定量分析方法性能确认

学习和讨论内容管理机构的要求方法确认的支持性文件方法的评价的主要内容1当前第1页\共有48页\编于星期二\21点ALB试剂说明书当前第2页\共有48页\编于星期二\21点ALB试剂说明书当前第3页\共有48页\编于星期二\21点管理机构的要求

2003年1月24日,美国医医疗服务中心(CMS、theFinalCLIARule)公布.陈述：“实验室的分析方法（non-waived）必须要确认其性能.”

当前第4页\共有48页\编于星期二\21点管理机构的要求

使用美国食品及药物管理局认可的但未更改的方法，实验室要证实其方法的性能与生产厂家所建立方法的性能进行比较。当前第5页\共有48页\编于星期二\21点管理机构的要求CLIA是根据分析方法的复杂性，方法分为三大类:1.Waivedtests(豁免试验)2.Non-waivedunmodifiedtests–moderateandhighcomplexitytests(中度或高度试验)3.Non-waived,modified(orin-housedeveloped)tests.(更改中度或高度试验或开发的试验)当前第6页\共有48页\编于星期二\21点管理机构的要求

Non-waived,未更改的中等和高度复杂性

化学、血液学etc.要求进行四个方面的方法确认1.重复性实验Replicationexperiment(estimateimprecision)2.方法学的比较Comparisonofmethods(estimateinaccuracy)3.线性实验Linearityexperiment(reportablerange)4.参考值的确认Establishreferenceintervals.

当前第7页\共有48页\编于星期二\21点管理机构的要求

Non-waivedtests更改的中等和高度复杂性或实验室开发的试验，要求进行六个方面的方法确认1.Precision精密度2.Accuracy准确度3.Reportablerange可报告范围4.ReferenceIntervals参考值范围

5.Analyticalsensitivity(detectionlimit)分析灵敏度（最低检测值）6.Analyticalspecificity(interferingsubstances)分析的特异性（干扰物质）

当前第8页\共有48页\编于星期二\21点管理机构的要求

《医疗机构临床实验室管理办法》检查细则（通用要求）医疗机构临床实验室应当保证检测系统的完整性和有效性，对需要校准的检验仪器、检验项目和对临床检验结果有影响的辅助设备定期进行校准。当前第9页\共有48页\编于星期二\21点CAP-LAP的要求COM.40300AnalyticAccuracy/PrecisionPhaseIIThelaboratoryverifiesorestablishesanalyticaccuracyandprecisionforeachtest.COM.40400AnalyticSensitivityPhaseIIThelaboratoryverifiesorestablishestheanalyticsensitivity(lowerdetectionlimit)ofeachassay,asapplicable.COM.40500AnalyticInterferencesPhaseIIThelaboratoryverifiesorestablishesanalyticinterferencesforeachtest

COM.40600ReportableRangePhaseIIThereportablerange(analyticmeasurementrange)isverified/establishedforeachanalyticprocedurebeforeimplementationCOM.50000ReferenceIntervalsPhaseIIThelaboratoryestablishesorverifiesitsreferenceintervals(normalvalues).当前第10页\共有48页\编于星期二\21点方法确认的支持性文件定量实验室方法的初步评价（CLSIEP10）临床化学设备操作精密度评价（CLSIEP5）用患者标本进行方法学比较和偏倚评估（CLSIEP9）定量分析方法的线性（CLSIEP6）临床化学干扰试验（CLSIEP7）基质效应的评价（CLSIEP14）精密度和准确度性能的用户证实(EP15-A)CLSIClinicalandLaboratoryStandardsInstitute当前第11页\共有48页\编于星期二\21点方法的评价的主要内容方法确认=评价误差总误差=系统误差+随机误差.方法确认的基本内容:–评价不精密度(随机误差)–评价不准确度(系统误差)–可报告范围的确认(线性)–参考值的确认(正常值范围)

当前第12页\共有48页\编于星期二\21点方法的评价的主要内容对于更改的中等和高度复杂性或实验室开发的试验，要增加二项内容：–分析方法的灵敏度Analyticalsensitivity(limitofdetection)–分析方法的特异性Analyticalspecificity(interferingsubstance)当前第13页\共有48页\编于星期二\21点不精密度

指同一样本在一定条件下多次重复测定得到的一系列单次测定值之间的接近程度，是表示测定结果中随机误差大小程度的指标。用标准差和变异系数描述不精密度的大小当前第14页\共有48页\编于星期二\21点不精密度

1.计算批内（间）不精密度(CV或SD),并将与厂家批内（间）不精密度比较

2.计算总不精密度(CV或SD)，并将与厂家总不精密度比较

3.不精密度分析目标进行比较当前第15页\共有48页\编于星期二\21点不精密度当前第16页\共有48页\编于星期二\21点CLIA88推荐最大测量不精密度当前第17页\共有48页\编于星期二\21点不正确度大批检测结果的均值与真值的一致程度与系统误差有关，常用偏倚表示不正确度当前第18页\共有48页\编于星期二\21点Page

