中南大学生物科学与技术学院

中南大学生物科学与技术学院分子生物学研究中心教案授课科目:医学分子生物学授课内容:基因治疗授课对象：临床医学七年制、八年制授课时数：4学时授课教师：授课地点：湘雅医学院新教学区授课时间：授课教材：医学分子生物学（21世纪高等院校教材），胡维新主编，北京：科学出版社，2007年2月，第一版；医学分子生物学（卫生部8年制规划教材），冯作化主编，北京：人民卫生出版社，2005，第一版一．目的要求掌握：基因治疗的概念、基本策略、常用载体；治疗基因的受控表达原理与方法。熟悉：基因转移的基本技术；基因干预的基本策略；基因治疗的应用研究。了解：基因转移的靶细胞;基因治疗的前景与问题；人类生殖细胞基因治疗研究的伦理学问题。二．讲授重点：基因治疗的策略：如基因置换、基因添加、基因干预、自杀基因治疗、免疫基因治疗等；体内基因转移的方法。夹三．城讲授辆难点芳：不夺同类炮型的净疾病句应采熔用不吼同的称治疗纱策略傲；基若因干野预方眉法与牌原理刻；治求疗基疼因的椒受控寇表达浑原理劫与方仰法。侦四、蹲教学扫方法办：棉多媒势体教馆学流五、队教硬机具悉：垫多媒组体课剩件炊六、触讲授封内容踩：骂何谓崭Hu伙ma页n棕Ge汁ne踩T阀he市ra搞py岸？画基因山治疗各是现切代分妇子生独物学蔬技术鸟与医扶学科蓬学交枕叉渗踢透而痛形成喝的一脏个全弃新治归疗领君域。柜DN桶A重捉组、淋基因午转移吗、基老因克躲隆和榆表达念等技疫术的英迅猛盈发展萄，为或基因荐治疗武的飞凤速发称展奠乐定了美基础辣。好基因冬治疗食分类贤体细受胞(臭so饶ma肃ti英c也ce芽ll紧)基棵因治轨疗该册准只糖限于扔某一悦体细第胞的析基因匹的改粥变肾只限绍于某详个体考的当梯代稻生殖裂细胞维(g堂er默ml颈in贞e)摔基因撒治疗月茶夸紧打对缺炒陷的匹生殖器细胞仗进行职矫正餐当代境及子行代笨第一愁节装基因核治疗遍的己策略忘1．暮基因叠治疗帆的概隔念龙定义移：将挎目的谷基因树导入英靶细瘦胞内递，成油为宿楚主细供胞遗胆传物肢质的潜一部揉分，砖目的州基因右表达女产物功对疾宴病起腥治疗爬作用努。防不同荐的基糖因治催疗策援略是梢以不仆同的兄形式所利用湾基因脑产生巨治疗至效应张，因没而适键用于产不同挽疾病括的治有疗。诸2碑．之基因南置换换（g坝en阵e劲re天pl胡ac帅em标en分t）怨定义谷：指笛将特潮定的债目的捡基因艳导入叹特定白细胞捡，通休过定考位重贩组，桑以导太入的将正常糠基因沃置换捉基因绕组内歼原有缺的缺抵陷基哗因。浑又称跪基因昆矫正痛（g盼en各e际co触rr挠ec徒ti逆on傅）。作目的落：纠伴正缺肺陷基田因，脸将缺廊陷基押因的体异常瑞序列雁进行吸矫正跳，对脖缺陷锦基因已的缺赞陷部哥位进戴行精宣确的歌原位妈修复包，不孝涉及领基因饮组的绣其他瓣任何茂改变术。杀基因乐置换忆的必堪要条匪件：纤对导伪入的恐基因短及其殖产物梨有详缺尽的壶了解严；微外来菠基因垦能有永效地待导入夏靶细借胞；设导入横基因伯能在夕靶细税胞中窄长期蚁稳定盏存在斥；膜导入期基因到能有察适度拐水平瞎的表卧达；圣基因用导入卵的方辩法及固所用份载体幼对宿阻主细逼胞安锐全无牲害。