无菌检查法药检所文摘

无菌检查法第一讲2000版药典无菌检查法增修订内容概述无菌检查法是针对无菌制品的无菌性而建立起来的一套检查方法，早在19世纪初就列入了药品检查的要求项目，在人们不断实践的过程中，其方法也在不断地改进和提高，检查的范围和内容也逐步扩大。中国药典2000版就取样量、培养基质量、无菌环境、无菌操作技术等方面有大幅度的增订和修订，具体概括如下：1扩大了检验范围：以往的无菌检查仅适用于药品及敷料，本次修订增加了肠线、缝合线及无菌器具，这就使一次性注射器、一次性输血输液器等有了切实可行的检验方法。2对无菌检查的操作环境提出了明确的要求，规定操作应在100级单向流空气区域内进行，并且对单向流空气区与工作台面要进行验证。3培养基：在提法上将霉菌培养基更名为真菌培养基。因为霉菌培养基上常有酵母菌生长，霉菌和酵母菌都不是分类学上的名词，而只是一个形态学类群，是一种俗称，被习惯称为霉菌和酵母菌的两大类群微生物属于真菌门。将霉菌培养基更名为真菌培养基能更确切地反映这一培养基的适用范围。在制法上提出可按药典规定的处方自制，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。使用脱水培养基（合成培养基）可大大节省我们的工作量和工作时间，但应注意使用应严格按说明进行，灭菌温度和时间统一规定为115℃30分钟，同时注意pH值的变化，并逐批对培养基进行灵敏度检查。培养基灵敏度检查：这是对培养基的质量性能进行检验的一个试验。此次修订增加了制备稀释菌液的一种方法，即直接稀释法，新增的第二法直接稀释法较第一法（比浊法）简单，人为误差小。对两种稀释法，2000版药典都规定了菌液的最终浓度为10~100个/ml而放弃了稀释级的提法，因此培养基接种管数减少，简化了工作量，明确了结果判断。4对照用菌液:对照用菌液是无菌检查实验中''加入阳性对照管的菌液''2000版药典对此项的改动与灵敏度实验相一致''也是将菌液的稀释级10-6改为最终稀释浓度100个/ml将金黄色葡萄球菌的接种培养基由需厌气培养菌改为营养肉汤培养基。5抑细菌和抑真菌实验此项实验为本次修订时增设。在用直接接种法进行无菌检查前，要测定供试品的抑菌性。增设该项实验是适应当前大量新药涌入临床，对这类药品进行无菌检查时，往往对其是否具有抑菌作用没有把握，如果其有抑菌性，就会造成我们检验结果的假阴性，国外药典都在无菌检查中设有此项内容。我国2000版药典增设该项内容，虽延长了无菌检查时间，但可以减少方法选择上的盲目性。因此具有很重要得意义。6检查法在检查法的序言中，明确规定了直接接种法和薄膜过滤法的适用范围，前者适用于非抗菌作用的供试品，后者适用于有抗菌作用的或大容量的供试品。目在进倾行无访菌检贼查前冤，提烫出用汽适当久的消洁毒液秘对供宜试品层容器抗表面衬或外屯包装距浸没漆或擦市拭消唐毒。始20当00跨版药蠢典把饶它作箭为一掏个实血验步吗骤提仙出来调，较厚95轰版更建明确纪具体舰。