大蒜新素及其衍生物对兔痒螨的体外杀螨活性

大蒜新素及其衍生物对兔痒螨的体外杀螨活性研究任方奎何小燕李逐波*通讯*通讯西南大学药学院，E-mail:zb63@163（西南大学药学院，重庆北碚400716）来源：原作收稿：2023-11-21南宁兽药科技网上传时间：2023-12-1编辑:dongy大蒜新素是从大蒜（Alliumsativum）中提取的一种具有很强刺激性的挥发性油状物质，其化学名称为二烯丙基三硫醚，该化合物可以人工合成[1]。大蒜新素具有很强的抗菌[2]、抗病毒[3]、抗肿瘤[4]、抗癌[5]等多种药理活性。但大蒜新素在抗寄生虫方面的报道很少，LunZR等[6]曾报道大蒜新素可以治疗贾第虫病和有溶组织内阿米巴（Entamoebahistolytica）和滴虫性阴道炎（Trichomonasvaginalis）等疾病。目前为止，大蒜新素及其衍生物对兔痒螨的研究还未见报道。本文主要研究大蒜新素及其衍生物对兔痒螨的体外杀螨活性，测定半数致死时间（LT50）和半数致死浓度（LC50），并对大蒜新素及其衍生物的构效关系进行了初步探讨。1试验材料1.1供试动物自然感染螨病的家兔6只，雌雄兼有，平均体重2.0±0.5kg。由重庆市北碚区某兔场提供。1.2仪器与试剂倒置显微镜，20孔细胞培养板，挑虫针，大蒜新素（南通鑫利化工，批号：XY070705），二丁烯三硫醚、二戊烯三硫醚和二己烯三硫醚均有本实验室合成[7]，伊维菌素（河北威远动物药业），硫软膏（成都明日制药）。2方法2.1药品配制精密称取1.0g大蒜新素及其衍生物于10mL的容量瓶内，加0.1mL吐温-80用水定容至刻度，混匀，即得100mg/mL的储备药液，4oC冰箱中保存备用。精密称取0.25g的阿维菌素于10mL的容量瓶内，加0.1mL的吐温-80，用水定容至刻度，混匀，即得浓度为25mg/mL的阿维菌素，作为阳性对照液。取0.1mL的吐温-80于10mL的容量瓶内用水定容，作为阴性对照液。2.2离体杀螨试验[8][9]痒螨的采集用小镊子剥取自然感染螨虫病家兔的耳道痂皮及脓血置平皿内，平皿边缘涂少量的硫软膏。置30oC温箱内保存30min使虫爬出，借助放大镜，用挑虫针挑取螨虫，在显微镜下对兔痒螨的形态学进行观察[10]，鉴定为兔痒螨。杀螨活性的测定冰将试谋验分畜为药屡物组黄、阳木性对西照组赠和阴厅性对忆照组贱。药敢物组花：在嚷20大孔细载胞培矮养板犬的每耀孔各择加入层10途0m雾g/熟mL户供试纯药物趟0.衬2m姥L。劣阳性斤对照窜组：民20旅孔细款胞培塑养板累每孔尖各加辜入1娘0m贵g/效mL活的阿嘴维菌圆素0焰.2神mL柜。阴嚷性对常照组稿：在晴培养符板的堤每个丽孔中谱加0涝.2尚mL穗的阴削性对雪照液铃。每透组设骄置3尤个重仪复。速每孔搁放置茎痒螨工10角只，谦在1舒0银×犯40洲倍显捞微镜姿下观押察，爪分别葱记录益螨的厅死亡兆时间晨。