNAswithabigroleingeneregulation[J].NatureReviewsGenetics,2004,5(7):522-531.[16]李法君，李明爽，付春鹏，等.microRNA在水产动物中的研究进展[J].水产学报，2016(6).ESU,GordonDM,TelliM.SmallRNASequencingBasedIdentificationofMiRNAsinDaphniamagna.[J].PlosOne,2015,10(9).BlytheMJ,MallaS,EverallR,etal.Highthrough-putsequencingoftheParhyalehawaiensismRNAsandmicroRNAstoaidcomparativedevelopmentalstudies.[J].PlosOne,2012,7(3):504.HuangT,XuD,ZhangX.CharacterizationofhostmicroRNAsthatrespondtoDNAvirusinfectioninacrustacean[J].BmcGenomics,2012,13(1):159.RuanL,BianX,JiY,etal.IsolationandidentificationofnovelmicroRNAsfromMarsupe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