黄酮类化合物R

黄酮类化合物R第一页，共六十一页，编辑于2023年，星期二第二页，共六十一页，编辑于2023年，星期二早在20世纪30年代初，欧洲一位获得诺贝尔化学奖的药物化学家从柠檬皮发现了维生素P，后来才知维生素P为多种黄酮组成的一类化合物总称；黄酮类化合物作为保健产品首次引起国际医药界的注意是在20世纪80年代末；

至2003年，黄酮类化合物总数超过9000个。第三页，共六十一页，编辑于2023年，星期二第一节黄酮类化合物的结构与分类第二节黄酮类化合物的理化性质第三节黄酮类化合物的提取与分离第四节黄酮类化合物的鉴定

本章内容第四页，共六十一页，编辑于2023年，星期二一、定义：

以前，黄酮类化合物(flavonoids)主要是指基本母核为2-苯基色原酮(2-phenyl-chromone)类化合物;

现今，黄酮类化合物是泛指两个苯环通过三碳相互连接而成的一系列化合物。第一节结构与分类第五页，共六十一页，编辑于2023年，星期二二、分类依据：母核中三碳链的氧化程度，三碳链是否成环以及B环的连接位置C3-位：无OH

黄酮

有OH

黄酮醇C2－3饱和：二氢黄酮第一节结构与分类第六页，共六十一页，编辑于2023年，星期二C3与B环相连：异黄酮、二氢异黄酮第一节结构与分类第七页，共六十一页，编辑于2023年，星期二C环开环：查耳酮、二氢查尔酮第一节结构与分类第八页，共六十一页，编辑于2023年，星期二C环还原：黄烷类其它类型：花色素类第一节结构与分类第九页，共六十一页，编辑于2023年，星期二

双黄酮类：由两分子黄酮或两分子二氢黄酮或一分子黄酮及一份子二氢黄酮以C-C或C-O-C键连接而成。第一节结构与分类第十页，共六十一页，编辑于2023年，星期二另外，还有黄酮木脂类、生物碱黄酮类第一节结构与分类第十一页，共六十一页，编辑于2023年，星期二例第一节结构与分类(+)-儿茶素

R1=R2=H，大豆素

OHOOHOHOHOHHH第十二页，共六十一页，编辑于2023年，星期二多以苷的形式存在：O-苷和C-苷苷中常见糖的种类：

单糖：D-葡萄糖，D-半乳糖，D-木糖，L-鼠李糖

双糖：槐糖，龙胆二糖，芸香糖（Rha1—6Glc）等

三糖：龙胆三糖，槐三糖

酰化糖：2-乙酰葡萄糖，咖啡酰基葡萄糖第一节结构与分类三、存在形式第十三页，共六十一页，编辑于2023年，星期二

本章内容第一节黄酮类化合物的结构与分类第二节黄酮类化合物的理化性质第三节黄酮类化合物的提取与分离第四节黄酮类化合物的鉴定第十四页，共六十一页，编辑于2023年，星期二一、一般性状形态：多为结晶，少数为无定形粉末。颜色：结构存在交叉共轭体系，因此化合物多有颜色。

黄酮（醇）及其苷：呈黄色-灰黄色

查耳酮：黄-橙色

二氢黄酮（醇）：无色

异黄酮：微黄色

花色素可随着pH值的变化颜色有所不同：

红色（pH<7），紫色(pH8.5)，蓝色(pH>8.5)第二节理化性质第十五页，共六十一页，编辑于2023年，星期二溶解度黄酮(醇),查耳酮：平面型分子二氢黄酮(醇)：非平面型分子花色素：离子苷元：难溶于水，易溶于乙酸乙酯，乙醚等有机溶剂中

苷：易溶于水、乙醇、甲醇中，糖链越长水溶性越大第二节理化性质水中溶解度增加第十六页，共六十一页，编辑于2023年，星期二二、酸碱性酸性：来源分子中的酚羟基；可溶于碱性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺。酸性强弱的比较：取决于羟基的数目和位置：

7,4′-OH>7-或4′-OH>一般Ar-OH>5-OH第二节理化性质（可用于提取、分离及鉴定工作）第十七页，共六十一页，编辑于2023年，星期二来源：1-位氧原子的未共用电子对，显微弱的碱性；可与强酸（如：浓硫酸，盐酸等）生成

盐而溶于酸水中。第二节理化性质碱性：二、酸碱性第十八页，共六十一页，编辑于2023年，星期二三、显色反应（一）还原反应（可用于各类化合物的鉴别）HCl-Mg反应:

多数黄酮、黄酮醇、二氢黄酮及二氢黄酮醇类化合物显橙红~紫红色，少数显紫~蓝色；查耳酮、儿茶素类不显色；异黄酮类一般不显色。(2)HCl－Zn:

（同HCl-Mg反应）第二节理化性质第十九页，共六十一页，编辑于2023年，星期二(3)四氢硼钠（NaBH4)反应：NaBH4是对二氢黄酮（醇）类化合物专属性较高的一种还原剂。

颜色多为橙红-紫红，其它黄酮类化合物均不显色。第二节理化性质第二十页，共六十一页，编辑于2023年，星期二第二节理化性质三、显色反应（二）金属盐类试剂的络合反应黄酮类化合物分子结构中多具有下列结构：可与金属盐类试剂产生络合反应（1）锆盐（4）镁盐（2）铝盐（5）氯化锶（3）铅盐第二十一页，共六十一页，编辑于2023年，星期二（1）锆盐（ZrOCl2）-枸橼酸反应：区分C3-OH和C5-OH第二节理化性质第二十二页，共六十一页，编辑于2023年，星期二（2）铝盐（3）铅盐第二节理化性质可用于定性或定量分析*醋酸铅（中性）：邻二酚、3-OH和4-酮基好或5-OH和4-酮第二十三页，共六十一页，编辑于2023年，星期二（4）镁盐二氢黄酮(醇),显天蓝色荧光,有5-OH更明显第二节理化性质（5）氯化锶（SrCl2）第二十四页，共六十一页，编辑于2023年，星期二（三）硼酸显色反应第二节理化性质三、显色反应——鉴别5-OH黄酮和2-羟基查耳酮

在无机酸或有机酸存在下，反应生成亮黄色。第二十五页，共六十一页，编辑于2023年，星期二（四）碱性试剂

NH3蒸气：颜色加深，可逆；Na2CO3反应不可逆。1)二氢黄酮遇碱开环：生成查耳酮，显橙黄色。2)黄酮醇：在碱液中先呈黄色，通入空气后变为棕色，据此可与其他黄酮区别。3)黄酮类有邻二酚羟基：在OH-中易氧化，生成由黄色深红色

绿棕色沉淀。第二节理化性质三、显色反应第二十六页，共六十一页，编辑于2023年，星期二

HCl-Mg反应HCl-Zn反应NaBH4反应锆-枸橼酸反应SrCl2反应硼酸+草酸反应Molish反应（+）（+）（-）黄色，加枸橼酸,褪色（+）（+）黄色（+）第二节理化性质练习：下面的一个化合物可能发生的反应第二十七页，共六十一页，编辑于2023年，星期二

本章内容第一节黄酮类化合物的结构与分类第二节黄酮类化合物的理化性质第三节黄酮类化合物的提取与分离第四节黄酮类化合物的鉴定第二十八页，共六十一页，编辑于2023年，星期二

一、提取精制

根据化合物的性质，可采取以下提取方法

化合物：极性——溶剂萃取

酸性——碱提酸沉

解离性——离子交换

碳粉吸附法第三节提取与分离第二十九页，共六十一页，编辑于2023年，星期二

溶剂萃取法：

被分离物质与混入的杂质性质不同，选用不同极性溶剂萃取达到去杂质目的。例如：醇提液用石油醚萃取可除去油脂、蜡、叶绿素；

水提液加醇沉淀可去除蛋白、多糖等水溶性杂质。

第三节提取与分离第三十页，共六十一页，编辑于2023年，星期二第三节提取与分离

药材甲醇或乙醇提取，回收醇第三十一页，共六十一页，编辑于2023年，星期二原理：酚羟基与碱成盐，溶于水；加酸后析出。碱：常用饱和Ca(OH)2水溶液，石灰乳，5%NaCO3溶液，稀NaOH水溶液等。优点：可使含酚羟基化合物成盐溶解，另一方面可使含COOH的果胶、粘液质、蛋白质等杂质形成沉淀而除去。第三节提取与分离2.

碱提酸沉法第三十二页，共六十一页，编辑于2023年，星期二第三节提取与分离2.

碱提酸沉法注意：碱性不宜过强，以免破坏黄酮母核；酸化时，酸性不宜过强，pH3~4即可，以免形成佯盐而溶解。第三十三页，共六十一页，编辑于2023年，星期二第三节提取与分离3.离子交换原理：酚羟基与碱成盐，溶于水；采用阴离子交换树脂交换，加酸后析出，用有机溶剂回流提取。第三十四页，共六十一页，编辑于2023年，星期二第三节提取与分离4.

