第四章药物分析方法验证演示文稿

第四章药物分析方法验证演示文稿当前第1页\共有61页\编于星期六\18点优选第四章药物分析方法验证当前第2页\共有61页\编于星期六\18点第一节

定量分析样品的前处理方法概述不经有机破坏的分析方法经有机破坏的分析方法前处理：特殊分析对象的前处理：药物制剂、生物样品

特殊药物成分的前处理当前第3页\共有61页\编于星期六\18点概述前处理的目的：将特定原子或离子从药物中分离出来，转变为适合分析状态适用药物对象：含金属元素（Bi、Al、Mg、Zn等）含卤素元素（F、Cl、I）含氮、硫、磷等前处理方法：依据待测元素在药物分子中结合的牢固程度，各有不同当前第4页\共有61页\编于星期六\18点

泛影酸碘番酸

三氯叔丁醇磺溴酞钠Organichalides（有机卤化物）当前第5页\共有61页\编于星期六\18点

酒石酸锑钾富马酸亚铁

卡巴胂Organicmetal-containingdrugs（有机金属化物）当前第6页\共有61页\编于星期六\18点概述前处理的目的：将特定原子或离子从药物中分离出来，转变为适合分析状态适用药物对象：含金属元素（Bi、Al、Mg、Zn等）含卤素元素（F、Cl、I）含氮、硫、磷等前处理方法：依据待测元素在药物分子中结合的牢固程度，各有不同当前第7页\共有61页\编于星期六\18点不经有机破坏的分析方法

适用于：所含金属离子或待测元素易于解离的药物常用前处理方法：直接测定法经水解后测定法经还原分解后测定法常用测定方法：配位滴定，氧化还原滴定，沉淀滴定当前第8页\共有61页\编于星期六\18点直接测定的分析方法－－应用示例葡萄糖酸锑钠的测定

取本品约0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加水100ml、盐酸15ml与碘化钾试液10ml，密塞、振摇后，在暗处静置10min，用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每lml的硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)相当于6.088mg的Sb。当前第9页\共有61页\编于星期六\18点经水解后测定法－－分析示例三氯叔丁醇的测定原理三氯叔丁醇在氢氧化钠溶液中加热回流水解，氯元素全部转变成氯化钠，然后用剩余滴定法，即于水解液中加硝酸酸化，再加入定量过量的硝酸银滴定液，使Cl-生成AgCl沉淀，过量的硝酸银，以Fe3+为指示剂，用硫氰酸铵液回滴定。当前第10页\共有61页\编于星期六\18点当前第11页\共有61页\编于星期六\18点不经有机破坏的分析方法

适用于：所含金属离子或待测元素易于解离的药物常用前处理方法：直接测定法经水解后测定法经还原分解后测定法常用测定方法：配位滴定，氧化还原滴定，沉淀滴定当前第12页\共有61页\编于星期六\18点经有机破坏的分析方法适用于原子与碳原子结合牢固的药物湿法破坏

(硝酸-高氯酸法;硝酸-硫酸法;硫酸-硫酸盐法等)干法破坏当前第13页\共有61页\编于星期六\18点湿法破坏－－凯氏定氮法凯氏定氮法（Kjeldahlmethod，）是一种常用的确定有机化合物中氮含量的检测方法。这种方法是由凯耶达尔在1883年发明的。凯氏定氮法的普遍适用性、精确性和可重复性已经得到了国际的广泛认可。它已经被确定为检测食品中蛋白质含量的标准方法。

当前第14页\共有61页\编于星期六\18点样本的分解：蛋白质+H2SO4→(NH4)2SO4(aq)+CO2(g)+SO2(g)+H2O(g)铵盐的分解：(NH4)2SO4(aq)+2NaOH→Na2SO4(aq)+2H2O(l)+2NH3(g)氨的固定：B(OH)3+H2O+NH3→NH4++B(OH)4–

返滴定：2NH4++2B(OH)4–

+H2SO4→（NH4)2SO4+2B(OH)3+2H2O当前第15页\共有61页\编于星期六\18点凯氏定氮法（kjeldahlnitrogendetermination）仪器装置

凯氏烧瓶：为30~50ml（半微量法）或500ml（常量法）硅玻璃或硼玻璃制成的硬质茄形烧瓶蒸馏装置（半微量法）：1000ml的圆底烧瓶（A）、安全瓶（B）、连有氮气球的蒸馏器（C）、漏斗（D）、直形冷凝管（E）、100ml锥形瓶（F）橡皮管夹（G、H）当前第16页\共有61页\编于星期六\18点当前第17页\共有61页\编于星期六\18点注意通过凯氏定氮法测得的含氮量一般被称作总凯氮量。总凯氮量有时并不能真正地反映样本中的蛋白质含量，因为所测定的部分含氮量可能不是由蛋白质转化来的。如今，凯氏定氮法已经可以自动化进行，一些催化剂（如氧化汞或硫酸铜）也被使用来提高反应速率。当前第18页\共有61页\编于星期六\18点干法破坏