判右定标豪准：爽虫体宜淋巴冬液流漠动，激虫体螺不动哭但刺服激有哲反应壮或长兰时间重微弱舞颤动跳为麻拌醉；壁虫体云淋巴睡液静扇止，碰虫体烦完全背不动海，刺仆激无费反应析，判赠定为布死亡付。叠2.宁2.疲3欺半辰数致胁死时莲间屿（L集T惧50跨）悟的测逐定虹将大饿蒜新柳素及糠其衍拢生物泰的储倒备液皆用水穷稀释起成浓辅度为骑20姿mg际/m壮L，泻挑取献10很只螨核虫置熄于2垄0孔懒的细衰胞培式养板蔬中，粥每个辩孔加糟0.铅2m承L药详物，打设置状3个寺重复剥，同啦时以甚阴性发对照者液为抚阴性倒对照裳。给汽药后耻用显矛微镜辫观察果，直果至所宜有痒趁螨死解亡，划记录何每个宿时段继的死吸亡情或况。陈2.熊2.籍4气半胞数致侧死浓妹度伏（L背C偿50访）畏的测柔定士将大宽蒜新靠素及炼其衍宝生物委储备至液先压水稀骗释成败4m将g/眠mL垂,烂再倍长比稀帐释成牌2.舰0m捷g/哲mL临、1略.0笼mg写/m宇L、培0.贩5m旅g/互mL额、0菊.2极5m心g/榜mL耕和0信.1羡25变mg煌/m盯L5护个不区同浓星度，绍每个男浓度劣设置壳3个宾重复敞，同索时以持阴性葵对照雁液为墓阴性牙对照材。在抗培养惑板的蛙试验察孔中构各加且0.辨2m墨L不户同浓女度的析药物零,阔每孔稻挑入嘱10尼只螨汁虫。视将培商养板信放入寨测试熄环境解(2辫5爱o常C，衔相对么湿度貌为7惜5%呜)，饲24棕h后饰镜检咸死亡硬情况律。剧2.拆3胳统计遣分析竞根据含机率厦值分甲析法贱，用节Ex厚ce楼l的肠卡方府检验茄运算柏程序假自动换判断敌毒力奇回归垒方程越的适袋合性此与否瞒[1洲1]识，计屿算姻出临LT丘50怒和喘LC皮50谁。您用踏SP泄SS仅1句2.搞0橡软件咳对试臭验数揭据进设行多粉因素全方差全分析佳。仁3瓣结果帆与分森析极3.平1卡杀螨味活性榨从表溪1中给可以某看出央，1失00混mg诉/m替L的尊大蒜妨新素蓄5m熔in热开始神出现成螨虫被死亡油，1文3m怀in帮全部碌死亡办，2敢5m庸g/玉mL泽的阿贺维菌榆素5躁mi备n开奶始出促现螨牙虫死扒亡，识17爆mi贷n螨党虫全盐部死姻亡，下可见岩10盒0m鲁g/尊mL开的大浓蒜新晴素与辣25乌mg滋/m瓦L的顺阿维葡菌素戴的杀收螨活盈性差趣异显掉著（悔P<尿0.迟05亚）。娇从表再1中萝可以墨看出边，相卧同浓左度下袋的大里蒜新叫素衍逼生物抄的完摸全杀兵死螨奉虫所掩需要液的时可间长塘于大自蒜新扫素，播大蒜助新素字与二糠丁烯充三硫座醚，扔二己坝烯三裕硫醚浸之间枣的差孝异显抄著（激P<成0.狠05超），铃与二浙戊烯冬三硫色醚的棵差异系不显探著（提P>后0.渴05舰）。价二丁叛烯三责硫醚站、二疯戊烯雨三硫浓醚与含阿维买菌素脖的差衔异不鞭显著肌（P痰>0犬.0呢5）冒，与避二己刃烯三仔硫醚漂的差裤异极狂显著胀（P促<0掀.0轻1）峡。大狱蒜新饱素衍第生物塞之间脆的差歼异显记著（督P<飞0.傅05观）。积可见躺，1压00完mg职/m横L大伏蒜新尽素与沙25雕mg势/m稀L的顽阿维杜菌素络杀螨锁活性病相当乎，从看图3悼中可蒜以看粪出随讲着链迹的延彻长大盏蒜新科素及诸其衍扔生物印的杀嘱螨时地间呈辰现本“为N拴”需规律蠢变化婆。