某基因亲同源悔重组规技术抓（h昆om驼ol换og阶ou星s委re叹co犁mb饮in耻at灰io纠n)业又称糟为基语因打眠靶(救ge醋ne嘴t班ar冒ge饮ti伶ng睡），也其实共现定墙点整资合的柿条件螺:转捕导基荒因的引载体肾具有恐与染歇色体赶上的李DN坚A未相同透的序筒列。劣这样粮，带第有目肥的基促因的进载体疑就能搜找到胁同源骑重组改的位么点进窄行部窗分基鼓因序护列的秀交换搏。译要实忧现基纺因置郑换，讽需要缎采用题同源纱重组佛使相辨应的涉正常无基因租定向贪导入辟受体谣细胞负的基者因缺疼陷部从位。投定向攀导入饶的发送生率廊约1透/1筛00男万，策采用么胚胎饮干细索胞培苦养的燕方法洋，这沟种同仙源重氏组的画检出碗率最浆高可谦达1佳/1供0。型考虑多到正塘常体贤细胞舰的生的命周勤期，煮以及娇克隆桶筛选索等实撕验给冈细胞嫩生长瓦带来桑的一烛系列掩问题钞尚未垃解决良．因摊此用待同源妖重组控修复晴异常陪基因眼的方菜法进告行遗泛传病识的基颈因治扬疗只造能作向为远及期目辛标。来3．首基因艘添加茎基因企添加词或称隔基因磁增补爽（g辱en累e答au仙gm调en厌ta茅ti狸on恢）:食通守过导材入外跟源基尼因使胜靶细骄胞表马达其构本身起不表粮达的轧基因堆。汽类型箩:针秤对特由定的妹缺陷亦基因径导入井其相寸应的胳正常线基因灭，使示导入谅的正险常基尺因整觉合到但基因备组中慎，而柏细胞葵内的孔缺陷花基因缘并未什除去船，通镜过导货入正瓜常基剃因的铲表达歇产物博，补仍偿缺闻陷基偏因的另功能输；向冤靶细恼胞中绣导入样靶细且胞本念来不弓表达罢的基砖因，葵利用都其表籍达产男物达遇到治抬疗疾话病的其目的甚。高基因投添加链与基乡因置休换一血样，艳也必着须具铺备上阶面提谨到的第5个央必要故条件烟。袄4．牺基因冻干预摘基因踩干预撤（g津en牌e溜in渠te喂rf阶er特en犹ce墙）:俭采用膀特定梁的方幕式抑席制某宪个基驱因的甚表达锋，或重者通厌过破秘坏某趁个基积因的扁结构毙而使果之不代能表滥达，忘以达遗到治悬疗疾版病的额目的请。江此类泼基因纷治疗催的靶穿基因郊往往樱是过寻度表远达的裙癌基答因或傅者是喂病毒浮的基缩因。争较常袍用的芦方法晶是采旅用反魂义核娃酸、腾核酶快或者勺干扰微RN驰A技挺术等坊抑制黑基因碧的表扔达潮。逃5．暑自杀槐基因晋治疗猪恶性怨肿瘤说基因盗治疗恰的主已要方循法之彩一。乏原理崭:将证“伪自杀丈”匪基因这导入依宿主悟细胞啄中，掉这种硬基因禾编码雨的酶研能使狗无毒垦性的猪药物圈前体跪转化杀为细迁胞毒屋性代明谢物忧，诱蜡导靶类细胞悲产生款“望自杀览”庸效应光，从翁而达情到清膏除肿怠瘤细周胞的鼠目的衔。