干法破坏法适用于湿法不易破坏完全的有机物（如含氮杂环类有机物）以及某些不能用硫酸进行破坏的有机药物。

氧瓶燃烧破坏氧瓶燃烧法系将有机药物在氧气中燃烧，燃烧产物被吸收液吸收后，采用适宜的分析方法进行鉴别、检查或含量测定，该法适用于含卤素或含硫、磷、硒等有机药物分析的前处理。

当前第19页\共有61页\编于星期六\18点氧瓶燃烧法

原理：氧瓶燃烧法系将有机药物放入充满氧气的密闭燃烧瓶中进行燃烧，并将燃烧所产生的欲测物质吸收于适当的吸收液中，然后根据欲测物质的性质，采用适宜的分析方法进行鉴别、检查或含量测定。适用于含卤素、硫、氮、硒等有机药物的分析。当前第20页\共有61页\编于星期六\18点当前第21页\共有61页\编于星期六\18点氧瓶燃烧法②称样用材料及称样

A.固体样品无灰滤纸

B.液体样品纸袋

C.软膏类样品：将适量样品置不含被测成分的蜡油纸中包裹严密，外层再用无灰滤纸包裹当前第22页\共有61页\编于星期六\18点③氧气④吸收液作用：吸收液的作用是将样品经燃烧分解所产生的各种价态的卤素、硫、氮、硒等，定量地吸收并转变为一定的便于测定的价态。当前第23页\共有61页\编于星期六\18点氧瓶燃烧法样品

吸收液测定方法FH2O茜素氟蓝分光光度法

ClNaOH溶液

银量法、汞量法

BrSO2-NaOH液或NaOH液-硫酸肼饱和液银量法、分光法INaOH液硫酸肼饱和液

银量法、碘量法、汞量法、分光法当前第24页\共有61页\编于星期六\18点第二节定量分析方法的特点容量分析法光谱分析法 色谱分析法当前第25页\共有61页\编于星期六\18点含量测定的表述方式原料药：原料药的百分含量

W测定量/W称取量×100%药物制剂：表示量的百分含量

W测定的每片主成分含量/W标示的每片主成分含量×100%W测定的每片主成分含量：实际测定时取10-20片计算平均片重、混合均匀后测定平均每片的主成分含量当前第26页\共有61页\编于星期六\18点容量分析法容量分析法：用已知浓度的标准溶液，滴定一定体积的待测溶液，直到化学反应完全为止，到达终点，根据标准溶液的体积和浓度计算待测物质含量的方法。特点：简便，快速，准确度高，专属性较差（化学原料药分析）当前第27页\共有61页\编于星期六\18点容量分析法滴定度 每1ml标准滴定液相当待测物的mg数。滴定度计算当前第28页\共有61页\编于星期六\18点容量分析法直接滴定法的结果计算V为滴定液的消耗体积(ml)；T为滴定度；W为供试品的称样量(g)；10－3为质量换算因数(1mg等于10－3g)；F为滴定液的浓度校正因数。当前第29页\共有61页\编于星期六\18点精密称取阿司匹林0.3972g，用氢氧化钠（0.1021mol/L）滴定,消耗反应体积21.35ml。计算每1ml标准氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）的滴定度，以及阿司匹林的含量。（分子式C9H8O4

分子量180.2）当前第30页\共有61页\编于星期六\18点取司可巴比妥钠胶囊（标示量为0.1g）20粒，除去囊壳后测得内容物总重为3.0780g，称取0.1536g，按药典规定用溴量法测定。加入溴液（0.05mol/L）25mL，剩余的溴液用硫代硫酸钠液（0.1025mol/L）滴定到终点时，用去17.94mL。空白试验用去硫代硫酸钠液25.00mL。按每1mL溴液（0.05mol/L）相当13.01mg的司可巴比妥钠，计算该胶囊标示量百分含量。（注：溴与硫代硫酸钠反应摩尔比为1：2）当前第31页\共有61页\编于星期六\18点光谱分析法

光谱分析法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内的吸光度或发光强度，对该物质进行定性、定量分析的方法。单色光穿过吸光物质溶液时，在一定的浓度范围内，被该物质吸收的光量与该物质溶液的浓度和液层的厚度（光路长度）成正比。其关系式如下：

当前第32页\共有61页\编于星期六\18点取标示量为25mg的盐酸氯丙嗪片20片，除去糖衣后精密称定，总重量为2.4120g，研细，精密称量片粉0.2368g，置500ml量瓶中，加盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置100ml量瓶中，加同一溶剂稀释至刻度，摇匀，在254nm波长处测得吸收度为0.435，按百分吸收系数为915计算，求其标示量百分含量？(10分)当前第33页\共有61页\编于星期六\18点紫外-可见分光光度法紫外-可见分光光度法用于药物含量测定的方法有三种：1对照品比较法分别配制供试品和对照品溶液，在规定波长处分别测定吸光度，按下式计算供试品溶液中被测组分的浓度。CX=（AX/AR）CR