酱表1载大蚂蒜新猪素及肠其衍行生物励对兔替痒螨雕的离茶体杀纯螨活扒性阁Ta山bl牲e课1叫Al谋li英ci慌n稿an夜d捞al愚li孕ci手n挠de暂ri抓va花ti肢ve蹄s蜂fo窃r叙th鄙e智ac辨ar蜓ic陕id盾al番a锤ct边iv鸣it海y妹ag刚ai匙ns倒t缘P脖so宵ro贩pt影es魔C浙un键ic统ul暂i电in也v鲜it冈ro梅组别叠药物秘螨虫垦数紫开始诚死亡岛的时星间/货mi减n妹全部陡死亡往的时服间/跨mi歉n协药物刚组债10剪0m导g/导mL姨大蒜闻新素男10搬5灯±晨1震dD胶13错±荷2脂eD亚10撒0m雾g/大mL裕二丁房烯三仅硫醚镰10男10晕±摘1至cC渠20些±慈2红cC俗10桂0m辅g/汉mL恩二戊恒烯三踩硫醚豪1后0话7快±屑1葡dC制D态15园±订2坏de确CD络10店0m州g/冶mL居二己略烯三箱硫醚忆10斤20乖±毕2忘bB煌35城±虎3户bB联阳性邀对照们组侵25左mg预/m榨L阿要维菌膀素舟10地5偏±雀1药dD昏17眉±嘱1论cd周CD秃阴性派对照贝组诚10木10抓80首±划60累aA缓28拐80衔±抵0统aA汉同一峰列中确右上慈角标膊有不较同小削写字挺母的俩数据页之间词差异耻显著余(P话<0盐.0蛮5)瞧,标李有不康同大欢写字歌母的台数据胀之间垒差异花极显限著(吓P<乖0.反01谢)。乡阴性修对照金组4此8h廉(2今88丛0m袖in蒙)内骨未完神全死钞亡,恢全部胁杀死患时间摘以2闹88袖0m羊in很计。筒3.要2巾半数啄致死仰时间避的计筒算00204060801001200123456789时间h死亡率%大蒜新素二丁烯三硫醚二戊烯三硫醚二己烯三硫醚阴性对照组余图1理大拿蒜新惯素及矿其衍振生物录在不工同时刚间的接累计餐死亡姿率音Fi抓gu忌re裙1芝暖Th平e在cu曲mu腿la穷ti煌ve屠m制or辨ta迷li捏ty均P汁so丸ro棋pt喜es取C贷un昼ic煤ul晌i轰of签t好he帽a盟ll星ic星in热a袋nd滥a聋ll包ic次in圾de牵ri泻va坟ti金ve畅s胃in劈t榴he墓d害if舒fe箭re产nt慢t脂im过es技从图管1中啦可以净看出药大蒜关新素蕉及其疏衍生址物对懂兔痒贷螨有悟很强叼的浸杆杀能鞠力，米在相也同浓挖度下蛋随着碌作用表时间修的延梳长，拨痒螨剑的死浙亡率忧增加投。将金死亡筐率转落化为芬概率倚单位廉求得逐不同炊化合洗物的芳毒力夹回归锈方程乎可知酿，大宁蒜新病素及厕其衍狸生物快组中活兔痒朗螨的菠死亡佩率与豪作用准时间虚显著提相关铸(r若>0步.9拿84殊0)覆，即仅大蒜堪新素押的毒钳力与窜作用忧时间佩呈正款相关烧,得蛾出大饰蒜新彼素、享二丁载烯三叼硫醚际、二不戊烯捞三硫有醚和园二己冶烯三伴硫醚同的压LT朋50去分别叠为肝0.典62文67泼、1倦.1度03观6、案0.大82油74读和2截.2斑30染8。傲大蒜鼻新素寒及其盆衍生抽物之眼间的氧LT气50仿存在采极显酒著差吵异辽(P那<0晚.0揭1)脖。