神经生物学的形态学方法

第一部分神经生物学的形态学研究方法一、研究神经细胞的形态及细胞构筑的方法（一）尼氏（Nissl）染色法原理用碱性染料染神经组织常用染料焦油紫、硫堇、中性红结果尼氏小体被染色，背景无色。用途皮质的分层、分区、脊髓灰质的分层、核团的分区、细胞的构筑（二）高尔基（Golgi）镀银染色法原理铬银与脂蛋白形成复合物，在细胞膜系统的间隙内形成结晶结果整个细胞为黑色用途显示整个细胞的全貌二、研究神经径路的方法（一）溃变法原理神经元胞体或纤维损伤后远侧部分发生顺行变性（纤维交替膨胀和狭窄，呈念珠状继而呈颗粒状），可用镀银法显示或电镜观察。胞体发生逆行变性（胞体内色质溶解，胞体肿胀，核偏向胞体的一边），可用尼氏法显示。拢应用狭研究螺纤维压联系脾。赚（二示）辣技根过感氧化与物酶秧（耗HR廊P矛）标申记法橡原殖理状HR险P眨注入维神经俗组织亦或脏报器庭—偶逆行都、顺催行、眼过节福标记垃—H她2仍O押2嘴、色百原酶轮反应园—么呈色细试半剂夹HR扒P：既1.窑游离只HR武P罢2.容结合馒HR葵P(管WG县A-技HR后P、姿CT数-H浆RP外）甚色原图：蛮1.肥二氨从基联尸苯胺宪(D访AB租)腰2.傍二盐底酸联药苯胺庸(B侍DH夏C)删3.喉邻-江联茴百香胺香(O班D)秃4.摩四甲孔基联嚷苯胺腊(T漏MB殖)丧稳定关剂:秘硝普健钠、菜钨酸渡钠炎用枕途幅研究畏脏器喊的神沟经支咏配、贤中枢饰内核堤团间打的联伤系等位。还盆可与懒免疫竟组织纷化学球、电待镜技率术等室结合扣。漠（三秩）荧永光素蒙轴突抬逆行仓传递军标记哨法刮原爹理荐将荧非光物标质注诱射至演神经第元的于轴突命分布轨区,鲁经炎分支冒的末粱梢吸捐收后忧，循敲轴突容逆行难输送冶至胞完体。击在荧照光显胡微镜赢下蛮可看轮到胞救体内尺呈现龟荧光寺标记惭物。锻荧光复素邪Fu弄ro泛go升ld对FB炼-N稳Y托G仓B-商NY鸭卖TB君-B洗b大PI梅-B崇b暑E什B-饶DA铁PA陷应颗用挂研究孟神经汉元的洗轴突应分支泻至不辩同部认位的愈投射燃。煌（四遣）放耻射自死显影健示踪仰技术同原馋理奋将放罗射性县同位画素接3阿H等仿标记蝇的氨村基酸绞导入损神经给组织萄，氨飞基酸住被神掌经元寻摄取伶后在底胞体肤内合头成蛋旷白质括，沿挺轴突昏顺行防运输纯，分注布于咸整轴膨突和障末梢绸，同挥位素耳产生即的核多射线否使照替相乳钉胶感轿光，移根据浮感光谨银粒孔所在逗部位奴和黑劳度判该断放仰射性纷示踪或剂的习位置亡和数轿量，飘从而畜确定恒神经哗纤维穴的路寨径。害示踪笔剂吓3衔H牙-脯出氨酸窑标记骗终末呢、跨奶突触听标记序3誓H挑-亮盐氨酸翻标记阶终末其、纤费维如3勿H贸-H与RP呀酶蛋浓白渔与H码RP守结合舅双标绍记港用吗途同研究还神经况元的滥传出叶路径例（五捆）播2-姓脱氧愧葡萄宴糖放辟射自胖显影熊法径原叨理磨2-毁DG游能与胳葡萄闹糖竞冷争和奥6-源磷酸治葡萄血糖异杂构酶府结合绩，但仓不能搁转化侧为相炕应的皇磷酸率果糖谦，因乌此滞仙留在犹细胞婚中。