腺病毒载体工艺平台介绍课件

源兴基因药物研发中心腺病毒载体工艺平台介绍2023/6/71基因药物研发中心研发中心厂房及设备源兴基因药物研发中心建筑面积1900多平方米，其中符合国家GMP要求的洁净厂房面积1600多平方米，包括原液生产车间、制剂生产车间、质量控制实验室以及研发实验室。研发中心配置了NBS细胞罐、AKTA纯化系统、高速冷冻离心机、切向流超滤系统、二氧化碳培养箱、生物安全柜、分析型HPLC系统、PCR仪、电泳仪、酶标仪、超声波破碎仪、超声波西林瓶清洗机、隧道式灭菌烘箱、液体灌装加塞机、轧盖机、凝胶扫描成像系统、超纯水仪、多效蒸馏水机等仪器设备。

能够满足腺病毒载体药物研发、生产和质量控制的要求。

2023/6/72基因药物研发中心2023/6/73基因药物研发中心2023/6/74基因药物研发中心2023/6/75基因药物研发中心2023/6/76基因药物研发中心2023/6/77基因药物研发中心2023/6/78基因药物研发中心2023/6/79基因药物研发中心研发中心生产系统组织图总经理生产总监工艺开发部（10人）质控部（5人）设备工程部（4人）物控部（3人）细胞病毒培养纯化制剂分装清洁辅助2023/6/710基因药物研发中心研发队伍打造了一支技术过硬的研发队伍，能够保证工艺水平及产品质量稳定。历经多次新药申报，比较熟悉新药审评程序和规定，积累了较丰富的申报经验，能够比较顺利的解决有关问题。2023/6/711基因药物研发中心管理制度建立了300多个SOP、SMP等标准程序和规章管理制度，按照GMP要求严格规范管理。2023/6/712基因药物研发中心研发中心工艺平台研发中心工艺产业化平台是通用型腺病毒载体药物生产工艺和质量标准研究的药学技术平台，中试生产工艺水平达到了国内同行业先进水平，可以在产量及质量上满足腺病毒载体药物临床前和临床用样品制备的要求。本工艺拥有自主知识产权，可作为腺病毒载体新药研发及生产的技术基础。5L细胞罐收获物经纯化后产量能达到E15VP/批，注射液制剂工艺达到了小容量水针1万支/批的生产能力。产品纯度大于98%，比滴度大于3.3%，各项质检结果都能达到FDA对腺病毒类生物制品的质量标准要求。2023/6/713基因药物研发中心研发中心已完成申报临床所需药学研究的品种品种代号研究单位研究时间治疗性重组HBV腺病毒疫苗CHB3源兴2004年3月至2005年11月治疗性HIV腺病毒载体疫苗H30源兴2005年12月至2007年8月治疗性重组腺病毒EB病毒潜伏膜抗原疫苗LMP2CDC病毒病所委托源兴承担药学研究2007年9月至2008年10月2023/6/714基因药物研发中心新药申报三方面研究内容

药学研究药效研究安全评价2023/6/715基因药物研发中心药学研究主要内容上游构建及鉴定细胞/毒种研究及三级库建立原液工艺研究制剂工艺研究检测方法及质量标准研究稳定性研究试制三批样品2023/6/716基因药物研发中心细胞及毒种研究细胞检定、传代稳定性研究毒种检定、代次及遗传稳定性研究2023/6/717基因药物研发中心建细胞库原始细胞细胞来源于ATCC主细胞库质量控制工作细胞库质量控制细胞扩增细胞扩增

2023/6/718基因药物研发中心建毒种库工作种子批病毒扩增原始种子批主种子批鉴定检测质量控制质量控制病毒扩增2023/6/719基因药物研发中心原液工艺流程、参数及技术指标Sepharose6FastFlow分子筛层析回收率（3批平均）

重组腺病毒种子罐收获物超滤浓缩液SOURCE30Q阴离子交换柱层析层析收集液原液6000RPM离心20min500K膜超滤浓缩10倍细胞种子细胞罐扩增5L罐细胞培养，病毒扩增：DO60%,37℃,pH7.2,耗糖40g/d接种病毒，MOI为20

H30产量（3批平均）

53%460ml1.1×1015VP2023/6/720基因药物研发中心细胞罐工艺细胞复苏培养毒种制备罐细胞培养罐细胞染毒罐病毒培养纯化2023/6/721基因药物研发中心细胞罐葡萄糖消耗监控曲线图2023/6/722基因药物研发中心细胞罐产毒浓度曲线2023/6/723基因药物研发中心细胞罐病毒收获曲线2023/6/724基因药物研发中心纯化工艺罐病毒收获液离心超滤浓缩离子交换层析酶切分子筛层析原液2023/6/725基因药物研发中心纯化图谱2023/6/726基因药物研发中心制剂工艺流程图病毒保存液原液半成品配制除菌分装轧盖灯检贴签包装、贮存铝盖清洗、烘干胶塞灭菌西林瓶清洗、干烤检测检测