炭粉吸附法（主要适用于苷类的精制）第三十五页，共六十一页，编辑于2023年，星期二二、分离

（一）各种色谱方法：

1）硅胶吸附色谱

按极性大小分离，主要分离极性小和中等极性的化合物。可用CC（柱色谱），PTLC（制备薄层）主要适于分离异黄酮、二氢黄酮、二氢黄酮醇及高度甲基化（或乙酰化）的黄酮及黄酮醇类。少数情况下，在加水去活化后也可用于分离极性较大的化合物，如多羟基黄酮醇及其苷类等。

第三节提取分离方法第三十六页，共六十一页，编辑于2023年，星期二2）聚酰胺色谱：原理：聚酰胺分子中具有酰胺羰基，可与酚羟基形成氢键，主要依据与被分离物质成氢键能力不同进行分离。

吸附强度主要取决于：

①

黄酮类化合物分子中羟基的数目与位置以及溶剂；

②黄酮类化合物酚羟基与聚酰胺之间形成氢键缔合能力的大小。

（形成氢键主要指酚羟基，糖部分不参与形成氢键）

第三节提取与分离第三十七页，共六十一页，编辑于2023年，星期二其洗脱规律：（顺序先—后）

(1)

苷元相同,洗脱先后顺序一般是：

三糖苷>双糖苷>单糖苷>苷元(2)

母核上羟基增加，洗脱速度减慢(3)

羟基数目相同,有缔合羟基>无缔合羟基(4)

不同类型黄酮的洗脱顺序：

异黄酮>二氢黄酮（醇）>查耳酮>黄酮>黄酮醇（芳香核、共轭双键多者吸附力强）第三节提取与分离第三十八页，共六十一页，编辑于2023年，星期二第三节提取与分离习题：下列黄酮化合物，

（1）用聚酰胺柱色谱，含水甲醇梯度洗脱，（2）用硅胶柱色谱分离，氯仿-甲醇梯度洗脱，分别写出洗脱顺序第三十九页，共六十一页，编辑于2023年，星期二第三节提取与分离答案：聚酰胺柱色谱洗脱顺序：由先到后D，E，C，B，A2.用硅胶柱色谱洗脱顺序：由先到后A，B，C，D，E第四十页，共六十一页，编辑于2023年，星期二机理：

分离游离黄酮（苷元）——靠吸附作用。吸附程度取决于游离酚羟基数目，苷元的羟基数越多,越难洗脱。

分离黄酮苷（苷）——分子筛起主导作用。在洗脱时，黄酮苷类按分子量由大到小的顺序流出柱体。常用型号：

Sephadex-G（适用于水溶性成分分离）

Sephadex-LH20（可用于亲脂性成分分离）3）葡聚糖凝胶色谱第三节提取与分离第四十一页，共六十一页，编辑于2023年，星期二例：下列化合物，用凝胶柱色谱，含水甲醇洗脱，写出出柱顺序。第三节提取与分离1）2）先后顺序：A>B>C先后顺序：C>A>B第四十二页，共六十一页，编辑于2023年，星期二应用：分离酸性强弱不同的黄酮苷元酸性比较：7,4’-OH>7-或4’-OH>一般OH>5-OH溶于NaHCO3

Na2CO3

不同浓度的NaOH样品乙醚乙醚液依次萃取5%NaHCO35%Na2CO30.2%NaOH4%NaOH分别酸化各部分黄酮（二）梯度pH萃取法第三节提取与分离第四十三页，共六十一页，编辑于2023年，星期二醋酸铅沉淀法：邻二酚羟基黄酮＋醋酸铅

沉淀不具有邻二酚羟基＋碱式醋酸铅

沉淀（三）利用分子中的特定基团第三节提取与分离第四十四页，共六十一页，编辑于2023年，星期二练习题：从某植物中分离出四种化合物，其结构如下试比较四种化合物的酸性，极性大小比较它们的Rf值大小顺序：1）硅胶TLC2）聚酰胺TLCAR1=R2=HBR1=H,R2=RhaCR1=Glc,R2=HDR1=Glc,R2=Rha酸性A>C>B>D极性D>C>B>ARf：A>B>C>DD>B>C>A第三节提取与分离第四十五页，共六十一页，编辑于2023年，星期二

本章内容第一节黄酮类化合物的结构与分类第二节黄酮类化合物的理化性质第三节黄酮类化合物的提取与分离第四节黄酮类化合物的鉴定第四十六页，共六十一页，编辑于2023年，星期二（一）色谱在黄酮类鉴定中的应用

第四节黄酮类化合物的鉴定1.