染将2撒-D陵G标庭记上写放射盆性同驴位素笑，就提可追允踪中伸枢神狗经系示统中巷各种跌神经博结构萍的代穴谢率湿。车结登果为在感添光底包片上策，代泽谢率哈较高向的核尘团和蛙区域士银粒胶较密攻。吃用括途使显示尿处于坏兴奋倒状态著的神分经元词链。福（六语）植饰物凝爽集素弄标记用法哈原裁理千凝集惠素通越过神坐经细同胞膜桂上不汁同受听体的劈介导属而被谅胞饮未入神典经元缴内，亩经轴键突运脏输至哲一定券部位督，再施用免砍疫组膝化的出方法肢显示蝇。妹凝集胜素念麦芽付凝集狸素（梨WG腰A）食可与漂HR裁P、括荧光套素结嫌合肥菜豆天凝集抬素（穗PH发A-羞L）丝用散途拆顺行政或逆尖行追象踪，岸研究孤神经由通路叼。重（七朋）葡惭聚糖柄胺结齐合生奔物素皮原米理俩葡聚胸糖胺移结合苏生物哗素(育BD据A)俱被绿胞饮挂入神疗经元互内，漂经轴难突运剪输至核一定逮部位牛，再叔用组皆化反胃应或丧荧光司显微池镜显澡示。喝用在途岁顺行长追踪隐，研鼻究神璃经通沃路顿。值（八摧）病堆毒标抢记法咽原盼理惨活病亡毒导蹈入神双经元溉，增宝殖，辟顺次愉进入渠各级念神经替元，郑用免尘疫组贼织化股学显减示。抛病虾毒源疱疹厦病毒准（单懒纯疱悟疹病强毒惕Ⅰ祸型、尚猪疱究疹病裕毒）跃弹状甲病毒蛛用馆途苍跨突捉触标舰记（乎顺向课或逆节向）减近年眼来，箭用分延子生械物学府方法美制作买基因恩重组毯病毒禾。将概绿色栋荧光黄蛋白锁（丘GF连P咱）的帆基因迹整合涛入病桥毒，汪通过顽病毒肯增值和，籍GF戴P选在感尼染的岗神经滤元中共表达酸。在押荧光鞭显微机镜下枝观察接GF呼P属基因柴重组朴病毒衫在单哪个神颈经元座范围邀内顺伴行或俱逆行富标记族，可择显示金神经列元全勾貌，桶与仪Go重lg舍i屠法相秆似。亚三、猎研究峡神经始肽分告布的抓方法榨（一泡）黄希递酶磨组织疗化学麦原缸理幻怨尼克萄酰胺孩腺嘌纺呤二扮核苷础酸磷质酸-惩黄递愉酶（护NA仇DP值H-蹦d）谎是神半经型疫一氧颗化氮未合成缸酶(污nN阶OS每)的孔辅酶桑，两肌者高药度共字存。崖可将前底物稿B-狭NA躁DP停H氧身化成终B-肆N获AD罢P，军释放能H2晕，使柿显色没试剂盆硝基挺四氮程唑蓝你(N砖BT胸）灯还原什成D用BT级,黄扶色变幸成蓝趣色或冠紫蓝在色。宝用伶途牙研究挪周围搭及中离枢神锄经系角统n酷NO悟S神且经元桃。绣（二情）诱允发荧掉光组耳织化污学法耕原防理割神经粉元内塞含量袋很微场的单沃胺类叮物质资如多葵巴胺载（D陪B）桃、去槽甲肾踩上腺词素（岗NA肺）、辈肾上滑腺素凳（A怎）和胸5仔-羟沫色胺箭（5绑-H锋T）握与某饮些醛邀类物州质在咱一定米条件禁下发裤生聚虽合反弃应，桶形成夸新的渠环形制化合地物，蓝在荧医光显紧微镜茄下发啄出较托强的泛不同暴颜色汁的荧免光。访醛佳类吸乙醛环酸、急多聚球甲醛耳加戊另二醛异等嘉用简途闭研究友周围纸及中厕枢神静经系届统单恋胺类严神经吓元。萍（二浆）免异疫细笑胞化锋学方晓法膀原竖理股用特僻异抗沟体加霉在神砌经组歇织切沾片上棒孵育欣，形悟成抗巾原-除抗体承复合咽物，扯将之幅用可竞见物棍质（捆荧光但素、眼HR疼P、彼同位究素等裂）标挣记出信来，里在镜终下观姿察。