艾滋病检测原理和技术规范课件

艾滋病检测原理和技术规范2023/6/91一、艾滋病与艾滋病病毒2023/6/92（有A～E多个亚型）与一种感染灰身白脸猴的猴免疫缺陷病毒（SIV）相似。HIV-1HIV-2Humanimmunodeficiencyvirus

HIV（有A～J，O1～O4多个亚型）与一种感染黑猩猩的猴免疫缺陷病毒（SIV）相似。2023/6/93艾滋病病毒感染后，可严重破坏人体的免疫系统，使人体丧失抵御各种疾病的能力，有利于各种病原体的侵入，从而导致各种严重的、难以治愈的机会性感染或肿瘤，最终导致死亡，病死率可达100％。2023/6/94HIV-1M组HIV-1O组HIV-2喀麦隆、加蓬HIV型别和亚型的分类进化与地区分布：西非、印度HIV2023/6/95基因亚型与感染途径的关系2023/6/96艾滋病从感染到发病的一般过程2023/6/97二、艾滋病检测的原理及方法2023/6/98各种检测技术为艾滋病防治工作提供广泛的技术支持平台2023/6/99艾滋病实验诊断方法2023/6/910各种诊断试剂特性2023/6/911硒标法金标法HIV抗体筛查试验2023/6/912明胶颗粒凝集试验（Particleagglutinationtest，PA）

2023/6/913PA的操作和结果判断2023/6/9145

450/630nm下测定OD值混匀，加盖，37℃温育洗板3

加入底物第二次特异性结合4

加入终止液1

加入样品洗板2

加入酶标记物加盖，37℃温育加盖，37℃温育第一次特异性结合酶联免疫分析ELISA

（双抗原夹心、两步法）2023/6/915快速法可否单独使用？《全国艾滋病检测技术规范》（2004版）：将PA、dot-EIA、胶体硒法纳入快速检测规范方法，因此可以使用。有研究指出：任何一种快速试剂可以筛查出99%以上的阴性样本；两种快速试剂均为阳性时，可以筛查出98%以上的阳性样本；两种快速试剂结果不一致时，可用ELISA复检；单独使用或两种同时使用时，特异性差别无显著意义。2023/6/916■

针对各种病毒蛋白的特异抗体■

区分ELISA真阳性与假阳性■

检测HIV-1和HIV-2HIV抗体确证试验WesternBlot免疫印迹法2023/6/917HIV的主要基因及其产物

（HIV标志物）2023/6/918ss-RNA2023/6/919全自动免疫印迹仪2023/6/920HIV抗体阳性诊断标准：■2条env（gp160/gp120+gp41）■1条env+p24p55p66p31p51gp120gp160gp41p17p24膜蛋白（env）核蛋白（gag）逆转录酶（pol）2023/6/921筛查试验：诊断出阴性样本，并为阳性/可疑样本排除非特异条带。复检1（试剂A）：对阳性/可疑样本排除操作误差。复检2（试剂B）：对阳性/可疑样本排除试剂误差。确证试验：诊断出阳性样本。筛查试验和确证试验的作用2023/6/922HIV/AIDS

诊断标准

（GB16000-1995）2023/6/9232023/6/924HIV！HIV？HIV感染母亲所生婴儿：分别于12个月、18个月追踪检测阴性者为阴性，18个月仍阳性者为阳性。2023/6/925三、艾滋病检测技术规范2023/6/926主要内容：

样品采集和处理

检测方法（HIV抗体、病毒核酸、病毒载量、CD4、HIV抗原检测）

安全防护、职业暴露质量管理（质量保证、质量控制、质量评价）实验室质量考评

HIV诊断试剂质量评估2023/6/927筛查试验（试剂A）阳性／可疑均阴性均阳性阴性重复检测（试剂A+B）阴性阳性确证试验筛查实验室一阴一阳确证实验室复核检测（试剂A/B/C）阳性／可疑阴性筛查报告（阴性）确认报告（阴性）确认报告（阳性）2023/6/928HIV抗体检测结果处理规范2023/6/929HIV待确证样品HIV阳性确证报告原件感染者确认报告原件确认报告复印件备案筛查实验室所在单位筛查实验室所在单位确证实验室筛查实验室艾滋病样本确证、报告流程：2023/6/930认真填写各类表格（最好能打印），及时上报。2023/6/931各筛查实验室每月5日前上报上月检测数据：2023/6/932四、艾滋病检测的质量控制2023/6/933

行政支持

重视、投入、理解

实验室规范化建设

规范、制度、程序

人员要求

资质条件、培训和轮训质量保证（QA）质量控制（QC）

室内质控

质控图的建立和应用

检验期间核查

试剂对照、外部质控品对照、平行双样结果关联性（不同方法、不同实验室结果、人群特征等）可实时校验：样品、试剂、仪器、操作等环节。质量评价（EQA）

实验室室间质量考评2023/6/934■

建立各项规章制度和操作程序，定期检查；■人员定期接受培训和复训，培养良好的业务素质；对HIV实验室的10项基本要求2023/6/935■仪器设备运作正常，定期检定和校准，妥善维护；■样品流转有序，记录详细，保存规范；■采用合格试剂，经常核查试剂质量，正确保存和使用；■环境条件符合要求，有监控有记录；■严格按照规范和试剂说明书操作；■建立各类质量记录表格，资料保存完整，溯源性强；■坚持开展室内质控，参加室间比对和能力验证；■安全防护、废物处理措施落实，建立人员健康监护档案。2023/6/936■每个实验室必须配备至少2种不同原理/不同厂家的试剂，其中一种必须是ELISA（第三代、双抗原夹心、两步法）。■第一次筛查试验推荐使用高敏感性的ELISA法，快速法可用于应急试验或复核试验。■按政府招标目录采购，保存供应商的资质证明文件，试剂批批检报告。■登记试剂采购和使用情况，注意保存条件并实行监控。■试剂和样品应分开存放，过期试剂必须及时处理。■不同品牌、不同批号的试剂不能混用（包括阳性对照）。使用诊断试剂注意事项2023/6/937■严格按照说明书操作和判断。■

实验室环境条件（温度、湿度）的控制。■

试剂使用前室温平衡的重要性。■

正确使用恒温设备（校准温度、放置方式、放置位置）。■

固定样品排列方式，固定对照品位置。■

统一加样的方式方法（加样器使用习惯、样品加样顺序）。■

加样过程避免污染（气溶胶、加样器移动路线）。■

按加样顺序加入各种试剂，加入质控对照前必须摇匀。■

严格控制反应温度和时间。实验操作注意事项2023/6/938■每次实验必须设立内部质控对照和外部质控对照。■内部对照质控血清必须使用同批号试剂盒内提供的阳性和阴性对照血清，其数量和结果控制范围，按该试剂盒说明书的要求设立和