纸色谱

苷元：分配层析。流动相：BAW系统。

苷：双向纸层析。第一向：醇性溶剂展开，例如BAW系统，化合物极性大，吸附强。

第二向：水类溶剂展开，例如2-6%HOAC、3%NaCl等，化合物极性大，吸附弱。第四十七页，共六十一页，编辑于2023年，星期二第四节黄酮类化合物的鉴定Rf与结构的关系：

（1）水类溶剂展开时，平面型分子（黄酮、黄酮醇、查耳酮）几乎停留原点不动，非平面型分子（二氢黄酮、二氢查耳酮）Rf较大。（2）醇性溶剂展开时，同一类型苷元，羟基越多，Rf越小。（3）醇性溶剂展开时，苷元相同时，Rf值大小通常为：苷元>单糖苷>双糖苷（4）醇性溶剂展开时，羟基被甲氧基取代，Rf增大。（5）醇性溶剂展开时，羟基糖苷化，极性增大，Rf下降。（2）（3）（4）（5）用酸水展开时，上述顺序颠倒。第四十八页，共六十一页，编辑于2023年，星期二第四节黄酮类化合物的鉴定2.

TLC主要指吸附薄层，常用硅胶TLC，聚酰胺TLC。

硅胶TLC：鉴定弱极性黄酮类化合物。

聚酰胺TLC：分离大多数黄酮及苷类，适用范围广，分离效果好。第四十九页，共六十一页，编辑于2023年，星期二二、紫外光谱法黄酮存在桂皮酰基及苯甲酰基组成的交叉共轭系统，在200~400

nm间，有两个主要的紫外吸收带A环苯甲酰系统峰带II，220~280

nmB环桂皮酰基系统峰带I，300~400nm共性：B环OH增加，峰带

I

红移，特别是4-OH，红移大；

A环OH增加，峰带II红移。（一）第四节黄酮类化合物的鉴定第五十页，共六十一页，编辑于2023年，星期二1.

黄酮、黄酮醇类带I：

黄酮类304~350

nm

黄酮醇（3-OH被取代）328~357

nm

黄酮醇（3-OH游离）352~385

nm带II：

240~285

nm峰带I和II强度相似nmIII第四节黄酮类化合物的鉴定第五十一页，共六十一页，编辑于2023年，星期二取代基的影响：带I：母核上的－OH、－OCH3等供电基，可引起相应吸收带红移。氧取代程度越高，带I红移越大。羟基甲基化或苷化，将引起紫移。带II：峰位主要受A-环氧取代程度的影响，氧取代程度越高，带II越向红移。第四节黄酮类化合物的鉴定第五十二页，共六十一页，编辑于2023年，星期二2.

查耳酮类nmIII

查耳酮

带

I340~390

nm

(有裂分)带II220~270

nm带I强，带II次强峰第四节黄酮类化合物的鉴定第五十三页，共六十一页，编辑于2023年，星期二3.

异黄酮、二氢黄酮(醇)类nmIII只有A-环苯甲酰系统，带II为主峰带II：异黄酮245~270

nm二氢黄酮（醇）270~295

nm带I弱，带II强峰第四节黄酮类化合物的鉴定第五十四页，共六十一页，编辑于2023年，星期二（二）利用诊断试剂，判断羟基位置1.

甲醇钠（NaOMe）黄酮类化合物上所有酚羟基，均可在NaOMe中成盐，引起红移。确定4'-OH黄酮（醇）类：a.

带

I位移

40~60

nm,强度不降。示有4'-OH.b.

带

I

红移

50~60

nm,强度下降。示有3-OH,但无

4'-OH。第四节黄酮类化合物的鉴定第五十五页，共六十一页，编辑于2023年，星期二2.

醋酸钠（NaOAc）NaOAc碱性较NaOMe弱，只能使7-OH，4'-OH解离。确定7-OH黄酮（醇）：带II红移

5~20

nm，示有7-OH.二氢黄酮（醇）：带II红移

60

nm，示有7-OH.带II红移

35

nm，示有5、7-OH.第四节黄酮类化合物的鉴定异黄酮：带

II红移

6~20

nm，示有

7-OH。

第五十六页，共六十一页，编辑于2023年，星期二异黄酮，二氢黄酮（醇）：带II红移10~15

nm，A环具邻二酚羟基(除5,6-二OH)。第四节黄酮类化合物的鉴定3.NaOAc/H3BO3邻二酚羟基在NaOAc碱性下，可与H3BO3螯合，引起红移。

黄酮（醇）：带

I红移12~30

nm；B

环具邻二酚羟基。带

II红移5~10

nmA

环具邻二酚羟