2023/6/727基因药物研发中心制剂处方筛选结果从以上结果可以看出，处方Ⅰ为最优，处方Ⅱ次之，处方Ⅲ最差，处方Ⅳ较差。于是将处方确定为处方Ⅰ。

不同处方贮存情况比较图0.00E+005.00E+081.00E+091.50E+092.00E+092.50E+093.00E+093.50E+094.00E+094.50E+09012345678贮存时间（周）滴度（IU/ml）处方1处方2处方3处方42023/6/728基因药物研发中心

质量标准及检测方法检测项目注射液方法外观（含可见异物）符合药典相应规定中国药典三部附录ⅤBpH值7.0－8.0中国药典三部附录ⅤA装量≥1.0ml中国药典三部附录ⅠA鉴别试验符合相应的规定PCR法病毒颗粒数1.0×1011VP/ml(80-150%)UV法比滴度（IU/Vp）≥3.3%TCID50法HPLC纯度≥95%HPLC法小鼠效力试验阳性率≥60%ELISPOT法293细胞DNA残留量≤10ng/剂量用地高辛试剂盒方法（固相斑点杂交法）牛血清白蛋白残留量≤100ng/剂量ELISA法RCA＜1RCA/3×1010VPA549细胞检测法（空斑法）AAV检测不得检出PCR法293细胞蛋白残留量≤100ng/剂量ELISA法无菌试验（含支原体）阴性中国药典三部附录ⅫA和ⅫB细菌内毒素＜10EU/剂量中国药典三部附录ⅫE小鼠异常毒性试验符合规定中国药典三部附录ⅫF2023/6/729基因药物研发中心HPLC纯度2023/6/730基因药物研发中心免疫荧光检测2023/6/731基因药物研发中心

稳定性研究试验结果

稳定性试验结果表明，在-80℃、-20℃和2-8℃存放9个月，本品质量都保持稳定，而在37℃其质量有显著下降。

不同温度贮存情况图0.00E+005.00E+081.00E+091.50E+092.00E+092.50E+093.00E+093.50E+094.00E+094.50E+090周1周2周3周4周5周6周2月3月6月9月贮存时间滴度（IU/ml）-80℃-20℃2－8℃37℃2023/6/732基因药物研发中心生物制品药学研究申报资料《药品注册管理办法》药学研究资料

7.药学研究资料综述。

8.生产用原材料研究资料：（1）生产用动物、生物组织或细胞、原料血浆的来源、收集及质量控制等研究资料；（2）生产用细胞的来源、构建（或筛选）过程及鉴定等研究资料；（3）种子库的建立、检定、保存及传代稳定性资料；（4）生产用其它原材料的来源及质量标准。

9.原液或原料生产工艺的研究资料，确定的理论和实验依据及验证资料。

10.制剂处方及工艺的研究资料，辅料的来源和质量标准，及有关文献资料。

11.质量研究资料及有关文献，包括参考品或者对照品的制备及标定,以及与国内外已上市销售的同类产品比较的资料。

12.临床试验申请用样品的制造和检定记录（连续3批）。

13.制造和检定规程草案，附起草说明及检定方法验证资料。

14.初步稳定性研究资料。

15.直接接触制品的包装材料和容器的选择依据及质量标准。2023/6/733基因药物研发中心样品试制条件要求《药品注册现场核查管理规定》☆临床试验用药物应当在符合《药品生产质量管理规范》的车间制备。制备过程应当严格执行《药品生产质量管理规范》的要求。☆样品的原始批生产记录与申报资料工艺一致。☆必须通过药监局现场核查。2023/6/734基因药物研发中心腺病毒产品药学研究的核心生产工艺的可放大性及稳定性样品必须用具有规模放大性、可稳定批量生产的工艺制备检验方法经过验证产品质量必须通过中检所复核2023/6/735基因药物研发中心腺病毒产品药学研究的关键点★建立毒种产业化应用标准和评估方法比滴度

SFDA要求腺病毒制品比滴度≥3.3%。

产量单细胞产量是否适合产业化应用。

通过毒种构建和工艺优化来解决。★建立质量标准★按照GMP条件试生产

如样品试制所需的原辅料、直接接触药品的包装材料等是否具有合法来源（如供货协议、发票、出入库凭证等）及质量合格证明（如检验报告）……★三批注册抽检样品及临床研究用样品必须通过中检所检验合格。2023/6/736基因药物研发中心