19测量不正确度与检测系统的关系检测系统校准品试剂分析仪当前第19页\共有48页\编于星期二\21点不正确度

评价准确度的常用试验方法比较试验回收试验干扰试验当前第20页\共有48页\编于星期二\21点不正确度方法比较试验（comparisonofmethodsexperiment）将试验方法（待评价或待验证的方法）与比较方法（参考方法或准确度已知的方法）进行比较用于评价试验方法的恒定和比例系统误差。当前第21页\共有48页\编于星期二\21点不正确度方法要点：

–比较方法理想的比较方法=referencemethod–样本个数：40份患者样本

1/3低浓度1/3中浓度

1/3高浓度（可报告范围）当前第22页\共有48页\编于星期二\21点不正确度统计学包括：

图形分析Graphanalysis回归分析Regressionanalysis偏差分析Biasanalysis可接受的标准Acceptablecriterion当前第23页\共有48页\编于星期二\21点不正确度图形分析–差异图:Y轴:试验方法与比较方法之差

X轴:比较方法的测定值

当前第24页\共有48页\编于星期二\21点不正确度–对比图:Y轴:试验方法测定值

X轴:比较方法的测定值当前第25页\共有48页\编于星期二\21点回归分析回归方程Y=a+bXa为回归线截矩，反映恒定系统误差的大小,a=0时，表示无恒定系统误差b为回归线斜率，反应比例系统误差的大小，

b=1时，表示无比例系统误差不正确度当前第26页\共有48页\编于星期二\21点相关系数（r）可帮助判断测定的浓度范围对于斜率和截矩的评估是否合适，而不能用于判断方法是否可受。r>0.99,应用线性回归统计r<0.99,应用配对t-test不正确度当前第27页\共有48页\编于星期二\21点

判断差异能否被接受，应在医学决定水平与总可允许误差比较。应用方法比较的回归方程,计算医学决定水平的预期偏差.丨a+bXc）-Xc丨〈1/2TEa（CLIA88）不正确度当前第28页\共有48页\编于星期二\21点Page

29衡量质量的两个重要指标测量的固有不精密度测量的不正确度总误差允许总误差TEA当前第29页\共有48页\编于星期二\21点总误差（TE）

总误差（TE）的估计TE=SE+RETE=bias+nSD

TE<<TEa（CLIA88）(n=2、3、4)当前第30页\共有48页\编于星期二\21点Page

31允许总误差指标与其他国家总误差指标检验项目本标准TE(%)美国TE丙氨酸氨基转移酶16.0±20%

天门冬氨酸氨基转移酶15.0±20%

γ-谷氨酰基转移酶11.0±20%

碱性磷酸酶18.0±30%

肌酸激酶15.0±30%

淀粉酶15.0±30%

乳酸脱氢酶11.0±20%

总蛋白5.0±10%

白蛋白6.0±10%

总胆红素15.0±20%±6.84mmol/L血糖7.0±10%±0.33mmol/L肌酐12.0±15%±26.5μmol/L尿酸12.0±17%

尿素8.0±9%±0.71mmol/L总胆固醇9.0±10%

甘油三酯14.0±25%

氯离子4.0±5%

当前第31页\共有48页\编于星期二\21点测量不精密度和不正确度对质量的影响当前第32页\共有48页\编于星期二\21点可报告范围可报告范围（reportablerange）指可以报告的所有结果范围，包含两种类型的范围分析测量范围（analyticalmeasurementrange，AMR）临床可报告范围（clinicalreportablerange，CRR）。当前第33页\共有48页\编于星期二\21点评价分析方法能报告的可信的最低、最高的浓度范围值。确认厂家所提供该分析系统的可报告范围是否一致。目的:可报告范围当前第34页\共有48页\编于星期二\21点目测线性法最小二剩法线性评价NCCLS制订并推出的评价方案（EP-6）多项式线性评价方案（2002）可报告范围当前第35页\共有48页\编于星期二\21点红色：S形兰色：抛物线黑色：直线可报告范围当前第36页\共有48页\编于星期二\21点可报告范围样本数量：验证线性：5-7个浓度水平，重复2次测定。建立线性：7-11个浓度水平，测定2-4次当前第37页\共有48页\编于星期二\21点目测线性法可报告范围当前第38页\共有48页\编于星期二\21点可报告范围当前第39页\共有48页\编于星期二\21点最小二剩法线性评价方案拟合的直线方程

Y=Ax+B

可报告范围当前第40页\共有48页\编于星期二\21点1、b（在1.000.03范围内)，a近于0，则可直接判断该测定方法可报告范围在实验已涉及浓度。2、

若b不接近1，a较大；若b0.97，或1.03，已有可能b和1之间有统计上显著性差异。试着舍去某组数据，另作回归统计。若缩小分析范围后，回归式有明显改善，b近于1，a趋于0。此时，缩小的分析范围是真实的可报告范围。

进行统计学判断和评价:可报告范围当前第41页\共有48页\编于星期二\21点干扰试验是通过定量检测样本中的物质所引起试验方法的系统误差，以评价方法的准确度。由干扰物质引起的误差通常是恒定系统误差，与分析物的浓度无关系。干扰试验当前第42页\共有48页\编于星期二\21点

检测限（limitofdetection）指检测系统可检测出的最低分析物浓度。包括检测低限、生物监测限和功能灵敏度。检测限当前第43页\共有48页\编于星期二\21