词（1介）直滚接接临种法嘉：将守95眨版的坚七大闸类供蜻试品叛进行零了简鸽并（申如2朗3条优简并头为一桑条）践；增热设了后内容杏（如严外科芹敷料营中增倒设了亡肠线得、缝智合线钉；又卵专项问增设清了灭蹈菌医荣用器膏具一饿条）耽；调拾整了洒次序倒（将洞有抑彼菌作鄙用和携抗生草素类狼药品端从直裙接接常种法默中删咸除，丹而其尚相应影的内惊容在衡薄膜染过滤月法中味体现售出来仪）。搅对青朝霉素喷类药舍品叙拐述了昌两种已方法胆都可楚使用叶，而成不是缎只用疑酶法考；放戴射性寿药品绵没有兽变更嘴。经痕过调策整，档最终日将供节试品耕归纳幻为六码类，览调整挎后的段款项悔，内框容丰所富，退归类浮合理岭。辉在直乞接接绘种法耀中，蕉最大抵的变里动是振取样剑量的厅增加窗和培款养基讲管数卵的增朗加，直这是倒本次纱修订园无菌触检查谷法的吼重要构改动君，并昌为此球专门招增设副了表笨格附砌后。糠从理勇论上告讲当伪某批羊产品虫染菌岂率一为定时含''耽检出臭有菌史的概登率随绢样本好数量六的增炉加而陈增加断''猜95文版进胶行无含菌检维查时茧''镜一般丢取用圈2个丹容器孝''滨在这碑种样浩本数具下'睁'通币过无焦菌检较查的耻可能法性很双大'展'而慢这时急所下浮的无偶菌结芬论'选'其久假阴泪性率煤比较严高'耗'2物00傍0版梦将取晓样量右增加婚到1骑1个眉容器找''欲接种远量从他全量状到5幅ml卡不等众''坛对敷要料由忌原两测个包妙装增册加到鉴4个拉包装雷''湾原来坛剪取族以面悬积计锻''联改为姑以重颤量计光或面标积计练。培暖养基针接种床管数煤由原出来的崭共7伐管调穿整到彻共1斧1管看''鲜其中膛真菌收培养旗管由并原来拉的2块管增距加到腔5管听''捞培养搏时间齿均设涨为7愚天'住'延使长了含细菌冒原来映5天趁的培麻养时化间'知'这同样的畜修订颂统一随了细亡菌和颗真菌扣的操痰作'假'提江高了碗阳性乘检出潜率。辩对加柱入供其试品族后'呼'培猪养基寸出现荣浑浊虫这一蝶情况躺的处笨理方缸法'醒'2碧00骂0版焦药典奏明确靠规定茅经7猎天培筋养后桌''或可转滨种或梳可显欲微观邀查'斤'而义不是逗两种唐方法崭同时胆使用泛。坦（2匹）薄谁膜过洗滤法念:仓本法小将取迟样量住由2凝支增企加到骆6支进将供众试品浑由抗秃生素镇类药递品、胃抗厌真氧菌闹药品投、抗监真菌销药品肚统一袖规定县为有乔抗菌副作用宇的药兆品'酿'并揪统一难操作斯''毫只是点在加拥入阳巨性对带照菌放时根臂据供津试品图的特袖性加换入不喉同的颤菌液跑，在盖冲洗义时'漏'没忽有统月一规言定冲欺洗次该数及胜冲洗租剂用蒙量'侮'而浅以冲宏洗至蛛阳性态对照湾菌能成生长凡为标自准'柜'这爆就需餐要依翅靠经碌验来胶操作桑。阳爆性对刃照菌环生长锯出来前的时清间规给定为糟细菌赢24蚀~4密8h静r'控'真漏菌2甘4~耐72诉hr俯。种在使阅用的漠仪器晋装置衔上'去'既厌可使享用传牲统的然装配箩式滤甚器'龙'也守可使崖用封缩闭式坛滤器纳''私后者厉是本衫次修痰订时址新出而现的置仪器大''阻由于蛛推荐均使用墙的J趁BY糖-滋Ⅲ尽型电帆脑集剂菌仪算有三宅组培悼养基远''皆分别圆培养异细菌找、真罗菌和所阳性嘴对照牌''辱因此拔相应超的传蓬统式妙滤器夺操作惨''部取出化滤膜猴后分揪成三眨等份亩''鸭而改于变了探以往气分为忧四等普份。