领图示煌：奸自杀移基因尤的作地用机民制挎（约闻2分晃钟）摸（一奇）自备杀基汗因系充统受TK咸/G抚CV滨：客单纯衔疱疹彼病毒肚（h矮er江ps食s殃im监pl旗ex喉v丙ir郑us史,明HS答V）盯Ⅰ费型胸良苷激非酶（位th衔ym帽id房in恰e率ki侮na惹se判,妻tk幼）基晃因编凝码胸坚苷激红酶，效特异爪性地转将无股毒的全核苷允类似凉物丙旱氧鸟芝苷（抵ga隔nc勇ic姑lo比vi役r,音G皇CV双）转安变成尖毒性婆GC帖V三屈磷酸倒核苷免，后尚者能盏抑制训DN愉A聚刊合酶场活性酷，或嘱作为独DN胁A链甲延伸绵的终勾止子味阻止举DN泄A合竖成，后导致窜细胞乓死亡久。禾CD目/5造-F粮C：绿大肠桂杆菌竹胞嘧半啶脱渣氨酶扑（全cy港to邪si咏ne齐d叶ea牛mi妥n携as纺e肚,集CD惜）基闭因，跌在细叠胞内慨将无寺毒性忘5-芦氟胞写嘧啶愤（5暖-F唯C）欣转变迹成毒垃性产辟物5驱-氟傍尿嘧貌啶（告5-燃FU名）。伪（二凶）旁纽观者晶效应鼠概念汉:锐“霸自杀冒基因猜”谅治疗捎不仅粱使转早导了秀“膝自杀次基因府”长的肿谈瘤细仆胞在捎用药也后被枕杀死呆，而零且与长其相僵邻的笋未转缴导伙“孟自杀妈基因容”际的肿幻瘤细刷胞也挎被杀岁死。胳远距颈离旁伏观者锁效应柏：近伯年来密又有扩人观的察到免该效声应也可影响粒到远制处的厅肿瘤斜细胞俱，使恢其消式除或谈停止站生长熟，即众远距游离旁译观者谜效应离。父肿瘤确细胞面的消嗽除有缺赖于束旁观签者效析应，注即转桑导自选杀基词因可彼以影百响没辩有被细转导脱的肿听瘤细悟胞。魄旁观级者效跨应明该显地座增强降了自允杀基领因对废肿瘤匙的杀睛伤作鹿用，偿在相档当程啊度上燃弥补端了基竹因转债导效勉率低绍的问逮题。卸旁观虎者效乓应的维机制题细胞船缝隙像连接伸；细联胞凋就亡与孟吞噬稠；免旋疫炎众症反屯应；如抗肿太瘤血领管生陵成等育。芹6．弟基因声免疫絮治疗滴通过顶将抗返癌免次疫增讨强细钉胞因隆子或拨MH绪C基妖因导插入肿赵瘤组尊织，狼以增杂强肿律瘤微茧环境怎中的贸抗癌垂免疫研反应丑。睡（1恒）基阳因修湿饰肿粒瘤细止胞软“柿疫苗引”嘉疗法姜。讨（2嚼）基迷因修渗饰T洋IL扯的过妖继免漆疫疗练法。地膝（3骄）免侮疫增竖强基心因疗壁法。方比（4胡）原枯位修熄饰肿刑瘤免福疫原叉性的反基因剪疗法雪。皱第二践节组基因省转移兰技术荒图示鱼基因取治疗决的两满种途誉径。询ex鸡v素iv户o(瓶经活律体)婚，即编将靶干细胞纸在体抛外导摸入外种源基标因及有体外欺增殖哄、筛编选、辫药物干处理魄或其尝他操湖作后垃，再着输回细患者载体内什。袭in裕v缓iv乌o美(活隐体内堆)，惠即将打无复辛制能哭力的周、含刃外源稼基因从的重泥组病庆毒直扇接应流用于嚼患者帐体内仍，此荣外还逆包括耐将脂汽质体荷包埋应或裸积露D朵NA宽直接贸注射爷到试企验者沉体内伍等方且法。济1．扎病毒疲介导捆的基罩因转闷移系眨统（位生物陆学方堵法）赞病毒六载体庆介导丛的基贤因转闻移效炸率较使高，猫因此决它也智是使锤用最絮多的徐基因饱治疗啊载体赠。据序统计搏，有警72拆%的眨临床剃实验痰计划农和7狗1%械的病埋例使矿用了造病毒继载体性，而绳其中艇用得柴最多蛮的是它逆转往录病璃毒载朝体岂(r披et奶ro谁vi时ru竞s撇ve巴ct饰or威,妖RV者)。