菊分芒类笨直接赏法惩间接爪法助直接废法柄标记凤抗体疼——肝抗原斤——刺显微持镜观爽察硬特点叹：简四单、缓省时僻、特炼异性其高、更非特呜异性宝染色丈轻。游敏感激性差途，一溉种标涝记抗尖体只中能检颂测一旅种抗军原坡。现肺少用议。崖间接打法衫标记味抗抗尖体训抗体秘抗原扇显微加镜观欲察得特点炕：叉只要颂标记板一种恩抗体第就可正检测忧多种示抗体递。敏棕感性定高，沙用途疗较广允。目挨前多交用。榴非标形记抗哗体过胞氧化冈物酶询-抗箭过氧洁化物耍酶法恰（抗即酶抗井体、变PA绍P法僚）瞧原抬理勉酶抗川体假（兔遇）元——防二抗亦（羊奴）仅——影一抗字（兔慌）猴——扬抗原二抗一抗待测抗原二抗一抗待测抗原PAPPAP复合物购抗生荣物素谜蛋白策-生帝物素库-过休氧化规物酶狸复合怎物法皱（A率BC禾法）灿原第理登生物揭素即趟维生驻素H饿，它王与卵栋白素牌有极侵高的嚷亲合迅力；利生物筒素与继抗体挥或多善种酶暂结合狡后，虹抗体蛛及酶鹊的活锐性不娇受影笔响。集AB比C复进合物榆——繁生物皆素化桐二抗等（羊悔）沟——师一抗谁（兔垒）祥——锐抗原眯AB散C复延合物托：佩HR难P-瞒生物完素-但卵白孙素卵白素生物素酶待测抗原ABC复合物一抗（兔）生物素化二抗（羊）卵白素生物素酶待测抗原ABC复合物一抗（兔）生物素化二抗（羊）ABCABC法染色原理惩免疫廊荧光畅标记吵原理震饶通过烂生物乘素将挺荧光乔标记狐物(妨如F伤IT杜C\谢Te谅x弯Re此d)镇直接棕与2调抗结敲合。僵抗原棋——胆一抗接（兔静）片——新结合蚁荧光探素的医二抗筝（羊赢）错免疫愧荧光院双标棚记羊抗小鼠结合羊抗小鼠结合FITC羊羊羊抗兔结合TexRed羊抗兔结合TexRed小鼠抗人兔抗人小鼠抗人兔抗人人人人人得免疫历胶体排金技暮术锐胶体桑金（技金的疮水溶跟液）色能稳赞定而疤迅速苹地吸科附蛋栗白，犹而蛋窗白的爹生物娇活性杆没有峡明显隙改变检。免绝疫金抹探针慌（胶姿体金收+免革疫球析蛋白壁）进贼行细饥胞表击面和努细胞糕内多梢糖、大糖蛋混白、必蛋白惨质、住抗原胳及激狮素等膏大分疤子的绞精确擦定位外。主艘要以餐电镜岩观察萍。躺免疫货细胞辣化学州技术温小结悉放射砍免疫滔组织饼化学症用同往位素四标记健抗体华免幼疫荧险光组姿织化葛学森用荧答光素和标记买抗体锅免脂疫酶荷组织痒化学筐用酶狗标记居抗体骑免疫的胶体咬金组友织化谢学霜用金疑标记柳抗体咏非钱标记抹免疫贿酶组匹化职（P随AP纤法）困用免背疫方铅法制音备酶削抗体齐亲捏和免柏疫细化胞化劳学耕（A突BC绵法）展酶标黄生物扩素与萝卵白断素结令合俯生物蔽素化株抗体兄四、摧电子秀显微纸镜技六术翻（透偷射电检镜）补应宅用：岭用于挤研究天神经伴组织亚的超植微结常构。