垃7阴即性对架照:边中国昆药典持95也版的间无菌款检查夺法中舰规定块取一乡支需射厌气拉培养滨基作始为阴翻性对欢照即基可。言这一考规定岛明显封欠准刚确'肠'既截不能经指示测可能蝶存在榜的细恩菌污忘染'台'更竟无法麦在薄守膜过蛮滤法票中对撤滤器汇、滤预膜、弊溶剂强、冲贤洗剂攻等起敲到阴搁性对禁照的育作用载因此束20译00辛版对豆阴性课对照腔做了话更为察准确火的规胀定'扣'即稻应取接相应澡溶剂膨''挎稀释飘剂同夜时操汤作阴忌性对魔照与芳样品皇的唯慰一区贸别只裂是它冬不含蒜供试斥品。梦第二蠢讲动无菌馒检查借的慨克述击一、宴无菌蒙检查妹的定碎义及敌范围拣:话无菌浓检查符法是慢指检元查药傅品、庸敷料熊、缝笛合线涛、无营菌器蚊具及锯药典熟要求艳无菌唯检查伏的其固它品骑种是煌否无冈菌的牌一种娱方法胜一般黄来说乒''讲凡直烫接进戒入人见体血暮液循哄环系诚统、听肌肉讽、皮辜下组膨织、巴创伤句、溃边疡等锤部位汽而发净生作眼用的混制品学都要闸进行遗无菌捎检查蔽。吧需要恶进行车无菌医检查悉的药县品、铃敷料聚、器野具的区范围淘主要朋有以勺下几值类:大1各臣种注积射剂侦:用傻于肌衬肉、郊皮下列和静悲脉的悼各种百针剂侦，包嗽括注近射用拖的无佛菌水葱、溶筋媒和钓溶剂芽、还攻有输谷液和滤注射商剂原虏料等缴。傲2眼矿用及累外伤絮用制璃剂：创用于捆眼科污手术阅、角拥膜创漫伤及脚一般零创伤珠、溃伴疡和博烧伤扫等外雕科用印药品湿制剂并。许解多国指家对赠这类永制剂求规定鞭为无城菌，距我国骂也基铁本如迅此，呜但中讽成药拍中含某有生什药原汪粉的砌这类惨制剂菜达不页到要候求，栋则以路染菌效限度明要求涛。音3植溉入剂弟：即秀用于养包埋拘于人逮体内灯的药肠物制伤剂，罚如不润溶于鹊水的横激素脖、避夕孕药滚物、炮免疫执药物悦及抗统肿瘤居药物压等要搭求无菠菌的舟制剂约。榨4可纷吸收水的止阵血剂液：如辟明胶盛发泡垄剂、蹦凝血拒酶等单用于袍止血雕并可占被组闪织吸役收的低各种垃药物循制剂碰。卫5外缩科用就的敷逝料、滥器材妙等：年如外汪伤用酸脱脂嘴棉、投纱布披、结恐扎线缓、缝炭合线锹、可合被吸角收的财羊肠论线及薪一次递性注静射器高、一谷次性践无菌愧手术检刀片溜、输补血输品液袋玻、博竞士伦锣、心以脏瓣休膜、挂以及控金属弦和有弯机器犁材等束。救二、凑无菌膝检查专的意册义：社由于贯微生意物形劲体微锄小，淹适应犯能力鸭强，滔因而从它们说在自两然界紧广泛究分布肯，与辉动植幼物共迫生，帅互惠库互利勺，但死也正甘因为饮它们皱分布刃广泛匠，有花时也华给我耽们带吨来不叉利影烟响，屿就我武们医恼药行柱业来叮说，蛮外科菠手术重时，高如果屿手术缸器械境灭菌逐不彻船底，瘦会造郊成伤榴口化娘脓感始染；讽制药中时如乏果灭造菌不蹄彻底具，染胁菌药饿品进毒入人原体后两会引风起一染系列咸疾病羡，临者床上劫发生渗因输蛇染菌敞的葡锁萄糖龟造成奉败血心症死情亡的仅报道胳，国天内外涉都有埋，因奥此人净们很脂早就棒认识品了药思品微削生物觉检验沟的重杀要意歇义，皱早在艘本世锐纪初菊就列煤入了洞检验穿要求笔项目佩，现剑在各赤国药青典都陈对无抚菌检陵查范饶围、迹内容则、方你法、闻抽样伴有明希文规卷定，闸以保膜证无撤菌用扔药的大安全指性。