阴犹性对宿照组斗无痒撇螨死恶亡。宣可见睬，2故0m评g/软mL棵的大赴蒜新沙素及博其衍健生物训有较导小的它LT肚50派,大监蒜新稍素及猛其衍镇生物短的的岩毒性衫比较轮大。坛从图萝3中勿可以报看出哭随着钳碳链蜜的延己长扬LT疼50呆的数拴值呈纺现绞“网N泡”只变化歇。绣表2扫大打蒜新缓素及胖其衍易生物池对兔斑痒螨页的毒盒力（里LT钳50太）的骂几率洞值回挤归分瞧析震Ta恳bl害e货2玻Pr伯ob身it需r组eg燕re祖ss完io臂n椒an员al限ys帖is佩o路f趴to弹xi庙ci盛ty政（L任T拖50危）o变f女t括he夹A负ll葬ic艘in刺丸an全d爱al钞li嘴ci柔n始de救ri堂va显ti狸ve锡s艰Ps物or经op闲te由s汽Cu携ni生cu饼li土i嫂n垂vi用tr卸o亲药品青浓度库mg求/m救L反回归筹方程葱LT叔50比/h茄卡方墓值慢χ刃2冲相关惕系数乓r律大蒜叼新素箱20浙y=袭5.膏51雄81扒+结2.滑55帜33沫x页0.拾62交67胖D妹0.好00摸04旁0.境99竹99下二丁奋烯三袍硫醚关20否y=肿4.岛90办26那+这2.堤27放38趴x乓1.挑10昂36扮B坏0.娘10想08奇0.飘99姜11鸭二戊窝烯三舍硫醚都20债y=慌5.政16身75毙+2猫.0在34小7铺x件0.昂82交74郑C望0.脉14译30托0.依99效68联二己劫烯三察硫醚泊20卖y=躬4.于28梨56丝+2辅.0蚂50艳3仅x卵2.躺23鲁08跳A继0.取15劝57径0.喇98执40睁同一魄列中份右上摧角标咐有不前同大脉写字命母的谷数据挡之间尤差异棋极显棍著(矮P<截0.过01匆)。脆3.采3矩半数玉致死洲浓度位的计麦算0010203040506070809010000.511.522.5浓度（mg/mL)死亡率%大蒜新素二丁烯三硫醚二戊烯三硫醚二己烯三硫醚君图2炒不熊同浓踪度大衫蒜新臂素及描其衍盖生物钻对兔饼痒螨店的时24箱h陶致躺死率绳Fi缠gu局re鞠2纤种Th刮e疏mo博rt握al宿it乏y惑of街d民if愿fe闲re深nt贼c聪on胶ce败nt应ra肝ti胸o余ns棕o卖f趣t老he俭a份ll舞ic浅in信务an肾d欲al泡li遣ci倒n域de汤ri哈va宽ti抚ve税s化Ps风or侨op拨te园s款Cu赠ni冲cu若li也a剑ft锯er择2死4西h缴从图顾2中但可以凉看出冲大蒜继新素耕及其吹衍生鸡物随共着浓蜓度的裤增加删，螨崭虫的称死亡迅率增蜂加。飞根据请几率眯回归仅分析环所得还的毒政力回粉归曲团线可匆知，呀大蒜健新素卸及其杠衍生伤物的满浓度婚与螨届虫的藏死亡息率显悬著相昂关眉（r瞧>0音.9烛58帆1）抽,表古明痒造螨的拳死亡陆率与蝴浓度疗间具溪有依毙赖性锈关系手，表泪2。莫大蒜锯新素轰、二派丁烯苏三硫费醚、援二戊踩烯三言硫醚吉、二誓己烯辞三硫明醚的榨LC朱50休分别酸为伸0.贸65申09偏、1傍.0垃98翻、0域.5坡33喇0、京1.挣20胜71冶。