THANKYOU2023/6/737基因药物研发中心

1、最孤独的时光，会塑造最坚强的自己。

2、把脸一直向着阳光，这样就不会见到阴影。

3、永远不要埋怨你已经发生的事情，要么就改变它，要么就安静的接受它。

4、不论你在什么时候开始，重要的是开始之后就不要停止。

5、通往光明的道路是平坦的，为了成功，为了奋斗的渴望，我们不得不努力。

6、付出了不一定有回报，但不付出永远没有回报。

7、成功就是你被击落到失望的深渊之后反弹得有多高。

8、为了照亮夜空，星星才站在天空的高处。

9、我们的人生必须励志，不励志就仿佛没有灵魂。

10、拼尽全力，逼自己优秀一把，青春已所剩不多。

11、一个人如果不能从内心去原谅别人，那他就永远不会心安理得。

12、每个人心里都有一段伤痕，时间才是最好的疗剂。

13、如果我不坚强，那就等着别人来嘲笑。

14、早晨给自己一个微笑，种下一天旳阳光。

15、没有爱不会死，不过有了爱会活过来。

16、失败的定义：什么都要做，什么都在做，却从未做完过，也未做好过。

17、当我微笑着说我很好的时候，你应该对我说，安好就好。

18、人不仅要做好事，更要以准确的方式做好事。

19、我们并不需要用太华丽的语言来包裹自己，因为我们要做最真实的自己。

20、一个人除非自己有信心，否则无法带给别人信心。

21、为别人鼓掌的人也是在给自己的生命加油。

22、失去金钱的人损失甚少，失去健康的人损失极多，失去勇气的人损失一切。

23、相信就是强大，怀疑只会抑制能力，而信仰就是力量。

24、那些尝试去做某事却失败的人，比那些什么也不尝试做却成功的人不知要好上多少。

25、自己打败自己是最可悲的失败，自己战胜自己是最可贵的胜利。

26、没有热忱，世间便无进步。

27、失败并不意味你浪费了时间和生命，失败表明你有理由重新开始。

28、青春如此华美，却在烟火在散场。

29、生命的道路上永远没有捷径可言，只有脚踏实地走下去。

30、只要还有明天，今天就永远是起跑线。

31、认真可以把事情做对，而用心却可以做到完美。

32、如果上帝没有帮助你那他一定相信你可以。

33、只要有信心，人永远不会挫败。

34、珍惜今天的美好就是为了让明天的回忆更美好。

35、只要你在路上，就不要放弃前进的勇气，走走停停的生活会一直继续。

36、大起大落谁都有拍拍灰尘继续走。

37、孤独并不可怕，每个人都是孤独的，可怕的是害怕孤独。

38、宁可失败在你喜欢的事情上，也不要成功在你所憎恶的事情上。

39、我很平凡，但骨子里的我却很勇敢。

40、眼中闪烁的泪光，也将化作永不妥协的坚强。

41、我不去想是否能够成功，既然选了远方，便只顾风雨兼程。

42、宁可自己去原谅别人，莫等别人来原谅自己。

43、踩着垃圾到达的高度和踩着金子到达的高度是一样的。

44、每天告诉自己一次：我真的很不错。

45、人生最大的挑战没过于战胜自己！

46、愚痴的人，一直想要别人了解他。有智慧的人，却努力的了解自己。

47、现实的压力压的我们喘不过气也压的我们走向成功。

48、心若有阳光，你便会看见这个世界有那么多美好值得期待和向往。

49、相信自己，你能作茧自缚，就能破茧成蝶。

50、不能强迫别人来爱自己，只能努力让自己成为值得爱的人。

51、不要拿过去的记忆，来折磨现在的自己。

52、汗水是成功的润滑剂。

53、人必须有自信，这是成功的秘密。

54、成功的秘密在于始终如一地忠于目标。

55、只有一条路不能选择――那就是放弃。

56、最后的措手不及是因为当初游刃有余的自己

57、现实很近又很冷，梦想很远却很温暖。

58、没有人能替你承受痛苦，也没有人能抢走你的坚强。

59、不要拿我跟任何人比，我不是谁的影子，更不是谁的替代品，我不知道年少轻狂，我只懂得胜者为。

60、如果你看到面前的阴影，别怕，那是因为你的背后有阳光。

61、宁可笑着流泪，绝不哭着后悔。

62、觉得自己做得到和做不到，只在一念之间。

63、跌倒，撞墙，一败涂地，都不用害怕，年轻叫你勇敢。

64、做最好的今天，回顾最好的昨天，迎接最美好的明天。

65、每件事情都必须有一个期限，否则，大多数人都会有多少时间就花掉多少时间。

66、当你被压力压得透不过气来的时候，记住，碳正是因为压力而变成闪耀的钻石。

67、现实会告诉你，不努力就会被生活给踩死。无需找什么借口，一无所有，就是拼的理由。

68、人生道路，绝大多数人，绝大多数时候，人都只能靠自己。

69、不是某人使你烦恼，而是你拿某人的言行来烦恼自己。

70、当一个人真正觉悟的一刻，他放弃追寻外在世界的财富，而开始追寻他內心世界的真正财富。

71、失败并不意味你浪费了时间和生命，失败表明你有理由重新开始。

72、人生应该树立目标，否则你的精力会白白浪费。

73、山涧的泉水经过一路曲折，才唱出一支美妙的歌。

74、时间告诉我，无理取闹的年龄过了，该懂事了。

75、命运是不存在的，它不过是失败者拿来逃避现实的借口。

76