梦（一竞）逆托转录住病毒集载体笼逆转外录病气毒是肌一种仅RN燕A病错毒，修其感唉染颗罩粒是餐由包薄装蛋绍白包鬼装的炊两条脆RN管A链乒组成与，两效条R成NA斩链5巷ˊ疮端经败氢键惩连接丝。子包膜老上的燥突起导由外陕膜糖信蛋白光和穿宵膜蛋逢白组虎成。虽病毒设包膜惹上有吃型、筛亚属吐特异度性抗爸原决谣定簇大，由倘外膜能蛋白萌基因盒(e毙nv供)编知码；仙在病仍毒核咸心内组有属抬特异伸性抗捉原，罚由属这核心疾蛋白馅基因馅(g律ag便)编贵码。瓶当逆打转录继病毒浪进入俩宿主激细胞业后，寒即由涝逆转帽录酶原转录缩成环后状双倚链D讨NA客分子云，并黄随机侧整合腐至宿奸主细究胞基蛋因组悦，称匪为前痕病毒育(p趣ro碑vi撑ru斧s)童，然旦后再登转录扑成R量NA构，并殃合成种包装找蛋白轮，将家转录选的R勤NA仁基因油组包环装后捡分泌恳至细唤胞外雄，完南成一劣个完某全的阅生活圈周期蒸。争图示鸽逆转商录病裤毒的厉结构青及生秆活周晶期愧逆转学录病威毒前如病毒务的结所构特割点荷：补（1恭）两豆端各匠有一掉长末甚端重著复序掌列L挡TR赌；矿（2弹）L摇TR崖由U说3、种R和且U5杨三部召分组异成依：愁在U批3内萍有增光强子容和启往动子茶；常U3坏和U汉5两格端分赵别有命病毒锄整合决序列值(I队S)耗；炒在R益内还萄有p糖ol截y(医A)衬加尾雷信号厅。败（3稀）病拐毒有源三个初结构稀基因冰：时ga掏g基叛因，乐编码皱核心圾蛋白糖和属取特异怀性抗带原；现po印l基戚因，冠编码岛逆转巡录酶兼；e裙nv跨基因云，编车码病册毒外口壳或劲包膜瞧糖蛋低白(污包括敬外膜缘糖蛋丑白和除穿膜油蛋白育)鼻；者（4棋）5腰ˊ脆端L幻TR践下游姿有一提段病立毒包白装所陈必需芦的序跑列哈ψ烛及剪玉接供睁体位值点(斗SD纤)和已剪接宅受体甘位点煌(S橡A)逃；撞（5括）含羽有负跨链D瓦NA貌转录剑的引算物结场合位条点(伶PB足S)收和正淡链D牛NA碧转录享的引坡物结凳合位荷点(拒PP填T)携。沃山拥图拴示逆素转录完病毒眉感染景及复红制过盆程。窜逆转属录病写毒载响体为续缺陷捐型逆我转录鹿病毒绪基因午组，遍它由肯两部任分组碌成：躬(1催)械逆转粮录病认毒载踩体典：闹保留耍病毒捷颗粒脆的包倍装信诊号杀ψ战，而只缺失揉病毒奴颗粒饱包装靠蛋白字基因刷；它烈可以矿克隆汇并表期达外曲源的依治疗眼基因群，但泼不能动自我殿包装蒜成有袭增殖贺能力睡的病店毒颗复粒。殿另一饮部分陪为包脉装细显胞，炭它由河另一蚀种净缺陷览型逆松转录院病毒锐（即撑带有其全套帜病阅毒颗耽粒包仁装蛋蜓白基野因，烧却缺形失包偿装信守号飞ψ陈的逆挎转录猪病毒怎）感灿染构绕建而浇成，生该细硬胞株候能合爸成包按装蛋筹白，榴用于巴逆转会录病克毒载刚体包稻装，秘但本家身却列不能垫包装惜成辅情助病舍毒颗岁粒。窜将上完述两习部分帽结合妨使用跳，即兵可产歪生携获带治熊疗基旱因，孟而只竞有一湖次感与染能叉力的兵重组乐逆转翅录病们毒颗蛙粒。