大程蒜素旁新素朝及其滩衍生散物之榆间的亩LC程50俭差异哭极显委著（潜P<阅0.幻01究）醒。板阴性雄对照谈组无经痒螨静死亡床。呼表3订大贴蒜新圈素及佳其衍始生物装对离或体兔傻痒螨冶毒力虾（杯LC嘉50蛾）的刷几率砍值回退归分心析泰Ta龙bl搏e辉3狂志Pr尊ob筒it溉r雅eg辛re援ss颠io坝n蜻an诞al短ys华is盈o鹊f禾to斩xi芦ci喷ty斑（L苦C畜50妄）o丈f慰th衫e排al佳li充ci汉n百a爱nd闹a晒ll戒ic微in型d席er桑iv既at筛iv起es望P翼so悄ro骨pt梨es与C余un梳ic话ul科i再in凭v膝it铅ro律浓度衡mg斤/m剪L聚回归饺方程大半数眼致死扯浓度己/h历卡方斩值悦χ偶2仗相关监系数对大蒜似新素柜y=咱5.溉30董5x笋+1圾.6抵33绞1驳0.预65更09茅D早0.霸23救31败0.中99强14膝二丁办烯三击硫醚趴y=赤4.息93倒15补x+俘1.兰68逼41自1.薪09难80端B显0.绕87绝94彻0.扬95秀81齐二戊天烯三此硫醚追y=饼5.偷49努70享x+浑1.朝81莲85穴0.扎53极30攀C坟1.欺19岂56伐0.拖96躬33幕二己近烯三批硫醚栗y=剥4.项88匠20曲x+眼1.绑44放48牛1.蜘20鸟71碧A顶0.弄48惑20纹0.滔96躺88毅同一增列中芽右上于角标武有不屯同大闭写字解母的蚂数据椒之间竹差异谱极显薄著(引P<详0.齿01字)。没可见复，大圆蒜新宣素及盯其衍寨生物技有较高小的帖LC迹50狸，大绢蒜新何素及形其衍盾生物冠对兔兽痒螨播的效强果好奋。从芦图3鸣中可俊以看嘴出随图着碳育链的能增加准LC抓50孕的变得化呈注现作“卡N屡”厌样曲最线变引化。000.511.522.55678910111213碳原子个数LT50(h)LC50(mg/mL)杀螨的时间(min)寇图3纤大葬蒜新桂素及堡其衍症生物翁随着吹碳原现子数乡的增半加杀锡螨时搜间，霉LT总50进，L迷C旦50训呈庭“盒N塘”杯样曲夕线规们律变召化挪Fi体gu脸re腾3绣辜Wi品th鸭i液nc街re录as此in亡g晓th熔e煤nu用mb做er码o址f尚ca驶rb病on津a旁to线ms练,泊a含ca爹ri润ci锣da疤l割ac虚ti弊vi使ty乎,尘L头T西50李胜an社d递LC碎50味o把f坊al慌li苦ci概n泡an糠d刷it回s交de包ri鞠va惩ti筹ve敌s渴sh钉ow圣厉“千N物”猾c伏ha庸ng孟es真.临4株讨论戚4.歌1脆兔痒习螨病风是由学痒螨让科的沙螨虫枪主要灭寄生忽在兔缺耳部挨的一锯种慢小性寄挣生性模皮肤宾病，还本病姐的特载点是灰病死梁率低浮、感么染率脊高、汉传播盈速度鹊快，俭导致脏病兔凯生长增发育抚缓慢陪，消岁瘦体威弱，望体重识下降蓬，机虫体抵钱抗力蔑下降慧，饲杂料报尼酬降仔低，床给养际殖户尝造成杂很大当的经筹济损滔失。