扇具体蝴应用雹于：宏研究嫁正常均神经称组织稀的超枕微结偶构注研究握神经旨组织艺的发难育、久衰老盏变化御研究升神经敬纤维炭联系椅与H鸡RP秧、溃桌变等墙结合场研究奏神经董肽的兰分布葵与免慨疫组册化结银合溪多项俱研究享的结答合奔五、膝原位炕分子温杂交往组织缝化学昌技术闪核酸马分子供杂交蜂技术笼：沟在碱乌性环禾境下默，加统热或诵加入绢变性阿剂，袋使双临链D摧NA担分子腾解链笨成两申条单灯链（妈或单诸链R名NA衡），案加入概已知握的标甜记R船NA部或D俭NA姻序列欺片断状（探故针）楚，在毯一定惰条件抗下，汁则D黄NA杨与相蹈应的厅互补辽DN筹A或泊RN璃A、峰RN落A与拿相应艘的R贯NA疯重新爬形成哑稳定杨的异职质双娃链分胞子（竹DN董A-运DN费A哲、D殖NA守-R共NA彼、R哀NA处-R庭NA捧、R将NA眯-D获NA夹）。泡上述袖形成折异质例双链膜的过适程称遮分子访杂交平。趣核酸叙分子天杂交很依据切杂交拥条件肆不同存分三抖种类客型：夺液相腹杂交认、固避相杂耍交、罪原位淹杂交跟原位盼分子绒杂交戴组织槽化学怎：毅核酸性分子役杂交纱技术誉与组蚀织细土胞化龟学及突免疫贝组织建化学股技术博结合棋起来尤，在档组织熊细胞坚原位梯显示窃某种叮特定各基因茎、m乡RN你A及缝其产听物（她特异政蛋白鸟）的阅表达幅、定冬位、撞半定热量及衔其变般化规婆律的旦技术槽。芳应手用利显示舒脑内玉各种遮mR验NA氏的分冈布特岛点。菠观察仇发育黑过程愉中基告因表茅达的兔发生肤、发涛展规疑律。鹿研究阴基因伞表达盈的影铅响因命素及崖其调亦节机暑制。锅研究弄人类愿神经密系统醉疾病大。馅脑内类特定麦的m疤RN勺A的绝半定烤量观胜察。但与其谁它形错态学乓方法贫结合看应用优。依免疫世组织祥化学势与原乐位杂危交组偷织化扭学技很术的击比较钱IH馋C桐刘猫冲饮少疫I躬SH解H腹原眉理挖抗原谷抗体贴反应帝碱晴基互言补日显示好结构烂特定挪的抗演原畏特定烂的m怀RN放A、块基因奉（m矮RN救A编小码的株蛋白爹质）皱（特香定的辩基因并部位崭）谨显示极部位虚最终唯产物确的部消位遍蛋白诊质合磨成的浴部位用（爪胞体瓜及突恩起、邀终末属）欺（裁胞体烧）睡六、当其它炮新技粉术（就略）新第二伤部分椅边途缘系剖统榨在神币经薯系统粪发生沃过程秒中，寇由古码皮层需和旧歉皮层介演变输而来罢的哺懂乳动秘物大惩脑的络古老缎结构摩被称悄为边剪缘系另统。怖许多冬学者例认为口它还忍应包仰括神骨经系衰统中王与这忙些结虫构有喇密切钢关系匪的区格域，挑故边撇缘系敌统所同包含即的神沸经部龄位相很当广匠泛。肃已有苏研究鹅工作尸证明绞边缘焦系统仗和呼骡吸、抗循环浅、内牺分泌盈、摄饭食饮收水、头体温源调节部和性苗行为锅等生既理功与能有厅关；妇另一承方面滑，这扫个系被统和户许多哭高级箭机能怎活动专，如浪学习烘、记级忆、波睡眠双和情权绪活颜动有童着密族切的回关系禽。所掘以边蹦缘系该统越振来越挨为研谁究工惭作者低所注滚意。蜘边缘兼系统逆包括僚边缘遇叶和滚皮质跌下结屈构。钩一、怠前脑拉边缘查叶法（皮绳质部怪分）贫前脑找边缘铜叶隐li阀mb材ic盲付lo巡be播把即边絮缘系身统的惠皮质顿部，蚁位于疼半球训内面字邻近从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