街图示止逆转坝录病他毒载筋体系壳统的雕组成疗。辟逆转添录病豪毒载介体的捧特点冠：娇①慌逆转及录病孙毒包渔膜上处由e亡nv薪编码赔的糖向蛋白这能够制被许辽多哺疤乳动击物细擦胞膜流上的野特异会性受铁体所吗识别文，从集而使类逆转印录病芝毒携似带的边遗传势物质厕高效胀地进哈入靶巷细胞患。周②餐逆转依录病技毒结愁构基仰因g岛ag沉、e亚nv缘和p召ol脚的缺颜失不娱影响定其他禽部分陕的活说性。奔③闭前病晌毒可贷以高辨效整饼合至源靶细爸胞基扒因组主中，虏有利恨于外坊源基羽因在史靶细监胞中肺的永绣久表播达。搅④芬包装背好的凶假病般毒颗称粒（页携带迅目的倍基因雨的重蕉组逆企转录伐病毒刊载体锄）以煮芽生假的方喂式分四泌至凉辅助腥细胞鞭培养来的上佣清液河中，杰易于飞分离辩制备忧。丸逆转敞录病呼毒载铜体的炕主要强缺点用：船随机割整合浙，有披插入御突变草、激他活癌牺基因奋的潜层在危彻险；满逆转若录病抚毒载谣体的板容量凝较小或，只膊能容泡纳7掀k互b以友下的间外源袜基因启。秧（二字）腺街病毒而(a郊de生no勒vi煮ru赌s，赠AV致)载扮体悔腺病肿毒是忆一种氧大分苏子(纽36刺k牛b)死双链干无包抹膜D梢NA闻病毒润。它逆通过研受体蜡介导痕内吞镰作用焰进入窃细胞俱内，爹后被叛腺病统毒基栗因组纯转移宅至胞逢核内构，保哑持在拆染色匠体外蒜，不辅整合拦进入轮宿主两细胞楼基因泳组中保。竖腺病霉毒是昂人类爆呼吸嫂道感轿染的妇病原哄体，万但目挎前尚林未发从现与景肿瘤毁发生纽有关过联，诚其宿袖主细节胞范起围广农泛，铅可感温染分促裂和舍非分真裂终创末分症化细老胞如意神经跪元等端。宋图示弟腺病敌毒结册构特瞎点及铁感染稻过程坚。烫腺病每毒的包优点旬：爹基因皱导入诸效率诊高，莲对人纵类安插全；摄宿主较范围太广；迹基因拐转导唯与细歪胞分特裂无橡关；夹重组罩腺病毕毒可贫通过痕口服换经肠毒道吸烛收、遥或喷帮雾吸晃入或秧气管栗内滴兆注；识腺病饥毒载粮体容娘量较糊大，顽可插短入7略.5蒙k云b外迎源基撒因溉腺病壳毒载键体缺灿点绘：增1）赔不能鞠整合逐到靶塘细胞忧的基裕因组章DN捐A中邻。分框裂增逝殖快德的细叙胞，踏导入塘的重载组病辩毒载辞体，愈随分坏裂而笨丢失嫂的机箭会增麦多，疮表达山时间轰相对酒较短改。难2）锈宿主脖的免晒疫反降应导错致腺离病毒罪载体交表达架短暂加的关许键性胡因素住之一尿。促3）炼有两竟个环蛋节可念能产议生复滑制型形腺病绩毒：虏腺病蛮毒产芝生过庆程中感与2每93榆辅助稼细胞乐内E菠1区代序列厅发生研同源搁重组乌；腺营病毒盈载体毫与被随治疗干的患唉者体涛内已塔感染爪的野邀生型秘腺病容毒，敏甚至很乳头暮瘤病脱毒、肥巨细娘胞病美毒发戒生重考组。糟4）召靶向夸性差耽。激（三吹）腺蹲病毒窗相关孤病毒言载体俩腺病销毒相帐关病宗毒(法ad庸en冤ov扯ir扛us组a停ss贿oc昼ia肢te杨d曲vi命ru问s，揪AA睬V)跟是一赢类单宗链线蒜状D圈NA南缺陷厕型病好毒，处是目军前所逮发现凶的动帅物病和毒中酿最小狼的病驶毒，萝其基各因组均DN敬A小悼于5扩k键b，抄无包班膜，龙外形洲为裸绒露的票20榜面体屠颗粒吓。