番试验例结果扔表明仙，大弹蒜新垄素及迎其衍帐生物解对兔财痒螨马很强耕的杀偷螨活谊性，价其活纱性具歌有时失间-销浓度扩依赖抬性,狗大蒜胖新素傲及其混衍生揭物具避有速彼杀，鹅高效惨的特寄点，递10鼻0谁mg锡/m游L柿的大爬蒜新装素、闪二戊缴烯三映硫醚魔与2弦5绪mg榜/m罩L东的阿悟维菌奴素之志间差锻异不晴显著筑（捕P>常0.戒05首）。社4.廊2征阿维冬菌素稀是近纲年研目发的劲一种检大环索内酯束类杀袋虫药嫁，辛虽是巷一种棉低毒点、高装效的愈抗寄细生虫债药，膊具有腰很强因的杀创螨活赤性，狱但近采年泄发现利这类劫药在德环境紫中残凑留会字造成企不良想的生辨态影烂响，认目前泼已经喊有螨朵虫对数阿维以菌素拥类药唤产生预抗性外的报童道脉[1申2]辞。大闭蒜新莲素及贴其衍慎生物盯可以归通过刺化学钓的方牲法合宁成，碰作为咳中药社成分片的大独蒜新蝴素具诵有毒积性低雕、副嫁作用搂少、秩残留异低等宗优点掌，与周目前员广泛垒应用蛾的生盟物杀独虫剂巩阿维唱菌素作的杀湖菌活助性相吸当，做因此畏，大蝴蒜新型素及粪其衍五生物翻作为索植物勒源的荐杀虫埋剂具份有广娇阔的颠应用枕前景留。至雅于大当蒜新弓素及释其衍桨生物倍能否敏作为午杀螨敬剂还阵须进亮一步外深入南研究负，杀淘螨的秧机理弱也还急需要亲进一飘步研乘究。强4.凑3衣试验贴结果恰看出朱，大拆蒜新长素及施其衍祸生物敬对痒悉螨作淡用快呀，毒至性强战，具咳有较诉小的队半数红致死薯时间它（L认T法50盆）和阿半数紫致死缴浓度移（L评C凑50阵）滴，从波图3铃中可编以看尖出随目着碳燃链的篇延长泽对螨拘虫的菠LT攻50讲和表LC无50朋呈现弓“尾N逗”必样曲尖线的鸟变化芒规律故。大恶蒜新抵素和素二戊姿烯三台硫醚康的杀罗螨活贡性、薪LT慰50仆和博LC饿50乔相似博，二左丁烯沫三硫羽醚的际作用处次之结，二疾己烯够三硫布醚的鲁作用缝最低偿。这旧可能狮与化匙合物全的疏辩水性产、硫呈原子上的电誓荷及肉立体肿的变向化等笨多种录因素财相互携作用磁的结鱼果有隙关。件参考笼文献井[1斑]杨疾始刚宴.大通蒜新裁素二赞烯丙诚基三扯流化诸合物岩的化累学分陪析[致J]教.理慎化检戒验-虎化学哥分册延，2棉00智3，偿3（顿3）屯:1校42良-1依46撒.隙[2利]罩C袭ur户ti芬s轿H尝,区No场ll榨U匀,鞠St追ö咽rm挪an雅n与J嗓,丈Sl烤us街ar膜en党ko底杆AJ倍.繁Br爷oa艳d-飞sp蓄ec焦tr旋um助a纤ct去iv腹it费y洞of寒t浸he反v匪ol番at嗽il堆e飞ph汉yt烘oa怕nt煮ic居ip移in咬a仙ll栏ic聪in础i钱n绩ex贯tr朽ac右ts营o盖f融ga调rl亲ic校(匆Al级li散um张s偶at西iv璃um服L诱.穗)惰ag金ai届ns译t脊pl崇an晓t雅pa河th琴og雄en向ic乐b披ac滑te绒ri厦a,题f踏un和gi璃a亲nd刻O逆om趟yc匀et咬es无[J剑].愈P鼓hy听si皮ol据M辣ol顿P蹲la蔑nt太P涛at记ho锯l字20需04召;仅65利:作79垃-8报9.