2吸收系数法按各品种项下方法，配制供试品溶液，在规定波长处测定其吸光度，再根据吸收系数按下式计算供试品溶液的浓度。

当前第34页\共有61页\编于星期六\18点紫外-可见分光光度法3比色法

供试品本身在紫外-可见区没有强吸收，或在紫外区虽有吸收但为了避免干扰或提高灵敏度，可加入适当的显色剂显色后测定用比色法测定时，由于显色时影响的因素较多，应取供试品与对照品同时操作。除另有规定外，比色法所用的空白系指用同体积的溶剂代替对照品或供试品溶液，然后依次加入等量的试剂，并用同样方法处理，在规定的波长处测定吸光度后，按对照品比较法公式计算供试品溶液的浓度。

当前第35页\共有61页\编于星期六\18点色谱法色谱法（chromatography）是利用混合物不同组分在两相中具有不同的分配系数（或吸附系数、渗透性等），当两相作相对运动时，不同组分在两相中进行多次反复分配实现分离后，通过检测器得以检测，进行定性定量分析。当前第36页\共有61页\编于星期六\18点色谱系统适用性试验系统适用性试验指用规定的对照品对色谱系统进行试验和调整，应达到的要求。（一）色谱柱的理论板数（n）在选定的色谱条件下，测定主成分或内标物色谱峰的保留时间（tR）和半峰宽（W1/2），按塔板理论公式计算色谱柱的理论板数。如果测得的理论板数低于各品种项下规定的最小理论板数，应改变色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、色谱柱填充的优劣等），使理论板数达到要求。当前第37页\共有61页\编于星期六\18点（二）分离度（R）定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。除另有规定外，分离度应大于1.5。（三）重复性取各品种项下的对照品溶液，连续进样5次， 除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准 偏差应不大于2.0%。当前第38页\共有61页\编于星期六\18点（四）拖尾因子为保证测量精度，特别当采用峰高法测量时，应检查待测峰的拖尾因子是否符合各种项下的规定。拖尾因子（T）以下式计算：除另有规定外，T应在0.95～1.05之间。当前第39页\共有61页\编于星期六\18点第三节药品分析方法的验证

一、目的

证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求，方法验证过程和结果均应记载在药品标准起草和修订说明中。

当前第40页\共有61页\编于星期六\18点二、用途1、药品质量标准起草时，分析方法需经验证。2、药物合成方法变更、制剂的组分变更、原分析方法进行修订时，分析方法需经验证。当前第41页\共有61页\编于星期六\18点三、需验证的分析项目1.鉴别试验；2.杂质定量或限度检查；3.原料或制剂中有效成分含量测定；4.制剂中其它成分（降解产物、防腐剂等）的测定；5.溶出度、释放度等功能检查中的溶出量等 的测试方法。当前第42页\共有61页\编于星期六\18点验证内容有：

准确度、 精密度（重复性、中间精密度和重现性）、

专属性、 检测限、 定量限、 线性、 范围和耐用性四、验证内容

当前第43页\共有61页\编于星期六\18点

（一）准确度（accuracy）

准确度是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，用百分回收率表示。

原料药可用已知纯度的对照品或样品进行测定，或用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定的结果进行比较。当前第44页\共有61页\编于星期六\18点

制剂可用含己知量被测物的各组分混合物进行测定，即采用在空白辅料中加入原料药对照品的方法。如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中加入已知量的被测物进行测定。当前第45页\共有61页\编于星期六\18点

回收试验空白+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M当前第46页\共有61页\编于星期六\18点

加样回收试验

已准确测定药物含量P的真实样品+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M当前第47页\共有61页\编于星期六\18点数据要求

规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备三个不同浓度样品各测三次。当前第48页\共有61页\编于星期六\18点

（二）精密度（precision）

精密度是指在规定条件下，同一个均匀样品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。用偏差（d）、标准偏差(SD)、相对标准偏差(RSD)（变异系数，CV）表示。当前第49页\共有61页\编于星期六\18点相对标准（偏）差（RSD），也称变异系数（CV）当前第50页\共有61页\编于星期六\18点1.重复性

在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度；在规定的范围内，至少用9次测定结果评价，或制备三个不同浓度样品各测三次或把被测物浓度当作100%，至少测6次进行评价。当前第51页\共有61页\编于星期六\18点2.中间精密度

同一实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备所得结果的精密度。考察随机变动因素的影响。变动因素为不同日期、不同分析人员、不同设备当前第52页\共有61页\编于星期六\18点3.重现性不同实验室，不同分析人员测定结果的精密度。当分析方法将被法定标准采用时，应进行重现性试验。如建立药典分析方法时通过协同检验得出重现性结果，协同检验的过程、重现性结果均应记载在起草说明中。

当前第53页\共有61页\编于星期六\18点

（三）检测限（limitofdetection，LOD）