A管AV鉴不能宗独立型复制掏，只写有在莫辅助瞒病毒挥如腺躺病毒里、单环纯疱精疹病杂毒、徐痘苗蜻病毒赏存在谣的条君件下演才能榴进行遗复制情和溶沫细胞塌性感穿染，储否则中只能君建立烘溶源书性潜奏伏感本染。欲图示干AA处V的缎结构皇。明AA塌V生俱命周农期的典特点眠：浊●废单沙独不纳能进鞭行复挥制；辟以潜睡伏感匠染为轻主；洒●愁病可毒基抱因组拦与细是胞共街存；寇●馒只访要宿照主细神胞正浪常，妄AA弱V基专因表依达就适处于特抑制罢而维识持潜氏伏状铃态；装●移若浴细胞难受刺搁激，迫表达掩应激僻基因泊，颜AA写V基怜因表泛达从维而使枣AA鞠V病德毒复帜制；像●枕产施生子盖代病浩毒并毯释放期，又键感染段新的竞细胞塘，建寄立新怠的潜赶伏状株态。席AA部V载父体是芬目前茫正在便研究蛮的一承类新妻型安翼全载害体，驼它对宇人类丘无致辫病性滚。其粱中一表种B沸19章病毒匹可以智高效遥定位桶整合淋至人别19肯号染养色体逆的特猜定区显域1缝9q涝13陈.4跨中，两并能蜓较稳发定地浮存在发。这牧种靶旗向整住合可尺以避朵免随捞机整表合可稍能带涌来的敞抑癌舱基因签失活花和原荡癌基唉因激狠活的置潜在粥危险雨性，训而且造外源迅基因鸣可以氧持续月稳定曾表达士，并须可受滤到周粉围基梢因的逆调控羽，兼症具逆宅转录桨病毒拍载体博和腺穿病毒另载体咐两者箱的优偶点。粮AA泼V载担体的喘缺陷尾：益AA竞V载溉体容灵量小气，目厨前最篮多只首能容蹄纳5重k奶b外先源D草NA惨片段厘；停感染宴效率刃比逆屑转录究病毒俱载体颤低。公在4坚0%朴-8险0%粉的成伴人中哄存在矛过感票染，但可能研会引饭起免扩疫排燥斥。吵（四抓）单圣纯性逼疱疹男病毒漠(h扰er杰pe匙s狸si殿mp荣le会x映vi鲁ru末s，栏HS有V)近载体香HS蹄V夫具有非许多语天然拘特征魂，适叙合作俘为神授经组双织的鬼基因株转移缸载体悄：刊在不铅同的臂神经伍细胞备中可你建立纪长期绍潜伏乘状态桶；在壮病毒序进入需细胞禽和建纯立潜近伏状峰态时春，不份需要急宿主膊细胞节的分株裂；米在神缓经元店细胞曲核中弓，病边毒基辉因可尽持续疮存在酱，不脾整合灯至宿铅主细扫胞的脆染色搬体中座，避口免了塞因整他合而辣使宿猪主细旬胞基足因失涝活或将激活跑原癌摆基因救的潜半在危爸险。响崇HS浮V载渴体的爪优点适：床1）虽HS骨V中煎有许点多基匙因，己切除凭后可肯明显逢阻碍登其在倦体内萌的复大制，罩使之下丧失旱神经路毒性祸；2虚）切纯除大压部分页病毒薄基因厨的重圈组H柿SV栗，可妻克隆脑较大踪的外甘源基拢因片锋段甚荷至多窃个基腐因进挨行转云移，龟而不口影响赠病毒寻外壳萝的包才装能辞力；鹅3）堵HS充V在保体外卖可达秤到很慎高的岸滴度尾，以墓作为元病毒询贮备映。吊2.奖非病附毒介被导的书基因架转移牙系统句（非犯生物抗学方套法）刚。垃（一坟）脂检质体母介导挽的基宰因转膊移技松术需1.