昏[3梯]膨W璃eb酬er至N查D册,诸An奥de恋rs束on减D浅O员,盯No均rt桨h昂JA烛,伏Mu证rr枪ay脸B穴K岗,膛La须ws阔on状L下D衔,葱Hu纽gh献es倡B过G蹦.让In浊v伯it眠ro狮v损ir婶uc厘id赌al钞e营ff叛ec测ts穴o贩f慰Al蜜li吧um表s训at粱iv薄um陶(袋ga梯rl多ic饱)饲ex戚tr洋ac腿t翠an越d寄co粘mp盘ou倡nd饥s袄[J涂].湾P乞la把nt疼a扭Me叛d茶19剂99对;虾58缓:窑41绝7-塑23渔.胞[4梢]深W夺u螺CC坦,笼Ch女un汤g需JG恭,抽Ts笋ai份S等J哈,劈Ya武ng悦J丑H蹲,蒜Sh她ee平n血LY晕.骨Di袍ff放er埋en纳ti矿al鹅e漏ff柏ec则ts璃o纺f顿al忘ly华l伪su梯lf毕id膛es旁f榜ro姥m粉ga公rl腐ic拌e代ss达en饰ti颜al隔o涨il挥o桂n蚊ce遣ll充c辞yc予le语r僵eg洞ul笼at柿io剃n塞in资h惭um尽an胀l鲁iv公er馅t租um米or禾c冠el获ls枯[季J]傻.搂Fo盼od各C造he城m攻To两xi互co明l陡20亲04兴;梯42秃:市19竞37安-4翁7.辟[5尝]述O洗om水me泪n东S烧,无An羽to须R原J减,懒Sr崖in供iv颂as拜G驼,耕Ka荐ru辆na滥ga尤ra返n赞D翁.懒Al溉li过ci坏n昌(抽fr暑om啄g梅ar秤li嫂c)斩i糕nd掘uc窜es尾c丛as渣pa滑se缺m译ed誓ia馆-室te软d叙ap坡op历to秩si全s横in命c贫an服ce琴r看ce拘ll识s述[J限].刺E这ur息J汇P企ha愉rm漏ac腥ol蚁2责00功4;辨4烘85呢:卫97淡-1招03荡.乱[6训]仪Lu绳n捐Z疏R,玉B隐ur统ri奖C怒,说Me拾nz覆in仪qe辛r迎M,穷e再t讲al脾.施An诚ti膀pa丘ra正si葬ti倦c耳ac吊ti换vi远ty揭o闷f析di纵al恳ly紧l爸tr由is倡ul吴fi索de汤(沾Da楼su隐an喜su截)把on蹈h系um爪an秧a察nd础a视ni维ma呼l踢pa膊th堆og亏en回ic晨p篇ro泼to欢zo维a寸(T逃ry你pa栽no多so赔ma款s皮p.游,菊En某ta天mo啄eb阻a亚hi词st冷ol朵yt妄ic钞a冬an玩d庆Gi蓄ar槽di估a屈la乞mb辅li专a)务i纽n棒vi贵tr赤o虏[J灿].架A贡nn最al姓es萌d减e慢la抗S嫌oc汤ie让te个B魂el脸ge书d鸽e擦Me连de投ci蓝ne误T扫ro狐pi晒ca寻le黑,栽19逢94谈,膊74韵(1波):列5吗1-山59杨.川[7见]锹Re太n叫Fa玩ng逝ku革i,禾H奋e视Xi弄ao躲ya贷n,浸D电en岗g景Li要,疾et某a妇l.双S凑yn馆th秃es效is充a倍nd集A撇nt像ib辆ac封te咳ri廉al饿A或ct保iv淘it归y裁of惨1蠢,3蜓-D问ia经ll套yl初-轰tr行is希ul纳fa愧ne幸D秒er馒iv垒at垂iv株es办[J海].抖割Bu奔ll抛.昏Ko拘