乐三、闭无菌旨检查念的抽煤样：靠（一眼）抽跌样的伞意义密：劝无菌撇检查华的抽圈样，纠是指封从一垦批产燥品中绪抽取察一定欧数量旱单位嘴的样锈品，予作为丘检验占样本脾的方吸法，费各种莫要求惯无菌谦的药控品在共出厂古前，商应通辟过无科菌检体查，括以保雷证产棋品的述质量片。但盆由于净每批情产品晕的数刻量众穴多，酒还由疼于现吐有的赏知识罢及检脂测手泄段的贞限制渴，提职供不渠了非还破坏晃性确卷认批兰量产衫品中骄每一要个最偿终制愧品的涂微生竞物质刻量的另方法邪，因粥此通恩常只批能从欢每批蜡产品款中随捞即抽胀取一则定数澡量的鼓单位住产品男，作索为样雁本检捡验，骄以此列结果悟来判炸断整千批产颂品的谱质量告。从患理论拍上讲饶，无爷菌产逼品应私是没恋有微种生物泪污染片的产农品，衫但实燃际上虚，被薯称为妻无菌条批的足产品芳中，厕往往明不是朴绝对锤无菌蹄，而微是有舱可能撇存在言某种解程度种的污衣染，毛建立开在概尽率论福基础廉上的辽抽样窗方法饿不管所多么拦完善技，均狐存在权风险络，而绣这种她风险削随抽性样量陡的增天加而兴减少袍，随躺着微革生物笔污染坝程度航的降夕低而该增大脊。绵假如怪一个轨批中然有1情0的料产品阀受到董污染减，从哀这个黄批中腐取一美个成怪品样飘本做君无菌易检查盾，存顺在两鬼种可闻能性觉，取败到无极菌样挤品或纲取到剧染菌葛样品吧，取姨到无左菌样鼠品的尾概率讨（P虾）为绒09调，取束到染或菌样艰品的迟概率和q为傍01玉。蹲则p酷q0愚90资11来10侧如从积这个民批中帜取2格个成徒品样蒸本做间无菌葛检查蕉''用则存候在三绘种可艺能，我2个眨无菌舒样本怒，2阳各染制菌样恶本，刊1各钳无菌季样本跟和1游个染豪菌样跌本，隔以三况种可戚能组童合的面概率摸可按仁下式丧计算汤：超（p撤q）誓2p犁22盒pq裹q2胡将p集09献q0战1代屑入兄即得犁p2危08罗1取难得两卵个无涌菌样爽本的锈概率熔q2耕00俗1取惜得两麻个染谣菌样宏本的弓概率垂2p族q0杯18煤取得静1个著无菌攀，1但个染蚀菌样吹本的驱概率胖因此绍，当窄样本泄数为逼2时垂，这瞒个1甘0染朴菌的舰批抽所不到忠染菌逆样本府的概讲率p护20撞81索''般抽到且染菌尘样本幸的概屑率q烘22纵pq剃01室9。苦在无残菌检槐查中抵，一犬个染鸣菌批非，设漂样本详数为钱n，沾通过杂无菌旁检查眯的概姥率和旨这个铸染菌舱批被事检查货出来情的概勺率为筑：集pn励（1霞-q塞）n淋通过负无菌性检查调的概寿率（删合格炼）假1-荒pn商1-浴（1餐-q壳）n肢检出虑批染贿菌的坛概率路（不世合格抬）忽q系踏指批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