涌脂质傲体介填导的浮基因贱转移腰技术助使用逮方便捆、成薄本低这廉。鞭基本吵原理炒:利肌用阳美离子敞脂质凭体单北体与锈DN锻A混顿合后益，可缘以自远动形溜成包扁埋外巡源D摆NA耐的脂叉质体齐，然组后与取细胞称一起转孵育凭，即雀可通堡过细勇胞内结吞作顶用将汤外源崖DN距A（沈即目卡的基堡因）美转移套至细椅胞内沟，并摸进行炸表达抖。回图示慌脂质貌体介茂导的裳基因栽转移楚过程皂。陶（二外）受触体介妨导转纲移技政术前将D山NA申与细垃胞或刊组织绍亲和杯性的占配体仇偶联凯，即忌可使领DN按A具王有靶民向性润。这拴种偶铸联通肃常通出过多隆聚阳悄离子程，如用多聚在赖氨夏酸来盯实现店。多挪聚阳恭离子养与配篮体共跌价连泪接后誓，又布通过再电荷摄相互惑作用星与带写负电炊荷的唱DN切A结怀合，枪将D注NA巴团团示包围债，只暗留下遮配体煎暴露乒于表慕面。项这样申形成技的复冰合物骗可被静带有赵特异品性受惯体的底靶细破胞有刊效吞塘饮，旦从而多将外犹源D担NA旋导入拔靶细妥胞。调图示合受体初介导泡的基磁因转昂移过盆程。完第一勺个进铅行这遇方面隆应用吵研究旷的受汪体是诱仅在席肝细介胞内贼产生榴的去电唾液舍酸糖画蛋白织受体翼。尖它的训主要音天然脂配体红为去赵唾液钟酸血因清类庙粘蛋鬼白。宿将牛吧血清西白蛋赌白半义乳糖锋基化首也可锅形成队该受佳体的浑人工件配体陪，带厉有这靠种配腹体的箭DN映A复泊合物燃即可方被定瓣向送阅入肝匀细胞坑，而那不进级入其傍他组堡织。降目前偶研究滴的配祖体也有蚕胰岛陡素、茂表皮据生长疤因子螺、凝作集素校、运眉铁球时蛋白饲和红磁细胞诚生成产素等底等。李这种雁类型更转移鞋技术桌还存倦在一滤些缺冒点，牢如D疲NA降复合镰体进秋入细接胞依诊赖于督配体挂－受评体介揉导的勒吞饮弦作用悔，而搁这是须一个属将配桐体－愈受体鹊复合拒物导杠向溶验酶体廊的过攻程。撤在溶美酶体倒中大浸部分便复合善物将外被降气解和可再循悉环利管用，扫只有杰少数访导入湿的D黄NA周能够吊逃避秀这条鸦途径匙而进竿入细隐胞核油发挥腹作用垫。冰（三模）基挨因直毫接注钟射技误术青不需柏要进滚行基伯因工扑程的套繁琐告操作袄，直庆接将借裸露滴基因棍DN尤A注奖入动循物肌下肉或蜘某些慰器官油组织撇内。甜动物姥实验信表明盒：接赶受注印射异搬体D他NA济的小堡鼠能辛够按同其基喜因编凉码合爷成相轮应的监蛋白息质，能并能鄙维持持数月赞之久恰。将承促进伴心脏斥血管庙生长皆的基甚因直腾接注幻入实译验鼠费的心蛮脏，却可使罚其心锅脏壁俭内毛辞细血清管增牵加3菠0%帝～4符0%化；将观胰岛路素基承因直缴接注肚入鼠意骨骼霞肌细谷胞，蝴能分旋泌糖演尿病升所缺驱少的扭胰岛胡素；惰肌内拍注射惠凝血引因子活Ⅸ抵基因软，可益产生正血友丢病所俱需的香凝血氧因子骡等等曾。昆基因旷直接子注射炎法的心优点株：殊1.聋制备悬具有耍调控逆部件位的质鞠粒D赚NA恼重组闻体的尾技术秤较容昌易；纳2.历排除位病毒惰载体燥可能效潜在诸的致形癌性藏或其租他副涂作用逆；薯3.宵导入鲜的基鸡因不绘需整咏合即芒可表领达，忘避免讽了逆菊转录刻病毒低载体象导入誉整合砍后，烘一旦验发生霉副作下用不搏易中过止或歼逆转币的缺释点；斜4.辞基因悼直接刊注射撒法可井反复惯使用歪，而陪病毒有载体液则可锣能诱第导体找内免免疫应软答，庭致使贩反复圆治疗些效果异下降可。出（四跃）挖纳薄米转锐运体饺（五渗）其课它方夺法围非病肉毒载戒体介巴导的竖基因队转移垒系统于中还任包括扬磷酸通钙共妹沉淀尽、电幼穿孔容法、增DE帆AE涂－葡腿聚糖器法、杀细胞博显微羽注射面以及唤基因批枪颗沾粒轰烫击等伍多种彼物理股、化轰学方生法。撇这些碑转移岩方法恨的效铅率差扇异较凤大，屿有的挤需要程特殊掉的仪月器，栋只适姻合体撒外基闲因转右移，蚊在基锈因治植疗中伍极少挨使用奶。恢列表般比较蔽各种护基因诞转移贯方法术的特被性。化第三品节株基填因干事预夕一、伐反义各RN床A孝(－你)剧反义家RN笼A与情基因袭表达础调控柱疾慧判按利用梨反义春RN务A对值体外荷培养叨的细献胞进众行基宰因表勇达调洪控通散常采雀用的肝方法惹有两迹种：线1.拨体外纯合成监反义军RN前A，屠直接寸作用乒于培绵养细泳胞，槽细胞俩吸收荒RN值A后晓，发柱挥作滥用。贪2.得构建式一些羞能转白录反损义R塌NA恭的重见组质少粒，僚将这求些质相粒转塞入细皇胞中阁，转欠录出利反义语RN淋A而顷发挥处作用休。址反义绿RN近A用秃于体肥内基勉因治状疗，赚必须业解决梦以下秋两个屋关键不问题桌。著l.帜专一奉性转淹移问等题：拖即慎如何恨专一闭性地势对病付变细坡胞进裂行调以控，去而不捷影响收其它边正常慧细胞晃。崖2.科反义拒RN粪A进炉入靶达细胞购前的侵降解咬问题祖：准反朝义R威NA激抗R安Na杰se做的能记力并舍不强龙。将溜反义嫩RN畜A注桶射到踢体内王。体浓内的狠RN爷as要e就聋会使锈反义耻RN跳A的哨有效听量迅晓速减矩少，侮剩下炒的未牌被降艇解的圆反义葵RN朱A也应无法钳集中聋到病山灶处欺而是芹分散怎到全湿身。样（二份）受竿体介贼导反塔义R悲NA五技转民移术钞耳借助债受体闹介导团DN祥A转篮移方先法把肌DN景A换学成反倡义R孔NA佣，就搁可以周实现夫受体添介导磁的反案义R达NA枯的转抵移。被受体落介导须的R驶NA瞧转移薄十分阳专一慰，而续且效轮率高漫；被殖转移症的R摆NA奉是被左保护仪的，贯与周樱围环尺境之尸间存发在多射聚赖桂氨酸惩的保泡护层衣,因相而可歇以抵惩抗环梦境中减的核槽酸酶拔的降味解作篇用，怜提高杠转移岁效率哪。粮利用费脱唾勾液酸探血清捡类粘除蛋白辛（A圈SG蔽P）句受体岂介导提反义西RN洋A转桐移时亲,应寨先脱炸去血厨清类座粘蛋预白上稍的唾缎液酸阅，得司到A渣SG悟P，愧通过域化学巾物质堤作为拆中间椅连接甲物，高将A粗GS刃P与康多聚宽赖氨狐酸（行PL再）共仰价结宏合，免得到项AS朴GP物-P星L复猾合物塌，即逢成为解运载榆核酸颠的工洪具。宋AS本GP隶-P束L反熊义R按NA裤复合业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